鞭打繡球中苯酚類化合物的研究

逯 婭，普曉云，田 凱，孫靜賢，王 韋，劉宏程，邵金良，黃相中，李艷紅

(1.云南民族大學(xué) 民族藥資源化學(xué)國(guó)家民族事務(wù)委員會(huì)-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500；2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(昆明)，云南 昆明 650223)

鞭打繡球 (Hemiphragmaheterophyllum)是玄參科的一種單屬種植物[1]，生長(zhǎng)在云貴地區(qū)的一種多年生草本植物，當(dāng)?shù)厝朔Q作羊膜草、頂珠草具有活血調(diào)經(jīng)，舒筋活絡(luò)，祛風(fēng)除濕的功效，其紅色的果實(shí)被當(dāng)成鮮果直接食用.Yang等[2]從中分離得到了單萜類化合物. 馬偉光等[3]從中分離得到了環(huán)烯醚萜、苯乙醇苷等化合物.Jin等[4]從中分離得到了新的苯丙素苷類化合物. 何可群等[5]用紫外分光光度法確定了其全草中黃酮的相對(duì)百分含量 . 為了更加深入研究鞭打繡球中的化學(xué)成分及藥理活性，從鞭打繡球的乙酸乙酯萃取部分進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分離得到了10個(gè)苯酚類化合物(見(jiàn)圖1).

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料

暗箱式紫外分析儀(2F-20D, 鞏義市予華儀器有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(OSB-2100，上海市EYELA儀器有限公司)；數(shù)顯自動(dòng)恒溫不銹鋼電熱板(SA-1501A, 上海碩光科技有限公司)； 電熱鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9070 上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；質(zhì)譜儀( UltraScan ESI-MS布魯克有限公司)；安捷倫1260高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技公司)；半制備色譜柱: Agilent ZORBAX SB-C18(21.2 mm × 250 mm, 7 μm); Bruker AV-400核磁共振儀(布魯克公司)，TMS為內(nèi)標(biāo)；柱層析硅膠(100～200目，200～300目; 青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20 (20～150 μm；瑞典，Pharmacia 精細(xì)化工有限公司); 硅膠板試劑(GF254; 青島海洋化工廠)； 常用試劑為工業(yè)級(jí)石油醚、氯仿，乙醇，甲醇; 色譜純的甲醇和乙腈(賽默飛世爾科技有限公司)，顯色劑: 10%的硫酸乙醇溶液 (天津風(fēng)帆試劑有限公司).

鞭打繡球全草于2014年6月20日采自云南楚雄，樣本由云南民族大學(xué)楊青松副教授鑒定為HemiphragmaheterophyllumWall，現(xiàn)存放于云南民族大學(xué)民族醫(yī)藥學(xué)院資源藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本室，標(biāo)本號(hào)為T(mén)SY 201409.

1.2 提取與分離

取10 kg干燥的鞭打繡球全草，粉碎過(guò)0.172 mm篩，用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇對(duì)粉碎后的樣品冷浸超聲提取3次，24 h /次，過(guò)濾，合并濾液濃縮后，得到1.09 kg醇提浸膏.再向提取得到的浸膏中加入兩倍體積的水，混勻，分別用石油醚、乙酸乙酯、和正丁醇對(duì)浸膏進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯萃取物(270 g). 將乙酸乙酯浸膏用正相硅膠柱 (100～200目硅膠) 以V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)= (100∶1、80∶1、50∶1、20∶1、10∶1、1∶1、0∶1) 進(jìn)行梯度洗脫，然后接著用V(乙酸乙酯)∶V(甲醇)=(100∶1、50∶1、10∶1、1∶1、0∶1) 進(jìn)行梯度洗脫，最后用薄層色譜檢測(cè)并合并相同組分，得到極性遞減排序的10個(gè)組分(A1～A10).

將A7(21.9 g) 組分以V(氯仿)∶V(甲醇)=(50∶1、20∶1、10∶1、1∶1、0∶1) 用硅膠柱層析洗脫劃分為5個(gè)部分(A7.1～A7.5). 其中A7.4組分析出的固體進(jìn)行反復(fù)重結(jié)晶，用甲醇將固體溶解用HPLC分離得到化合物9(21 mg)和10 (23 mg). 將A7.5組分以79%甲醇/水作為流動(dòng)相進(jìn)行純化，半制備得到化合物(1) (27 mg)和(6) (27 mg).

