子宮內(nèi)膜癌中單核細(xì)胞趨化蛋白-1表達(dá)及其與巨噬細(xì)胞浸潤的關(guān)系

廖紅　熊樹華　肖仲清　劉佳

【摘要】目的：分析子宮內(nèi)膜癌中單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）表達(dá)及其與巨噬細(xì)胞浸潤的關(guān)系。方法：納入2016年1月-2017年12月60例在本院治療的子宮內(nèi)膜癌患者，同時納入同期在本院治療的子宮內(nèi)膜不典型增生患者60例和增生期子宮內(nèi)膜患者60例。采用免疫組化SP法檢測所有患者子宮內(nèi)膜中的MCP-1蛋白表達(dá)和CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤表達(dá)情況，分析子宮內(nèi)膜癌中MCP-1蛋白表達(dá)與CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤兩者之間的關(guān)系。結(jié)果：在增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜不典型增生中MCP-1的陽性表達(dá)率分別為11.67%（7/60）、78.33%（47/60）和13.33%（8/60），三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜不典型增生中CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞的陽性表達(dá)率分別為6.67%（4/60）、81.67%（49/60）和18.33%（11/60），三者對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。子宮內(nèi)膜癌組織中MCP-1蛋白表達(dá)與CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤均明顯高于增生期子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜不典型增生患者（P<0.05）。子宮內(nèi)膜癌組織中MCP-1蛋白與CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤之間呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.913，P<0.05）。結(jié)論：子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展與MCP-1及巨噬細(xì)胞的異常表達(dá)之間有密切的關(guān)系，子宮內(nèi)膜癌組織中浸潤的MCP-1和巨噬細(xì)胞能夠促進(jìn)腫瘤淋巴管和血管的形成，加速腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移。

【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜癌；子宮內(nèi)膜不典型增生；增生期子宮內(nèi)膜；單核細(xì)胞趨化蛋白-1表達(dá)；CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤；相關(guān)性

Expression of Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Endometrial Cancer and Its Relationship with Macrophage Infiltration/LIAO Hong，XIONG Shuhua，XIAO Zhongqing，et al.//Medical Innovation of China，2019，16（27）：-124

【Abstract】Objective：To analyze the expression of monocyte chemoattractant protein-1（MCP-1）and its relationship with macrophage infiltration in endometrial cancer.Method：Sixty patients with endometrial cancer treated in our hospital from January 2016 to December 2017 were enrolled in the study，meanwhile，60 patients with atypical endometrial hyperplasia and 60 patients with proliferative endometrium were enrolled in the study.Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of MCP-1 protein and macrophage infiltration with CD68 marker in endometrium of all patients.The correlation between the expression of MCP-1 protein and macrophage infiltration with CD68 marker was analyzed.Result：The positive expression rates of MCP-1

in proliferative endometrium，endometrial cancer and atypical endometrial hyperplasia were 11.67%（7/60），78.33%（47/60）and 13.33%（8/60），respectively，the difference was statistically significant（P<0.05）.In proliferative endometrium，endometrial cancer and atypical endometrial hyperplasia，the positive expression rates of macrophage infitration with CD68 marker were 6.67%（4/60），81.67%（49/60）and 18.33%（11/60），respectively，the difference was statistically significant（P<0.05）.The expression of MCP-1 protein and macrophage infitration with CD68 marker in endometrial carcinoma were significantly higher than those in proliferative endometrium and atypical endometrial hyperplasia（P<0.05）.There was a positive correlation between MCP-1 protein and macrophage infiltration with CD68 marker in endometrial cancer（r=0.913，P<0.05）.Conclusion：The occurrence and development of endometrial cancer are closely related to the abnormal expression of MCP-1 and macrophages，MCP-1 and macrophages infiltrated in endometrial cancer tissue can promote the formation of lymphatic vessels and blood vessels，and accelerate the invasion and metastasis of tumors.

【Key words】Endometrial cancer；Atypical endometrial hyperplasia；Proliferative endometrium；Monocyte chemoattractant protein-1 expression；CD68 marking macrophage infiltration；Correlation

First-authors address：Jiangxi Maternal and Child Health Hospital，Nanchang 330006，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.27.033

單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）作為CC趨化因子家族成員的組成之一，屬于系分子量15kD的糖蛋白，內(nèi)部共包含76個氨基酸，前體部位有99肽，

