三種白術(shù)提取物對雛雞新城疫抗體水平的影響

曹 琪，王 萍，吉木依哈木，唐 穎，王思蘆

（西昌學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，四川 西昌 615013）

0 引言

目前，許多雞的病毒性傳染病如新城疫、法氏囊病、禽流感等主要通過相關(guān)疫苗的免疫接種來進行疾病的預(yù)防，但在生產(chǎn)實踐中疫苗的免疫效果受到很多因素如疫苗質(zhì)量、免疫程序、母源抗體、免疫應(yīng)激、飼養(yǎng)管理等的影響，導(dǎo)致臨床上疫苗的免疫效果參差不齊，免疫失敗仍然會發(fā)生疫情。免疫增強劑可以通過調(diào)節(jié)動物的細胞或體液免疫功能，增強疫苗的免疫效果，如黃芪多糖在畜禽生產(chǎn)上應(yīng)用廣泛，具有良好的經(jīng)濟和社會效益。白術(shù)（Atractylodes macrocephala,AM）別名桴薊、于術(shù)、冬白術(shù)、淅術(shù)等，屬于菊科蒼術(shù)屬多年生草本植物，以根莖入藥?，F(xiàn)代研究表明白術(shù)具有抗炎鎮(zhèn)痛[1-2]、提高免疫[3]、抗?jié)僛4]、抗氧化[5]、抗菌抗腫瘤[6]等多種藥用功能。本試驗以白術(shù)的三種提取物作為研究對象，探討其對雛雞體液免疫功能的影響，為白術(shù)作為免疫增強劑在生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

健康青腳麻雞20日齡70羽，購自西昌安寧鎮(zhèn)農(nóng)貿(mào)市場，雛雞飼料購自新希望股份有限公司。

1.1.2 試驗器材

酒精燈、鐵架臺、圓底燒瓶、冷凝管、牛角管、錐形瓶、電磁爐、量筒、電子天平、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等，均由動科院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗室提供。

1.1.3 試驗藥品與試劑

白術(shù)、黃芪多糖(寧夏牧川生物科技有限公司，批號20170324)、新城疫疫苗（青島易邦生物工程有限公司，批號160010201）、新城疫抗體Elisa試劑盒（武漢純度生物科技有限公司，批號20171011）、無水乙醇等，均由動科院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗室提供。

1.2 方法

1.2.1 制備三種白術(shù)提取物

將干燥白術(shù)適當粉碎后，分別制備3種提取物。通過煎煮法制備白術(shù)水提物：稱取400 g白術(shù)加入適量超純水，武火煮沸后以文火煎煮30 min后過濾，保留濾液，將濾渣重復(fù)以上步驟煎煮2次，合并濾液煮沸濃縮至4 000 mL，待冷卻后分裝，冷藏備用；以浸提法制備白術(shù)醇提物：取400 g白術(shù)以80%乙醇浸泡6 d，過濾取濾液，充分回收乙醇后，得到醇提物沉淀，以400 mL超純水制備成混懸液；通過水蒸氣法提取白術(shù)揮發(fā)油：將150 g白術(shù)置于圓底燒瓶內(nèi)，加入適量蒸餾水進行煮沸，收集含揮發(fā)油的水蒸氣冷凝液100 mL，冷藏備用。

1.2.2 動物分組與處理

將70羽20日齡雄性雛雞常規(guī)飼養(yǎng)2 d后，點眼接種新城疫疫苗后隨機分為7個組，分別為空白組、白術(shù)醇提物（AMC）低濃度組（5 mg/mL）、AMC高濃度組（10 mg/mL）、白術(shù)水提物（AMS）低濃度組（0.5 mg/mL）、AMS高濃度組（1 mg/mL）、白術(shù)揮發(fā)油組（10 mg/mL）以及陽性藥物組，每組10羽。除了空白組和陽性組外，各試驗組每天取80 ml以上不同濃度的提取物分別與150 g飼料混勻后給藥；陽性組每天以黃芪多糖1.5 g與150 g飼料混勻給藥；除空白組按常規(guī)飼養(yǎng)外，其余各組每天給藥1次，其余時間正常飼養(yǎng)管理，連續(xù)給藥16 d。各組分別于給藥后第8 d和15 d分別翼下靜脈采血分離血清，-20℃凍存待測。

1.2.3 3種白術(shù)提取物對雛雞新城疫抗體水平的影響

通過雞新城疫抗體Elisa試劑盒對各組血清的抗體濃度進行檢測，具體操作按試劑盒說明書進行。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 三種白術(shù)提取物的制備

以藥材質(zhì)量與各提取物的終體積計算不同提取物的生藥濃度，結(jié)果表明，白術(shù)水提液的終濃度為0.1 g/mL、白術(shù)醇提液的終濃度為均為1 g/mL，白術(shù)揮發(fā)油的終濃度為1.5 g/mL，使用時根據(jù)1.2.2的要求稀釋后給藥。

