辛伐他汀與阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物的制備

姚鴻萍，賀琬茸，楊廣德，曾愛國(guó)*

(1.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，西安 710061；2.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 710061)

共無(wú)定形復(fù)合物是將2種或2種以上的小分子物質(zhì)通過合適的方法制備得到的無(wú)定形單相體系[1-4]。該體系可改善藥物的理化性質(zhì)[5-10]，提高藥物的藥效，降低藥物的毒性和不良反應(yīng)[11]。

辛伐他汀是HMG-CoA還原酶抑制劑，能降低總膽固醇和血清低密度脂蛋白的質(zhì)量濃度，減少基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生，抑制巨噬細(xì)胞的活性，改善內(nèi)皮依賴性血管擴(kuò)張功能[12-13]。阿司匹林是目前應(yīng)用最廣泛的抗血栓藥物[14-15]。臨床實(shí)驗(yàn)表明，在抗動(dòng)脈粥樣硬化、不穩(wěn)定性心絞痛、擴(kuò)張性心肌病、糖尿病和高血壓導(dǎo)致的心血管疾病中，阿司匹林與他汀類藥物聯(lián)用效果優(yōu)于單獨(dú)使用。但這類患者往往服用藥物多，易漏服或呈現(xiàn)藥物相互作用，導(dǎo)致治療效果降低、不良反應(yīng)增加。筆者擬制備辛伐他汀與阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物，以減少患者服用藥品的種數(shù)，提高患者用藥順應(yīng)性，減少藥物間的相互作用，提高藥效，降低毒性和不良反應(yīng)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 DSC822e型差示掃描量熱儀(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；LCMS-8040型高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津公司)；XRD-6100型X射線衍射儀(日本Shimadzu公司)；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)易有限公司)。

1.2試藥 辛伐他汀(質(zhì)量分?jǐn)?shù)>99.1%)，阿司匹林(質(zhì)量分?jǐn)?shù)>98.0%)，均購(gòu)自西安海鑫生物科技有限公司；乙腈為色譜純(Muskegon USA)；甲醇(山東浩中化工科技有限公司)和氯仿(成都市科隆化學(xué)品有限公司)均為分析純。水為自制三蒸水。

2 方法

2.1辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物的制備 分別精密稱取研磨成粉的阿司匹林0.354 0，0.602 0和0.925 0 g，分別置于3個(gè)干燥的蒸發(fā)皿中，加入少量氯仿，室溫下攪拌至溶解，分別超聲10 min。分別加入精密稱取的辛伐他汀1.646 0，1.398 0和1.075 0 g(辛伐他汀與阿司匹林的摩爾比分別為2∶1，1∶1和1∶2)，室溫下攪拌至溶解，再加入20 mL氯仿，超聲5 min，置于通風(fēng)櫥下自然揮發(fā)12 h，至氯仿完全揮干。

2.2辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物的表征

2.2.1差示掃描量熱分析法(DSC) 精密稱取各樣品5 mg，置于鋁坩堝中，蓋上蓋，置于DSC分析儀中的S位置；將1個(gè)空白坩堝置于DSC分析儀的R位置；打開STAReDSC應(yīng)用軟件，設(shè)置參數(shù)：起始溫度為25 ℃，結(jié)束溫度為160 ℃，升溫速率為10 ℃·min-1。當(dāng)溫度降至25 ℃時(shí)，取出樣品，得到樣品的DSC曲線。

2.2.2粉末X射線衍射法(PXRD) 采用Cu-Kα靶，波長(zhǎng)為1.540 6 ?，管壓為40 kV，管流為30 mA，步長(zhǎng)為0.02°，掃描速度為6°·min-1，掃描范圍為5°～35°。數(shù)據(jù)用Jade 6.5軟件分析。比較分析辛伐他汀原料藥、阿司匹林原料藥和辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物的PXRD圖譜。

