癌易感性候選基因2表達(dá)與惡性腫瘤預(yù)后相關(guān)性的系統(tǒng)評(píng)價(jià)

羅劍 王媛媛 李愛玲 馮華君 許勝恩 趙沖 覃綱

1西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科（四川瀘州646000）；2西南醫(yī)科大學(xué)循證醫(yī)學(xué)中心（四川瀘州646000）

盡管癌癥領(lǐng)域研究不斷取得進(jìn)步，但其臨床結(jié)果仍然很差，主要原因之一是缺乏有效的生物標(biāo)志物來對(duì)癌癥做出早期診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)，故尋找具有潛力的癌癥患者診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物顯得尤為必要。長鏈非編碼RNA（long non?coding RNA，lncRNA）是長度＞200個(gè)核苷酸的一類轉(zhuǎn)錄物，具有有限的蛋白編碼能力［1］。越來越多的研究表明lncRNA參與了很多腫瘤發(fā)生的生物過程，包括增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡［2］。位于第10q26染色體上的lncRNA癌易感性候選基因2（cancer susceptibili?ty candidate 2，CASC2）最初在子宮內(nèi)膜癌中被發(fā)現(xiàn)［3］。ZHAO 等［4］發(fā)現(xiàn)低表達(dá)的 CASC2可通過調(diào)節(jié)miR?362?5p/NF?κB軸從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移；XIONG等［5］發(fā)現(xiàn)在甲狀腺癌中CASC2的低表達(dá)與更高的TNM分期呈顯著的相關(guān)性；ZHOU等［6］也發(fā)現(xiàn)在胃癌中CASC2的低表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、更高的TNM分期和血管侵襲呈顯著的相關(guān)性，提示CASC2低表達(dá)可能會(huì)影響癌癥患者的生存情況。故本研究對(duì)已檢索到的全部相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，以探究CASC2的表達(dá)情況與惡性腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1 研究類型探究癌癥患者CASC2異常表達(dá)與其預(yù)后相關(guān)性的病例?對(duì)照研究。

1.1.2 研究對(duì)象均經(jīng)過組織病理學(xué)確診的腫瘤患者，且所有病例均具有詳細(xì)的臨床病理資料。

1.1.3 暴露因素CASC2的低表達(dá)為暴露因素，結(jié)果判讀根據(jù)原始文獻(xiàn)臨界值區(qū)分。采用qRT?PCR法檢測(cè)CASC2的表達(dá)情況。

1.1.4 結(jié)局指標(biāo)（1）臨床特征：主要包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期；（2）總生存期。

1.1.5 排除標(biāo)準(zhǔn)（1）重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)；（2）研究與癌癥或CASC2無關(guān)；（3）動(dòng)物研究；（4）缺乏列入納入研究標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)據(jù)；（5）評(píng)論或摘要。

1.2 文獻(xiàn)檢索策略計(jì)算機(jī)檢索PubMed、Web of Science、Embase、Cochrane Library、OVID、中國知網(wǎng)、萬方和維普等數(shù)據(jù)庫，搜索關(guān)于CASC2異常表達(dá)與腫瘤患者預(yù)后相關(guān)性的文獻(xiàn)，截止時(shí)間為2018年5月9日。英文檢索詞：long non?coding RNA、lncRNA、lincRNA、CASC2、cancer susceptibility can?didate 2、tumor、cancer、carcinoma、neoplasms。中文檢索詞：長鏈非編碼RNA、CASC2、癌易感性候選基因2、腫瘤、惡性腫瘤、癌等。該策略在不同的數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行了調(diào)整，以最大限度地檢索更多原始文獻(xiàn)。此外，進(jìn)行手工檢索專業(yè)期刊，以補(bǔ)充獲取相關(guān)文獻(xiàn)。