2.2 三種白術(shù)提取物對雛雞新城疫抗體水平的影響

結(jié)果表明，給藥8 d后，各組與空白組相比，抗體水平均無顯著差異，其中高劑量白術(shù)醇提物組和陽性組的新城疫抗體水平分別升高了15.35%（P＞0.05）和15.32%（P＞0.05）；與陽性組比，除了白術(shù)醇提物低劑量組的抗體水平顯著低于陽性組（P＜0.05），其余各白術(shù)提取物對新城疫抗體水平的影響差異均不顯著，其中高劑量白術(shù)醇提物的效果與黃芪多糖最接近。

給藥15 d后，與空白組相比，各組的新城疫抗體水平均有不同程度的升高，其中效果最好的是高劑量白術(shù)水提物，血清抗體濃度升高了61.37%（P＜0.05），其次是低劑量白術(shù)醇提物，使抗體濃度提高32.57%（P＜0.05）；與黃芪多糖相比，高劑量白術(shù)水提物使抗體水平顯著提高了45.02%（P＜0.05），其余白術(shù)提取物對雛雞體液免疫的促進作用均不同程度優(yōu)于黃芪多糖，但差異均不顯著。試驗結(jié)果提示，白術(shù)水提物及醇提物可能含有促進雛雞體液免疫功能的有效成分，而白術(shù)揮發(fā)油在本次供試劑量下對體液免疫無顯著影響。

表1 白術(shù)對雛雞新城疫抗體水平的影響 （n=10）

3 討論

3.1 白術(shù)提取物的生物活性

據(jù)報道，白術(shù)的生物活性成分主要是水溶性多糖和揮發(fā)油類如蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯類等[6-8]。黃利等[3]報道白術(shù)水提液能拮抗環(huán)磷酰胺引起的小鼠白細胞總數(shù)下降、胸腺萎縮、提高巨噬細胞功能及血清溶血素。此外，白術(shù)水提物還具有調(diào)節(jié)炎癥細胞因子IL-2、IL-17，糾正免疫紊亂的作用[4]。本試驗結(jié)果表明高劑量的白術(shù)水提物可顯著提高雛雞的新城疫抗體水平，提示白術(shù)水提物可促進B細胞功能，與以上研究結(jié)論一致。

研究發(fā)現(xiàn)，白術(shù)醇提物能抑制二甲苯、角叉菜膠、醋酸等炎癥刺激因子引起的急性炎癥，并具有鎮(zhèn)痛作用[1]，還能抑制弗氏完全佐劑引起的關(guān)節(jié)炎及炎癥細胞因子[2]，表明白術(shù)醇提物含有抗炎活性成分。本試驗尚未發(fā)現(xiàn)白術(shù)醇提物有明顯的免疫增強作用。

白術(shù)揮發(fā)油的主要成分是莪術(shù)烯，具有抗腫瘤作用[6]，抗氧化作用[9]。此外，關(guān)曉輝等[10]報道白術(shù)揮發(fā)油能增強巨噬細胞吞噬功能及遲發(fā)變態(tài)反應(yīng)，可能通過提高機體非特異性免疫發(fā)揮抗癌作用。本試驗發(fā)現(xiàn)白術(shù)揮發(fā)油對雛雞的特異性免疫功能沒有顯著影響，表明白術(shù)揮發(fā)油的可能通過其他途徑影響動物免疫功能。

3.2 白術(shù)對雞免疫功能的影響

侯凱儷等[11]以黃芪為陽性對照，比較分析了白術(shù)水煎劑對雞新城疫疫苗免疫效果的影響，結(jié)果表明口服黃芪及白術(shù)水煎劑于二免后1周，雛雞的抗體效價顯著高于空白對照組。李婉雁等[12]比較了白術(shù)多糖、黃芪多糖對雛雞脾臟淋巴細胞體外增殖的影響，結(jié)果表明白術(shù)多糖抗應(yīng)激能力優(yōu)于黃芪多糖，可提高淋巴細胞在熱應(yīng)激環(huán)境的增殖的能力。本試驗以黃芪多糖為陽性對照，發(fā)現(xiàn)在連續(xù)給藥15 d后，高劑量白術(shù)水提物的體液免疫增強效果顯著優(yōu)于黃芪多糖，其中活性成分可能是水溶性白術(shù)多糖，可將其作為免疫增強劑進行應(yīng)用。

3.3 白術(shù)在家禽養(yǎng)殖方面的應(yīng)用前景

目前，國內(nèi)外都在積極倡導(dǎo)綠色生態(tài)養(yǎng)殖，生產(chǎn)無公害動物性食品，而采用天然、高效、無毒、無殘留的中藥作為免疫增強劑不但可以提高疫苗免疫效果，還能作為抗生素替代品有效防治動物疫病，提高養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益，滿足社會需求。本試驗研究表明，白術(shù)的水提物具有顯著的免疫活性，可提高雛雞體液免疫功能，具有較大的開發(fā)和應(yīng)用價值。