將A8(17.4 g) 組分以V(氯仿)∶V(甲醇)=(50∶1、20∶1、10∶1、1∶1、0∶1) 用硅膠柱層析洗脫劃分為6個(gè)部分 (A8.1～A8.6)，將A8.4段通過(guò)凝膠色譜與硅膠柱層析后再用HPLC分離得到化合物(4) (34 mg)和(5) (31 mg). 將A8.5經(jīng)凝膠色譜分離后得到的A8.5.5與A8.5.9進(jìn)行反復(fù)重結(jié)晶得到化合物(3) (27 mg)和(7) (36 mg).

將A9(19 g) 組分以V(氯仿)∶V(丙酮)=(200∶1、100∶1、50∶1) 用硅膠柱層析洗脫劃分為7個(gè)部分(A9.1～A9.7). 將A9.3(6.3 g) 通過(guò)MCI以V(甲醇)∶V(水)=(20∶80、30∶70、40∶60、50∶50、40∶60、30∶70、30∶70、20∶80) 以及純甲醇進(jìn)行梯度洗脫，除去了大部分色素與糖類物質(zhì)，TLC檢測(cè)合并同類化合物得到8個(gè)組分 (A9.3.1～A9.3.8). 將A9.3.5(1.3 g) 組分通過(guò)硅膠柱層析得到化合物2(46 mg)和8(56 mg).

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色粉末, ESI-MS(m/z): 169 [M+H]+, 分子式為 C8H8O4.1H NMR (400 MHz, CD3OD)δH: 3.83 (3H, s, -OMe), 6.82 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5), 7.54 (1H, s, H-2), 7.56 (1H, s, H-6);13C NMR (100 MHz, CD3OD)δC: 169.0 (C=O), 153.1 (C-4), 148.3 (C-3), 125.3 (C-6), 115.8 (C-2), 114.1 (C-5), 56.8 (4-OMe). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為isovanillic acid (異香草酸).

化合物2白色粉末, ESI-MS(m/z): 153 [M+H]+, 分子式為 C8H8O3.1H NMR (400 MHz, CDCl3)δH: 7.02 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-3), 7.48 (1H, dd,J= 8.0, 1.6 Hz, H-4), 7.40 (1H, d,J= 1.6 Hz, H-6), 9.65 (1H, s, H-7), 3.75 (3H, s, -OMe);13C NMR (100 MHz, CDCl3)δC: 129.6 (C-1), 152.0 (C-2), 109.0 (C-3), 127.3 (C-4), 147.6 (C-5), 114.5 (C-6), 191.2 (C-7), 56.0 (-OMe). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為5-methoxy-2-hydroxy benzaldehyde (5-甲氧基-2-羥基苯甲醛).

化合物3白色粉末, ESI-MS(m/z): 153 [M+H]+, 分子式為 C8H8O3.1H NMR (400 MHz, CDCl3)δH: 7.27 (1H, d,J= 1.2 Hz, H-2), 7.21 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5), 7.41 (1H, dd,J= 8.0, 1.2 Hz, H-6), 9.80 (1H, s, H-7), 3.99 (3H, s, -Me);13C NMR (100 MHz, CDCl3)δC: 129.8 (C-1), 114.4 (C-2), 147.2 (C-3), 151.7 (C-4), 108.8 (C-5), 127.5 (C-6), 190.9 (C-7), 56.2 (-OMe). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為4-hydroxy-3-methoxy benzaldehyde (4-羥基-3-甲氧基苯甲醛).

化合物4白色固體，EI-MS(m/z): 182 [M]+, 分子式為C9H10O4.1H NMR (400 MHz, CD3OD):δH7.00 (2H, s, H-3,5), 3.89 (3H, s, 4-OMe), 3.83 (6H, s, 2,6-OMe);13C NMR (100 MHz, CD3OD):δC141.6 (C-4), 147.6 (C-2,6), 106.9 (C-3,5), 128.6 (C-1), 196.8 (C=O), 56.7 (2,6-OMe). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為syringaldehyde (丁香醛).

化合物5白色固體， ESI-MS(m/z): 123 [M+H]+,分子式為C7H6O2.1H NMR (400 MHz, CD3OD)δH:9.75 (1H, s, CHO), 7.76 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-2, H-6), 6.90 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-3, H-5);13C NMR (100 MHz, CD3OD)δC: 193.0 (C=O), 165.3 (C-4), 133.6 (C-2,6), 130.5 (C-1), 117.0 (C-3,5). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為 4-hydroxy-benzaldehyde (4-羥基苯甲醛).

