γ-干擾素的釋放對(duì)肺結(jié)核的輔助診斷價(jià)值分析

蔣麗

結(jié)核病是慢性消耗性疾病，感染性較強(qiáng)。我國(guó)結(jié)核病發(fā)病率較高，我國(guó)≥15歲人口中有高達(dá)499萬(wàn)的活動(dòng)性結(jié)核病患者[1]。細(xì)菌學(xué)檢查是活動(dòng)性肺結(jié)核的常用方法，但因結(jié)核菌培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，在臨床上會(huì)出現(xiàn)誤診或漏診。結(jié)核菌素試驗(yàn)作為輔助診斷肺結(jié)核的重要指標(biāo)，因抗原純蛋白衍生物與卡介苗的抗原有某些相同而引發(fā)特異性降低，當(dāng)人體免疫功能降低時(shí)，結(jié)核菌素試驗(yàn)(TST)診斷的敏感性也不斷下降[2]。因此，探尋一種快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，對(duì)于結(jié)核病的預(yù)防尤為重要。γ-干擾素(IFN-γ)是特異性細(xì)胞因子，由結(jié)核致敏的T淋巴細(xì)胞釋放。近年來(lái)γ-干擾素釋放試驗(yàn)(IGRAs)作為一種新型的免疫學(xué)診斷方法，已經(jīng)逐步應(yīng)用在肺結(jié)核的臨床診斷中[3]。本文對(duì)IGRAs對(duì)肺結(jié)核的輔助診斷價(jià)值報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2017年5月至2018年5月初次確診為活動(dòng)性肺結(jié)核病患者120例，作為觀察組，均經(jīng)過(guò)病理學(xué)確診，男69例，女51例，年齡43～80歲，平均年齡(47.15±7.83)；選取同期非活動(dòng)性肺結(jié)核病患者120例，作為對(duì)照組，男63例，女57例，年齡41～82歲，平均年齡(45.48±6.73)歲。兩組均行人類免疫缺陷病毒抗體檢測(cè)，均未使用免疫抑制劑或增強(qiáng)劑，結(jié)果均顯陰性且無(wú)合并妊娠，無(wú)心肝腎功能衰竭史，所有受試者均知情同意參與。兩組患者的性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 方法 兩組研究對(duì)象均行IGRAs檢測(cè)及TST檢測(cè)。

1.2.1 IGRAs檢測(cè) 采用Oxford Immunotec公司的IGRAs試劑盒，治療前取5 mL枸櫞酸鈉抗凝靜脈血進(jìn)行檢測(cè)。分離外周血得到單個(gè)核細(xì)胞，制備成濃度為2.0×106/mL的細(xì)胞懸液。細(xì)胞培養(yǎng)液和植物血凝素PHA分別作為陰性和陽(yáng)性對(duì)照，結(jié)核菌特異性抗原 ESAT-6和CFP-10作為刺激抗原。微孔板中各孔均加入含2.5×105個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，將其放在含5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～20 h，洗板后加入生物素標(biāo)記的二抗，在2～8℃環(huán)境下反應(yīng)1 h，后加入顯色底物液，室溫靜置7 min，加入去離子水終止反應(yīng)。采用CTL酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)系統(tǒng)記錄斑點(diǎn)數(shù)。

1.2.2 TST檢測(cè)方法 在研究對(duì)象左側(cè)前臂1/3皮下注射PPD試劑 (北京祥瑞生物制品有限公司生產(chǎn))，72 h后觀察硬結(jié)情況。.

1.3 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) IGRAs檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)[4]：當(dāng)空白對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)＜6時(shí)，任一試驗(yàn)孔斑點(diǎn)數(shù)減去空白孔斑點(diǎn)數(shù)≥6，結(jié)果即為陽(yáng)性；若空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6，任一試驗(yàn)孔斑點(diǎn)數(shù)≥2倍空白孔斑點(diǎn)數(shù)結(jié)果也為陽(yáng)性。

TST檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)[5]：主要參照《全國(guó)結(jié)核病防治工作手冊(cè)》，患者有直徑≥15 mm紅腫硬結(jié)或有水泡或破潰者判為陽(yáng)性，否則判為陰性。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察靈敏度、特異度、陽(yáng)性率、陰性率指標(biāo)。靈敏度＝真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性＋假陰性)×100%；特異度＝真陰性/(真陰性＋假陽(yáng)性)×100%；陽(yáng)性率＝真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性＋假陽(yáng)性)×100%；陰性率＝真陰性/(真陰性＋假陰性)×100%

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18.0分析，兩種檢測(cè)方法的診斷準(zhǔn)確度采用率表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IGRAs及TST檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率比較 本次研究中，觀察組和對(duì)照組經(jīng)IGRAs確診的結(jié)核病患者分別有112例和9例，對(duì)應(yīng)IGRAs對(duì)結(jié)核病檢測(cè)陽(yáng)性率分別為93.3%(112/120)、7.5%(9/120)；觀察組和對(duì)照組經(jīng)TST確診的結(jié)核病患者分別有55例和19例，對(duì)應(yīng)TST對(duì)結(jié)核病檢測(cè)陽(yáng)性率分別為45.8%(55/120)、15.8%(19/120)，IGRAs對(duì)結(jié)核病檢測(cè)陽(yáng)性率(93.3%)明顯高于TST(45.8%)，組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表1)。