1.3 文獻(xiàn)篩選與資料提取由2位研究員獨(dú)立提取并檢查所選原始文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)。評(píng)估意見分歧通過與第3位研究員達(dá)成共識(shí)來解決。資料提取內(nèi)容主要包括：（1）納入研究的基本信息，包括研究題目、第一作者和發(fā)表時(shí)間等；（2）納入研究的基線特征，包括腫瘤類型、患者性別、樣本數(shù)、CASC2表達(dá)水平及檢驗(yàn)方法；（3）結(jié)局指標(biāo)：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期及總生存期等，從文中直接提取或運(yùn)用Engauge Digitizer5.1軟件從生存曲線上獲取所需數(shù)據(jù)，通過計(jì)算獲得總生存期的風(fēng)險(xiǎn)比（hazard ratio，HR）；（4）偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)的關(guān)鍵要素。

1.4 納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)采用紐卡斯?fàn)?渥太華量表（Newcastle?Ottawa scale，NOS）［7］對(duì)納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。包括研究對(duì)象的選擇，設(shè)計(jì)分析中的可比性，暴露及結(jié)局情況。由2名研究員獨(dú)立進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)偏倚評(píng)價(jià)，對(duì)存在的意見和分歧由第3名研究員評(píng)價(jià)解決。評(píng)分≥7分，則認(rèn)為質(zhì)量較高。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法統(tǒng)計(jì)分析采用RevMan 5.2軟件進(jìn)行。通過Q和I2測(cè)試來測(cè)量不同研究之間的異質(zhì)性。I2≥50%的概率值和P＜0.1表明存在顯著的異質(zhì)性，基于異質(zhì)性分析的結(jié)果選擇隨機(jī)效應(yīng)模型或固定效應(yīng)模型。如果研究之間存在顯著的異質(zhì)性，則使用隨機(jī)效應(yīng)模型，否則使用固定效應(yīng)模型。使用比值比（odds ratio，OR）作為匯總統(tǒng)計(jì)來分析二分類數(shù)據(jù)。通過匯集HR與其相應(yīng)的95%CI分析CASC2與癌癥患者存活之間的關(guān)聯(lián)。P＜0.05說明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)篩選流程及結(jié)果檢索英文數(shù)據(jù)庫初次共獲得93篇文獻(xiàn)；檢索中文數(shù)據(jù)庫初次獲得13篇文獻(xiàn)。通過閱讀題目、摘要進(jìn)行初篩，再通讀全文進(jìn)行復(fù)篩，最終納入 13 篇符合條件的文獻(xiàn)［4?6，8?17］，文獻(xiàn)篩選流程見圖1。所檢索的數(shù)據(jù)庫及檢出文獻(xiàn)數(shù)具體如下：PubMed（n＝34）、Web of Science（n＝29）、Embase（n＝29）、The Cochrane Library（n＝0）、OVID（n＝0）、中國知網(wǎng)（n＝3）、萬方（n＝8）、維普（n＝2）。

圖1 文獻(xiàn)檢索及篩選流程圖Fig.1 Flow chart of document search and screening

2.2 納入研究的基本特征和偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)結(jié)果納入研究均分為CASC2高表達(dá)組和低表達(dá)組。預(yù)后共納入13項(xiàng)研究，共923例患者。13項(xiàng)研究均來自中國。納入研究的基本特征及風(fēng)險(xiǎn)偏倚評(píng)價(jià)結(jié)果見表1。

2.3 Meta分析結(jié)果

2.3.1 CASC2表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性共5個(gè)研究［5，9，13?15］報(bào)告了發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達(dá)情況。固定效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達(dá)與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR＝0.76，95%CI＝0.48～1.20）（圖2）。

表1 納入研究的基本特征Tab.1 Basic characteristics of the studies

圖2 描述CASC2表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性的森林圖Fig.2 Forest plot of the correlation between CASC2 expression and lymph node metastasis in patients

2.3.2 CASC2表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性共4個(gè)研究［5?6，13，16］報(bào)告了發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組和未遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達(dá)情況。固定效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達(dá)與未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR＝0.74，95%CI＝0.42～1.32）（圖3）。