化合物6白色固體， ESI-MS(m/z): 155 [M+H]+, 分子式為C7H6O4.1H NMR (400 MHz, CD3OD)δH: 7.07 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2), 6.80 (1H, d,J= 8.6 Hz, H-4), 6.80 (1H, dd,J= 8.6 Hz, 2.0 Hz, H-5);13C NMR (100MHz, CD3OD)δC: 122.3 (C-6), 122.8 (C-1), 149.1 (C-3), 152.3 (C-4), 116.0 (C-2), 112.6 (C-5), 167.6 (C-7). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為 3,4-dihydroxy-benzoic acid (3,4-二羥基苯甲酸).

化合物7淡黃色固體, ESI-MS(m/z): 199 [M+H]+, 分子式為C9H10O5.1H NMR (400 MHz, CDCl3):δH7.15 (2H, s, H-2,6), 3.86 (6H, s, -OMe);13C NMR (100 MHz, CDCl3):δC128.2 (C-1), 107.6 (C-2,6), 149.0 (C-3,5), 142.7 (C-4), 169.8 (C=O), 56.0 (-OMe). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為syringic acid (丁香酸).

化合物8白色固體， ESI-MS(m/z): 167 [M+H]+,分子式為C10H14O2.1H NMR (400 MHz, CD3OD) :δH6.72 (1H, s, H-4), 6.60 (1H, s, H-6), 5.79 (1H, d,J= 7.4 Hz, H-2), 2.19 (2H, m, H-7), 1.49 (2H, m, H-8), 0.91 (3H, s, H-9);13C NMR (100 MHz, CD3OD):δC161.1 (C-3), 159.3 (C-1), 106.7 (C-6), 106.2 (C-4), 103.7 (C-2), 56.9 (-OMe), 35.3 (C-7), 22.6 (C-8), 14.1 (C-9). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為 3-methoxy-5-propylphenol (3-甲氧基-5-丙基苯酚).

化合物9白色固體， ESI-MS(m/z): 195 [M+H]+, 分子式為C10H10O4.1H NMR (400 MHz, CDCl3):δH7.02 (1H, s, H-2), 3.75 (3H, s, -OMe), 6.11 (1H, s, -OH), 6.78 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-5), 6.74 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-6), 6.11 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-8), 7.46 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-7);13C NMR (100 MHz, CDCl3):δC129.6 (C-1), 127.5 (C-2), 152.0 (C-3), 147.3 (C-4), 109.0 (C-5), 106.0 (C-6), 146 (C-7), 114.6 (C-8), 167.2 (C-9), 56.4 (-OMe). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為 4-hydroxy-3-methoxy cinnamic acid (阿魏酸).

化合物10白色固體， ESI-MS(m/z): 209 [M+H]+, 分子式為C11H12O4.1H NMR (400 MHz, CDCl3):δH6.99 (1H, s, H-2), 6.88 (1H, dd,J= 8.3,1.6 Hz, H-5), 6.69 (1H, dd,J= 8.3,1.6 Hz, H-6), 7.55 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-7), 6.31 (1H, d,J= 15, 9 Hz, H-8), 3.82 (3H, s, 3-OMe), 3.69 (3H, s, 9-COOMe);13C NMR (100 MHz, CDCl3):δC126.8 (C-1), 124.0 (C-2), 152.0 (C-3), 149.4 (C-4), 116.5 (C-5), 114.7 (C-6), 147.3 (C-7), 113.3 (C-8), 169.7 (C-9), 56.4 (3-OMe), 51.8 (9-COOMe). 該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為4-hydroxy-3-methoxy cinnamic acid methyl ester (阿魏酸甲酯).

3 結(jié)果與討論

對(duì)鞭打繡球體積分?jǐn)?shù)95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分進(jìn)行了化學(xué)成分研究，分離并鑒定得到10個(gè)苯酚類化合物. 根據(jù)化合物的理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)分析，將其確定為：異香草酸 (1), 5-甲氧基-2-羥基苯甲醛 (2), 4-羥基-3-甲氧基苯甲醛 (3), 丁香醛(4), 4-羥基苯甲醛 (5), 3,4-二羥基苯甲酸(6), 丁香酸 (7), 3-甲氧基-5-丙基苯酚 (8), 阿魏酸 (9), 阿魏酸甲酯 (10). 以上化合物均是首次從該種植物中分離得到.