其中含有23個氨基酸的信號肽[1]。MCP-1主要是由人和鼠的單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的或由腫瘤細(xì)胞所分泌產(chǎn)生[2]。MCP-1能夠通過對腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMS），尤其是單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生趨化，從而在炎癥、腫瘤、動脈粥樣硬化等多種疾病的病灶部位發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展、過程[3-4]。此次研究通過選取2016年1月-2017年12月本院收治的子宮內(nèi)膜病變患者，取所有患者的標(biāo)本，檢測分析其子宮內(nèi)膜中的MCP-1與CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤及兩者的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料納入2016年1月-2017年12月在本院治療的60例子宮內(nèi)膜癌患者，同時納入同期在本院治療的子宮內(nèi)膜不典型增生患者60例和增生期子宮內(nèi)膜患者60例。納入標(biāo)準(zhǔn)：診斷符合子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜增生及增生期子宮內(nèi)膜；年齡32~57歲；均為女性；疾病分期Ⅰ~Ⅳ期；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他子宮內(nèi)膜病變；不愿參加此次研究。該研究已經(jīng)倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)，患者知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法采用北京博奧森公司提供的兔抗人多克隆MCP-1抗體濃縮液，工作濃度為1︰200；采用北京西雅金橋生物技術(shù)有限公司提供的鼠抗人單克隆CD68抗體即用型。采用福州邁新生物技術(shù)有限公司提供的DAB顯色試劑和S-P免疫組化試劑盒。抽取患者的病理標(biāo)本，石蠟包埋存檔，連續(xù)切片4張，厚度為5 μm。采用SP二步法進(jìn)行免疫組化檢測，取已知的病理切片作為陽性參照對象，以PBS緩沖液作為代替一抗的陰性對參照。MCP-1免疫組化陽性產(chǎn)物定位于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)中，呈現(xiàn)為棕黃色細(xì)顆粒狀。CD68免疫組化陽性產(chǎn)物定位于巨噬細(xì)胞胞質(zhì)中，呈現(xiàn)為棕黃色細(xì)顆粒狀。

1.3觀察指標(biāo)與評定標(biāo)準(zhǔn)（1）分析子宮內(nèi)膜病變中MCP-1表達(dá)陽性率與CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤的情況。陽性率判定標(biāo)準(zhǔn)：按照Ozdemir方法結(jié)合病理切片中陽性物質(zhì)的表達(dá)強(qiáng)度和量將其分為4級，其中陽性細(xì)胞數(shù)<5%或無陽性物質(zhì)表達(dá)為（-）；陽性細(xì)胞數(shù)在5%~25%或顯色較淺為（+）；陽性細(xì)胞數(shù)在26%~50%或顯色深為（2+）；陽性細(xì)胞數(shù)>50%或顯色深為（3+）。（2）分析子宮內(nèi)膜癌組織中MCP-1和CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 23.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。有序分類變量資料用秩和檢驗(yàn)，相關(guān)性運(yùn)用Spearman相關(guān)分析檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜不典型增生患者一般資料比較60例子宮內(nèi)膜癌患者，年齡32~57歲，平均（44.32±5.36）歲；按照2000年FIGO標(biāo)準(zhǔn)對其進(jìn)行組織學(xué)分級和臨床病理分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期14例，Ⅲ期16例，Ⅳ期

7例；G1級35例，G2級19例，G3級6例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移8例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例；病灶浸潤>1/2肌層49例，局限于黏膜層及浸潤<1/2肌層11例。60例子宮內(nèi)膜不典型增生患者，年齡33~56歲，平均（44.35±5.58）歲；60例增生期子宮內(nèi)膜患者，年齡32~57歲，平均（44.56±5.67）歲。三者年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2子宮內(nèi)膜病變中MCP-1表達(dá)與CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤在增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜不典型增生中MCP-1的陽性表達(dá)率分別為11.67%（7/60）、78.33%（47/60）和13.33%（8/60），三者對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜不典型增生中CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞的陽性表達(dá)率分別為6.67%（4/60）、81.67%（49/60）和18.33%（11/60），三者對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。子宮內(nèi)膜癌組織中MCP-1蛋白表達(dá)與CD68 標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤均明顯高于增生期子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜不典型增生患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3子宮內(nèi)膜癌組織中MCP-1和CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤的關(guān)系子宮內(nèi)膜癌組織中的MCP-1蛋白與CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.913，P=0.000），見表2。