2.3.3 CASC2表達(dá)與TNM分期的相關(guān)性共12個(gè)研究［4?6，8?16］報(bào)告了 TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者中CASC2的表達(dá)情況。固定效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示，Ⅲ～Ⅳ期組患者中CASC2的表達(dá)低于Ⅰ～Ⅱ期組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR＝0.31，95%CI＝0.23～0.4）（圖4）。

2.3.4 CASC2表達(dá)與總生存期的相關(guān)性共11個(gè)研究［4?6，8，10?12，14?17］提供了患者的總生存期。固定效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示：與CASC2高表達(dá)組相比，CASC2低表達(dá)組患者的總生存期更短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（HR＝0.46，95%CI＝0.37～0.58）（圖5）。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)lncRNAs參與癌細(xì)胞各種信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中起著重要作用［18］。大量研究表明lncRNAs的異常表達(dá)與癌癥患者的預(yù)后相關(guān)，如肝癌高表達(dá)轉(zhuǎn)錄本［19］和HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA［20］等被認(rèn)為是預(yù)測(cè)人類癌癥不良預(yù)后的新型生物標(biāo)志物。

圖3 描述CASC2表達(dá)與患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)性的森林圖Fig.3 Forest plot of the correlation between CASC2 expression and distant metastasis in patients

圖4 描述CASC2表達(dá)與TNM分期相關(guān)性的森林圖Fig.4 Forest plot of the correlation between CASC2 expression and TNM staging

圖5 描述CASC2表達(dá)與總生存期相關(guān)性的森林圖Fig.5 Forest plot of the correlation between CASC2 expression and overall survival time

很多研究表明CASC2在各種腫瘤的發(fā)生中扮演著抑癌基因的角色。CHEN等［17］發(fā)現(xiàn)低表達(dá)的CASC2可調(diào)節(jié)高遷移率族蛋白A2的表達(dá)從而促進(jìn)垂體腺瘤細(xì)胞的增值和侵襲，抑制其凋亡。來自于WANG等［12］的研究表明CASC2表達(dá)降低時(shí)促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。然而，WANG等［14］發(fā)現(xiàn)過表達(dá)的CASC2通過調(diào)節(jié)性別決定區(qū)Y框蛋白4從而抑制肺腺癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移及上皮間皮轉(zhuǎn)化。LIAO等［10］發(fā)現(xiàn)過表達(dá)的CASC2通過抑制Wnt/β?catenin信號(hào)通路從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。基于上述有關(guān)CASC2研究的結(jié)果，推測(cè)CASC2在癌癥患者中可能具有潛在的預(yù)后價(jià)值。但CASC2作為人類癌癥分子生物標(biāo)志物的作用尚不清楚。

本研究利用Meta分析探討了CASC2在癌癥患者預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值，發(fā)現(xiàn)CASC2的低表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均無關(guān)。低表達(dá)的CASC2與較晚的TNM分期存在顯著相關(guān)性，且CASC2的表達(dá)還與癌癥患者總生存期存在顯著正相關(guān)，提示CASC2可能是評(píng)估癌癥患者預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物，臨床上醫(yī)生應(yīng)該更多地關(guān)注CASC2低表達(dá)的癌癥患者。

應(yīng)該承認(rèn)本研究存在一些局限性：（1）所有納入的研究均來自中國，因此所獲數(shù)據(jù)可能缺乏全球推斷；（2）癌癥的類型和數(shù)量較少；（3）不同研究的低表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)各不相同。

綜上，本研究提示CASC2的低表達(dá)與較晚的TNM分期和較短的總生存期有關(guān)，CASC2低表達(dá)可能是癌癥患者不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素。受納入研究的總樣本數(shù)量、文獻(xiàn)質(zhì)量和地域的影響，尚需開展更為高質(zhì)量的研究予以驗(yàn)證上述結(jié)論。