2.3辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物樣品的溶出度測(cè)定

2.3.1色譜條件 辛伐他?。篢ianhe C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-0.020 mol·L-1磷酸二氫鈉(70∶30)，濾過并超聲后使用；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：238 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：25 ℃。阿司匹林：Tianhe C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-三蒸水(20∶5∶5∶70)，濾過并超聲后使用；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm；每次進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：25 ℃。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取辛伐他汀對(duì)照品0.50 mg，置于50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得辛伐他汀質(zhì)量濃度為10 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。精密稱取阿司匹林對(duì)照品20 mg，置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得阿司匹林質(zhì)量濃度為400 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.3.3線性關(guān)系考察 辛伐他汀：精密量取2.3.2項(xiàng)下制備的辛伐他汀對(duì)照品溶液0.5，1，2，4，6和8 mL，分別置于10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按照辛伐他汀的色譜條件進(jìn)行HPLC 測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(y1)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x1)，進(jìn)行線性回歸，方程為：y1=47 616x1+3 644，r1=0.999 5，線性范圍為0.5～8 μg·mL-1。阿司匹林：精密量取2.3.2項(xiàng)下制備的阿司匹林對(duì)照品溶液0.5，1，3，5，6和8 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按照阿司匹林的色譜條件進(jìn)行HPLC測(cè)定,以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(y2)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x2)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：y2=6 296x2-19 889，r2=0.999 9，線性范圍為20～320 μg·mL-1。

2.3.4藥物的溶出度測(cè)定 精密稱取辛伐他汀原料藥、阿司匹林原料藥和辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物，采用《中國(guó)藥典》2015年版四部溶出度與釋放度測(cè)定法中第二法，即槳法進(jìn)行測(cè)定。轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，溫度為37.0±0.5 ℃，釋放介質(zhì)選擇經(jīng)脫氣處理的蒸餾水，并于2，5，10，15，20，30，45，60，90，120，180和240 min分別取樣1 mL(同時(shí)補(bǔ)加同溫度等量溶出介質(zhì))，以0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液20 μL 進(jìn)行HPLC測(cè)定，測(cè)定結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算質(zhì)量濃度，并換算成累積溶出率。

3 結(jié)果與討論

3.1辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物的制備 辛伐他汀與阿司匹林摩爾比為1∶1和1∶2時(shí)得到淡黃色黏稠狀物質(zhì)，不能得到固體產(chǎn)物。而辛伐他汀與阿司匹林的摩爾比為2∶1時(shí)可得到白色、類白色的固體產(chǎn)物，將該固體產(chǎn)物在真空烘干箱中烘干，從蒸發(fā)皿中剝離，研磨成粉末，待用。

3.2差示掃描量熱分析 見圖1。由圖1可知，辛伐他汀和阿司匹林分別在144.6和138.6 ℃處有單一且尖銳的吸熱熔融峰，摩爾比為2∶1的辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物(圖1C中的a)在40.4 ℃有一玻璃化轉(zhuǎn)變溫度特征峰，初步判斷其可能形成了共無(wú)定形體系藥物。而其他2個(gè)摩爾比的樣品溶液并未出現(xiàn)類似的特征峰，初步判斷其可能未形成共無(wú)定形體系的藥物，需要結(jié)合其他表征測(cè)定方法進(jìn)一步確定。

圖1DSC曲線

A.辛伐他??；B.阿司匹林；C.辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物； a：辛伐他汀∶阿司匹林=2∶1；b：辛伐他汀∶阿司匹林=1∶2；c：辛伐他汀∶阿司匹林=1∶1。

Fig.1 DSC curves

A.simvastatin；B.aspirin；C.simvastatin-aspirin co-amorphous complex；a.simvastatin∶aspirin=2∶1；b:simvastatin∶aspirin=1∶2； c:simvastatin∶aspirin=1∶1.

3.3粉末X射線衍射 分別將辛伐他汀原料藥、阿司匹林原料藥和摩爾比為1∶1，1∶2和2∶1的3個(gè)辛伐他汀-阿司匹林的樣品進(jìn)行PXRD測(cè)定，結(jié)果見圖2。由圖2可知，原料藥辛伐他汀具有高度的結(jié)晶形態(tài)，原料藥阿司匹林的相對(duì)結(jié)晶程度較小，摩爾比為1∶1和1∶2的辛伐他汀-阿司匹林樣品溶液PXRD曲線有較強(qiáng)的結(jié)晶態(tài)峰，呈疊加狀，結(jié)合DSC曲線判定辛伐他汀與阿司匹林摩爾比為1∶1和1∶2時(shí)未形成共無(wú)定形體系。摩爾為2∶1的辛伐他汀-阿司匹林樣品溶液的PXRD曲線中晶態(tài)峰消失，此結(jié)果與DSC曲線結(jié)果一致，因此判定辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物的摩爾比為2∶1。

