Origin軟件在福林-酚試劑法測(cè)定蛋白含量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理中的應(yīng)用

陳淑華 李善妮 馬昌杯 朱飛舟 張文 殷淵

摘要：運(yùn)用Origin軟件對(duì)福林-酚試劑法測(cè)定蛋白含量實(shí)驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析和制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，方便、快捷，并且能大大提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度，提升實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果。

關(guān)鍵詞：Origin軟件;蛋白質(zhì)定量;數(shù)據(jù)處理

中圖分類(lèi)號(hào)：G642.0? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ?文章編號(hào)：1674-9324（2019）51-0267-02

蛋白質(zhì)含量測(cè)定法是本科生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中最常用、最基本的分析方法之一。福林（Folin）-酚試劑法是目前測(cè)定蛋白質(zhì)濃度應(yīng)用最廣泛的經(jīng)典方法之一。其原理是采用蛋白質(zhì)與福林酚試劑反應(yīng)，生成深藍(lán)色復(fù)合物，藍(lán)色產(chǎn)物的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比?？衫梅止夤舛扔?jì)在660nm波長(zhǎng)下測(cè)定相應(yīng)吸光度，再繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而確定蛋白質(zhì)含量。此法可用于測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)濃度的范圍是25—250μg/ml，是生物化學(xué)教學(xué)中的一個(gè)必不可少的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)[1]。傳統(tǒng)的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)對(duì)數(shù)據(jù)處理采用手工計(jì)算和坐標(biāo)紙描點(diǎn)作圖，制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線可出現(xiàn)多種可能的形式，因而產(chǎn)生人為因素的誤差。

Origin是OriginLab公司研發(fā)的專(zhuān)業(yè)科研軟件，具有完善的數(shù)據(jù)分析處理和專(zhuān)業(yè)制圖能力。繪制的圖形使較為復(fù)雜的數(shù)據(jù)分析變得簡(jiǎn)單快捷且精確，能消除人工處理數(shù)據(jù)帶來(lái)的實(shí)驗(yàn)誤差[2-4]。本文以福林-酚試劑法測(cè)定蛋白含量為例，介紹Origin軟件在生物化學(xué)蛋白質(zhì)定量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理中的應(yīng)用。

一、實(shí)驗(yàn)方法

取7支干凈試管，在6支試管中分別吸取250μg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，再分別取蒸餾水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml。在第7支試管中僅加入1ml待測(cè)樣品。然后在所有試管中加入試劑甲5ml，混勻，室溫放置10min后，再加入試劑乙0.5ml，立即搖勻，顯色30min后，以空白管為對(duì)照，測(cè)定各管A660值。以A為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)C（濃度）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)第7管A660計(jì)算出樣品的蛋白含量。表1是實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

二、采用Origin軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和制圖

1.采用Origin軟件對(duì)數(shù)據(jù)生成散點(diǎn)圖。在電腦上下載并安裝Origin8.0或9.0，打開(kāi)軟件輸入數(shù)據(jù)如圖1（左）所示，在新建的表中A（X）一欄輸入各標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度數(shù)據(jù)，在B（Y）一欄輸入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)管A660值。選中所有數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊散點(diǎn)（或工具欄Plot-Symbol-Scatter），生成相應(yīng)散點(diǎn)圖（見(jiàn)圖1右），并設(shè)定濃度為X軸，吸光度為Y軸。

2.運(yùn)用Origin軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析和制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。點(diǎn)擊散點(diǎn)圖，選擇Analysis-Fitting-Fit linear-Open Dialogue進(jìn)行線性擬合并設(shè)定截距為0，可得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。顯示其斜率為0.00202，R2為0.99728。R2越接近1，表明線性越好。再雙擊X軸或Y軸，在彈出的窗口中，對(duì)相應(yīng)坐標(biāo)軸的刻度大小和格式進(jìn)行設(shè)定，可得到美觀的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（見(jiàn)圖2）。

根據(jù)線性方程y=0.00202x，可知A660=0.00202C。將待測(cè)樣品的A660值0.256代入公式，即可計(jì)算出C≈126.73μg/ml。

三、采用坐標(biāo)紙手工描點(diǎn)作圖

傳統(tǒng)的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)對(duì)數(shù)據(jù)采用手工計(jì)算和坐標(biāo)紙描點(diǎn)繪圖（見(jiàn)圖3）。根據(jù)待測(cè)樣品A660為0.256，可由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)蛋白濃度值約為126μg/ml。經(jīng)手工描點(diǎn)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線具有很大的主觀隨意性，由此產(chǎn)生人為因素的誤差，這導(dǎo)致最終分析結(jié)果的準(zhǔn)確度和客觀性均較差，難以達(dá)到質(zhì)控要求。

四、結(jié)語(yǔ)

在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中，將Origin軟件處理數(shù)據(jù)引入生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，方便、快捷，并且可大大提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精確度，能保證結(jié)果的科學(xué)性、客觀性和直觀性。此舉可激發(fā)學(xué)生課堂學(xué)習(xí)的主動(dòng)性，有助于提升實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果。同時(shí)基于量化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果使教師在批閱學(xué)生的實(shí)驗(yàn)報(bào)告時(shí)評(píng)價(jià)更公正和客觀。在大數(shù)據(jù)背景下，高校教師需不斷改進(jìn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法，將Origin軟件應(yīng)用與生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理相結(jié)合，取代傳統(tǒng)方法處理數(shù)據(jù)將成為必然趨勢(shì)。

參考文獻(xiàn)：

[1]曾衛(wèi)民，李文凱，傅俊江.生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程[M].北京：科學(xué)出版社，2013：95-96.

[2]邢琳，楊威，余林坡，等.Origin軟件在實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及圖形處理中的應(yīng)用[J].科技視界，2014，（13）：54-55.

[3]譚江成，楊欣，劉瞻，等.物理化學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理中Origin軟件的應(yīng)用[J].廣州化工，2016，（9）：177-179.

[4]閆宗蘭，趙鵬英，王湛.Origin軟件在磷的比色測(cè)定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理中的應(yīng)用[J].教育教學(xué)論壇，2018，（14）：264-266.