PCR檢驗(yàn)在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值及效果探討

袁紅英

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌引發(fā)的肺部感染性疾病，其具有強(qiáng)烈的傳染性[1]，臨床主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、咳痰、咯血、胸痛和呼吸困難，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。研究表明[2-3]，肺結(jié)核的臨床表現(xiàn)很不典型，起病隱匿，若得不到及時(shí)的治療會(huì)嚴(yán)重影響患者的身心健康，嚴(yán)重者危及患者的生命安全。因此，盡早診斷肺結(jié)核對(duì)治療該病具有重要的意義。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢驗(yàn)(PCR)是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加，從而更容易準(zhǔn)確診斷肺結(jié)核[4]。已有研究報(bào)道[5-6]，PCR檢驗(yàn)在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值較高且準(zhǔn)確率高。因此，為了進(jìn)一步探討PCR檢驗(yàn)在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值及效果，選取2016年2月至2018年2月我院接診的130例肺結(jié)核患者進(jìn)行研究?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年2月至2018年2月我院接診的130例肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象。130例患者先應(yīng)用皮膚結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)檢驗(yàn)法進(jìn)行診斷，然后130例患者再應(yīng)用PCR檢驗(yàn)法進(jìn)行診斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均已診斷為肺結(jié)核。②患者及其家屬均知情本次研究，且在知情同意書(shū)上簽字，并通過(guò)我院倫理委員會(huì)認(rèn)證。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不接受本次診斷者或不配合本次研究者。②精神障礙者。③并發(fā)心、肝、腎等嚴(yán)重疾病者。130例患者男78例，女52例；年齡23～72歲，平均年齡(46.37±7.28)歲；病程2～10個(gè)月，平均病程(6.14±2.34)個(gè)月。

1.2 方法 PPD診斷：用生理鹽水將PPD(北京祥瑞生物制品有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S10960017)稀釋后，取0.1 mL于左或右前臂內(nèi)側(cè)行皮內(nèi)注射，48～72 h后測(cè)量和記錄反應(yīng)面積。

用PCR診斷：取0.5 mL患者清晨深咳后的第一口痰液，加入5 μL濃度為1 mol/L的NaOH溶液并混合均勻，放置在37℃下靜止40 min。然后在離心機(jī)(10 000 r/min，5 min)上對(duì)混合液進(jìn)行離心，去除上清液并以生理鹽水洗脫液洗脫。同時(shí)取患者胸水、血清各1 mL進(jìn)行離心沉淀處理，再加入50 μL裂解液行沸水浴10 min，接著進(jìn)行離心處理(10 000 r/min，5 min)，將15 μL反應(yīng)液加入0.2 μL Taq酶中混合均勻，再加入石蠟油20 μL封頂，最后加入5 μL上清液形成TB-DNA模板。在不同溫度下擴(kuò)增循環(huán)35次后取PCR擴(kuò)增液20 mL進(jìn)行電泳。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩種診斷方法的陽(yáng)性率，其中PPD檢測(cè)72 h內(nèi)觀察到患者局部腫結(jié)直徑大于5～10 mm則判別為陽(yáng)性。而PCR檢測(cè)在紫外線下有160 bp橙黃色熒光帶則判別為陽(yáng)性。其中陽(yáng)性率＝陽(yáng)性人數(shù)/總?cè)藬?shù)×100%。比較兩種診斷方法的在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值，采用受試者工作特征曲線(ROC)進(jìn)行分析。其中ROC曲線下的面積(AUC)越大，診斷價(jià)值越佳。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種診斷方法的陽(yáng)性率比較 PCR檢驗(yàn)的陽(yáng)性率為86.15%，明顯高于PPD檢驗(yàn)的43.85%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表1)。

表1 兩種診斷方法的陽(yáng)性率比較(n)

2.2 兩種診斷方法在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值比較 兩種診斷方法在肺結(jié)核早期診斷中具有一定的診斷價(jià)值，且PCR檢驗(yàn)的AUC明顯大于PPD檢驗(yàn)，其診斷價(jià)值明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表2)。

表2 兩種診斷方法在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值比較(±s)

表2 兩種診斷方法在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值比較(±s)

方法 例數(shù) AUC PCR檢驗(yàn) 130 0.812±0.144 PPD檢驗(yàn) 130 0.521±0.103 t值P值18.740 5 0.000 0

3 討論

近年來(lái)，隨著環(huán)境污染的加重及各種傳染疾病的傳播，肺結(jié)核發(fā)病率逐漸增加[7]。該病無(wú)非常特異性的臨床表現(xiàn)，有些患者甚至沒(méi)有任何癥狀，起病隱匿[8]，急性起病時(shí)，癥狀危重，甚至?xí)?dǎo)致死亡，嚴(yán)重影響患者的生命安全[9-10]。大量研究表明[11-12]，盡早明確診斷、采取適當(dāng)治療方案是治療該病的關(guān)鍵。到目前為止，PDD法進(jìn)行皮膚試驗(yàn)，根據(jù)皮膚反應(yīng)結(jié)果來(lái)判斷，是診斷肺結(jié)核的有效方法之一。遺憾的是，有研究報(bào)道[13-15]，PDD法診斷準(zhǔn)確率低，而PCR將微量的DNA大幅增加，更容易準(zhǔn)確診斷肺結(jié)核，且診斷率高。

基于以上研究，為了進(jìn)一步探討PCR檢驗(yàn)在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值及效果，選取2016年2月至2018年2月我院接診的130例肺結(jié)核患者進(jìn)行研究。在本次研究中，我們分別用PCR檢驗(yàn)法和PDD檢驗(yàn)法對(duì)肺結(jié)核患者進(jìn)行診斷，PCR檢驗(yàn)法的陽(yáng)性率為86.15%，明顯高于PDD檢驗(yàn)法的43.85%。這說(shuō)明PCR的診斷準(zhǔn)確率明顯高于PDD的診斷準(zhǔn)確率。這可能是與PDD液純度不夠有關(guān)。

AUC為ROC曲線下的面積，當(dāng)兩種或兩種以上不同診斷試驗(yàn)對(duì)疾病識(shí)別能力的比較時(shí)，哪一種試驗(yàn)的AUC最大，則哪一種試驗(yàn)的診斷價(jià)值最佳。在本次研究中我們發(fā)現(xiàn)，兩種診斷方法在肺結(jié)核早期診斷中具有一定的診斷價(jià)值，其中PCR檢驗(yàn)法的AUC明顯高于PDD檢驗(yàn)法，這說(shuō)明PCR檢驗(yàn)法具有較高的診斷價(jià)值。這是由于PCR檢測(cè)法能有效避免體內(nèi)因子，未產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)、抗體等影響，從而具有較高的診斷價(jià)值和診斷準(zhǔn)確率。

綜上所述，PCR檢驗(yàn)診斷早期肺結(jié)核的準(zhǔn)確率高，且在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值較高，值得在臨床中廣泛推廣。