表1 IGRAs及TST檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率比較[n(%)]

2.2 觀察組IGRAs及TST試驗(yàn)在診斷結(jié)核病敏感性和特異性上的比較 我們對(duì)觀察組患者進(jìn)行影像學(xué)及組織病理學(xué)檢查，以其結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)判斷，統(tǒng)計(jì)觀察組患者進(jìn)行IGRAs及TST試驗(yàn)的敏感性、特異性、陽(yáng)性率及陰性率。IGRAs試驗(yàn)中真陽(yáng)性69例，真陰性41例，假陰性6例，假陽(yáng)4性例，其對(duì)敏感性、特異性、陽(yáng)性率、陰性率分別為92.0%、91.1%、94.4%、93.8%；TST試驗(yàn)中真陽(yáng)性38例，真陰性35例，假陰性37例，假陽(yáng)性10例，其對(duì)敏感性、特異性、陽(yáng)性率、陰性率分別為50.7%、77.8%、81.9%、79.2%。IGRAs試驗(yàn)敏感性、特異性、陽(yáng)性率、陰性率顯著高于TST試驗(yàn)方法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表2)。

表2 觀察組IGRAs及TST試驗(yàn)在診斷結(jié)核病敏感性和特異性上的比較 單位：%

3 討論

結(jié)核病是一種慢性消耗性疾病，由結(jié)核分枝桿菌侵入人體后引起的，具有極強(qiáng)的感染性。我國(guó)結(jié)核病發(fā)病率非常高，我國(guó)≥15歲人口中有高達(dá)499萬(wàn)的活動(dòng)性結(jié)核病患者。細(xì)菌學(xué)檢查是活動(dòng)性肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)，但因結(jié)核菌培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，在臨床上會(huì)出現(xiàn)誤診或漏診。TST作為輔助診斷肺結(jié)核的重要指標(biāo)，因抗原純蛋白衍生物與卡介苗的抗原有某些相同而引發(fā)特異性降低，且當(dāng)人體免疫功能降低時(shí)，TST檢測(cè)的敏感度也隨之大幅降低。所以，對(duì)于肺結(jié)核的控制及預(yù)防，準(zhǔn)確快速的試驗(yàn)方法起到了關(guān)鍵性作用。

IGRAs是一種診斷結(jié)核病的新型檢測(cè)方法，其由酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)演變而來(lái)?；颊吒腥痉谓Y(jié)核后，結(jié)核分枝桿菌可產(chǎn)生CFP-10和ESAT-6兩種特有抗原，抗原刺激T淋巴細(xì)胞后，反應(yīng)產(chǎn)生γ-干擾素使得患者外周血γ-干擾素水平異常，從而來(lái)診斷是否感染結(jié)核分枝桿菌，此抗原可區(qū)分真性結(jié)核感染，排除疫苗接種及非結(jié)核病感染的干擾[6]。傳統(tǒng)的結(jié)核病菌素試驗(yàn)是基于Ⅳ型反應(yīng)的臨床檢測(cè)方法，其原理是向患者上臂注射結(jié)核菌素蛋白衍生物，觀察患者3 d后皮膚反應(yīng)情況。因結(jié)核菌素蛋白衍生物含有CFP-10和ESAT-6特異性抗原，能夠與卡介苗產(chǎn)生反應(yīng)，如若患者不清楚自己是否打過(guò)卡介苗，可能會(huì)產(chǎn)生誤診，從而一定程度降低了TST的特異度。我們研究結(jié)果顯示，觀察組中120例初診結(jié)核病患者通過(guò)IGRAs試驗(yàn)檢查發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性112例，陽(yáng)性率為93.3%；觀察組經(jīng)TST確診的結(jié)核病患者有55例，對(duì)應(yīng)TST對(duì)結(jié)核病檢測(cè)陽(yáng)性率為45.8%，IGRAs對(duì)結(jié)核病檢測(cè)陽(yáng)性率(93.3%)明顯高于TST檢測(cè)(45.8%)。研究結(jié)果表明[7-10]，IGRAs診斷方法表現(xiàn)出較高的敏感性及特異性，對(duì)于活動(dòng)性肺結(jié)核可以起到較好的輔助診斷作用。

當(dāng)患者IGRAs檢測(cè)為陽(yáng)性且具有結(jié)核病臨床特征時(shí)，IGRAs診斷方法的靈敏度和特異度均明顯提高，為結(jié)核病的治療提供參考。此外，我們?cè)陉P(guān)注IGRAs診斷方法在提高診斷效率的同時(shí)，也要考慮其降低耗費(fèi)成本問(wèn)題。實(shí)際臨床治療中，更早期的對(duì)結(jié)核病做出準(zhǔn)確的診斷，可節(jié)省部分治療費(fèi)用，患者可早日康復(fù)。

綜上所述，IGRAs診斷方法相比于TST診斷方法，對(duì)于肺結(jié)核病的診斷具有更高的陽(yáng)性率、陰性率、敏感性及特異性，且操作簡(jiǎn)便，從而有著良好的臨床應(yīng)用前景。