圖2PXRD曲線

A.辛伐他??；B.阿司匹林；C.辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物；a：辛伐他汀∶阿司匹林=2∶1；b：辛伐他汀∶阿司匹林=1∶2；c：辛伐他汀∶阿司匹林=1∶1。

Fig.2 PXRD curves

A.simvastatin；B.aspirin；C.simvastatin-aspirin co-amorphous complex；a.simvastatin∶aspirin=2∶1；b:simvastatin∶aspirin=1∶2； c:simvastatin∶aspirin=1∶1.

3.4辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物樣品的溶出度測(cè)定 鑒于辛伐他汀與阿司匹林摩爾比為1∶1和1∶2時(shí)，DSC和PXRD表明其未形成共無(wú)定形體系，故只測(cè)定了摩爾比為2∶1的辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物的溶出度。辛伐他汀溶出曲線見圖3。由圖3可知，辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物(2∶1)樣品中辛伐他汀在溶出介質(zhì)中能較快溶解；辛伐他汀原料藥的溶出曲線比辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物中辛伐他汀的溶出曲線低，溶出度小。辛伐他汀原料藥在25 min時(shí)溶出達(dá)到第1個(gè)峰值，質(zhì)量濃度為2.25 μg·mL-1，辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物中辛伐他汀的溶出達(dá)到第1個(gè)峰值的時(shí)間稍晚于其原料藥，但溶出質(zhì)量濃度為4.75 μg·mL-1，是原料藥的2.5倍。在第7個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)，辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物中辛伐他汀的溶出質(zhì)量濃度可達(dá)到原料藥的3倍。以上均證明將辛伐他汀制備為辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物(2∶1)有利于提高辛伐他汀的溶出速率和溶出度。

阿司匹林溶出曲線見圖4。由圖4可知，阿司匹林原料藥的溶出穩(wěn)定，而辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物(2∶1)中阿司匹林的溶出曲線低于阿司匹林原料藥的溶出曲線，原因可能是與辛伐他汀形成共無(wú)定形后，存在一些作用力，限制了阿司匹林進(jìn)一步的溶出，具體原因還需進(jìn)一步研究。

圖3辛伐他汀(b)與辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物(2∶1)(a)中辛伐他汀的溶出曲線

Fig.3 Dissolution curves of simvastatin in co-amorphous complex (simvastatin∶aspirin=2∶1)(a) and simvastatin(b)

圖4阿司匹林(a)與辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物(2∶1)(b)中阿司匹林的溶出曲線

Fig.4 Dissolution curves of aspirin (a) and aspirin in co-amorphous complex (simvastatin∶aspirin=2∶1)(b)

4 小結(jié)

共無(wú)定形藥物是在晶型藥物、共晶藥物、無(wú)定形藥物的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)的新的藥物固體形態(tài)[10,14]。它克服了無(wú)定形藥物在制備、儲(chǔ)存和給藥等過程中易發(fā)生轉(zhuǎn)晶的穩(wěn)定性問題[16-20]，且與無(wú)定形藥物一樣，都屬于單相體系。藥物與藥物形成的共無(wú)定形藥物可通過研磨法、低溫研磨法、溶劑揮發(fā)法和熔融-驟冷法等方法制備[21]，本課題以三氯甲烷為溶劑，辛伐他汀和阿司匹林作為原料藥，通過溶劑揮發(fā)法制備摩爾比為1∶1，1∶2和2∶1的辛伐他汀-阿司匹林樣品。經(jīng)過DSC和PXRD 2種表征法確定所制比例的藥物中摩爾比為2∶1的辛伐他汀-阿司匹林樣品可通過此方法成功制得辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物。結(jié)果表明，辛伐他汀-阿司匹林共無(wú)定形復(fù)合物(2∶1)中辛伐他汀的溶出度較原料藥有了很大的提高。但阿司匹林的溶出卻降低，其原因需要進(jìn)一步研究。