3討論

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的一種上皮惡性腫瘤，多發(fā)于子宮內(nèi)膜，常見于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后的婦女，對女性的生活質(zhì)量和身心健康造成嚴(yán)重的影響[5]。相關(guān)研究證實(shí)，在我國每年約有20萬的新發(fā)子宮內(nèi)膜癌病例[6]。其導(dǎo)致的死亡率目前居于婦科常見惡性腫瘤的第3位（僅次于卵巢癌和宮頸癌），嚴(yán)重威脅女性的生命安全[7]。研究發(fā)現(xiàn)，在不同地區(qū)該病的發(fā)病率也各不相同，其發(fā)病原因主要與生活方式密切相關(guān)[8]。近些年來隨著人們生活方式和生活習(xí)慣的不斷改變，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢，目前已經(jīng)居于女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第2位（僅次于宮頸癌）[9]。絕經(jīng)后出血或圍絕經(jīng)期出血是子宮內(nèi)膜癌最常見的臨床癥狀[10]。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，一般臨床根據(jù)發(fā)病機(jī)制主要與生物學(xué)行為特點(diǎn)將其分為雌激素依賴型（Ⅰ型）和非雌激素依賴型（Ⅱ型）兩類，前者多數(shù)為子宮內(nèi)膜樣癌，部分為黏液腺癌；后者多為漿液性癌，透明細(xì)胞癌等[11]。因此早期發(fā)現(xiàn)、早期治療前期病變是臨床關(guān)注的重點(diǎn)。

子宮內(nèi)膜腺基質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞在正常生理?xiàng)l件下均可分泌MCP-1[12]。有研究指出，MCP-1在腺上皮細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平與基質(zhì)細(xì)胞相比明顯較高[13]。但是MCP-1在腺上皮細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)一般不受調(diào)節(jié)因素的調(diào)節(jié)[14]。與之相反的是，基質(zhì)細(xì)胞在腫瘤壞死因子a（TNF-a）、PDGF、IFN-1及IL-1等因素的作用下可表達(dá)為低組成性、高誘導(dǎo)性的MCP-1[15]。此外也有大量研究證實(shí)，在正常子宮內(nèi)膜中MCP-1的表達(dá)表現(xiàn)為性激素依賴性，可能與月經(jīng)周期有密切的關(guān)系[16-17]。MCP-1的表達(dá)在子宮內(nèi)膜增生期大于分泌期，并且在經(jīng)前期達(dá)到最高水平，排卵期則水平最低[18]。而上述這種周期性的變化特點(diǎn)與子宮內(nèi)膜中巨噬細(xì)胞數(shù)量的變化呈正相關(guān)[19]。在經(jīng)前期巨噬細(xì)胞的含量達(dá)到最高，而在排卵期則最少[9]。可以看出，雌孕激素能夠通過對MCP-1的表達(dá)實(shí)施調(diào)節(jié)進(jìn)而調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜中巨噬細(xì)胞的變化[20]。本研究中，子宮內(nèi)膜癌組織中的MCP-1蛋白與CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞浸潤之間呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.913，P=0.000）。研究結(jié)果提示，陽性MCP-1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度對子宮內(nèi)膜腺癌患者臨床病理特征的影響與CD68陽性巨噬細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度對子宮內(nèi)膜腺癌患者臨床病理特征的影響相一致，這也進(jìn)一步證實(shí)了MCP-1和巨噬細(xì)胞通過協(xié)同作用，促進(jìn)宮頸鱗癌的浸潤轉(zhuǎn)移。

巨噬細(xì)胞是炎癥和腫瘤的橋梁。在瘤微環(huán)境中，巨噬細(xì)胞被誘導(dǎo)分化和極化，由M1型轉(zhuǎn)變?yōu)镸2表型的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。在宮頸癌組織中，CD68標(biāo)識巨噬細(xì)胞通過增加免疫抑制因子，減少免疫促進(jìn)因子，引起免疫抑制，促使宮頸癌的浸潤轉(zhuǎn)移。

本研究還發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌組織中MCP-1蛋白與CD68標(biāo)識的巨噬細(xì)胞的陽性表達(dá)率均明顯高于子宮內(nèi)膜不典型增生和增生期子宮內(nèi)膜（P<0.05），說明MCP-1和巨噬細(xì)胞參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程，也進(jìn)一步提示MCP-1蛋白與CD68標(biāo)識的巨噬細(xì)胞可能通過分泌某些促淋巴管生成的因子，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤新生淋巴的生成，從而參與了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。因此筆者設(shè)想，是否可以通過阻斷MCP-1能夠阻礙巨噬細(xì)胞的聚集，從而延緩或阻斷腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，這也可以為腫瘤的治療提供新的思路。

綜上所述，MCP-1蛋白與CD68標(biāo)識的巨噬細(xì)胞參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程，可為臨床治療提供一定的參考。

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（收稿日期：2019-07-17）（本文編輯：程旭然）