桑葚花青素提取純化研究進(jìn)展

欒琳琳，盧紅梅＊，陳莉

（1.貴州大學(xué) 釀酒與食品工程學(xué)院，貴陽(yáng) 550025；2.貴州大學(xué) 貴州省發(fā)酵工程與生物制藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng) 550025）

桑葚（Mulberry）是桑科、桑屬（Morus alba L.）多年生木本植物桑樹(shù)的果實(shí)，又稱桑椹、桑棗、桑果等，含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，被國(guó)家衛(wèi)生部列為首批藥食同源植物，被譽(yù)為“21世紀(jì)最佳保健果品”［1］。桑葚中的花青素是其主要的生物活性成分，具有抗氧化、抗癌、降血糖、預(yù)防心血管疾病、減少脂肪生成等多種生理活性功能［2－9］。

花青素（Anthocyanidins）又稱花色素，是一種天然的植物色素，多以糖苷的形式存在，形成花色苷（Anthocyanins）［10］。目前已確定的花青素有20 多種，在植物中常見(jiàn)的有6種：天竺葵色素（Pg）、芍藥色素（Pn）、矢車菊色素（Cy）、錦葵色素（Mv）、牽?；ㄉ兀≒t）和飛燕草色素（Dp）［11］。桑葚中花青素種類豐富，主要成分是矢車菊-3-葡萄糖苷和矢車菊-3-蕓香苷［12，13］。目前，對(duì)桑葚花青素的提取、純化已成為國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)，因此，本文綜述了桑葚花青素提取、純化的方法，為桑葚花青素的進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供了參考。

1 桑葚花青素的提取

提取是分離、鑒定和利用花青素的重要步驟，由于花青素特殊的結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分賦予了花青素多種生物活性，這些活性物質(zhì)在提取過(guò)程中極為不穩(wěn)定，所以對(duì)花青素的提取提出了較高的技術(shù)要求。有關(guān)桑葚花青素的研究報(bào)道很多，一些提取方法如溶劑提取、超聲輔助提取、微波輔助提取、酶提取和超臨界流體萃取等都得到了應(yīng)用。

1.1 溶劑提取法

溶劑提取是桑葚花青素的傳統(tǒng)提取方法。溶劑多選擇水、乙醇、甲醇、丙酮或混合溶劑。為提高花青素的提取效率，常在提取溶劑中加一定濃度的鹽酸、三氟乙酸或檸檬酸等酸。Suhl H J等［14］以70%乙醇為提取劑，以料液比1∶20（g／mL）冷藏過(guò)夜提取桑葚花色苷，得 出 桑 葚 花 色 苷 含 量 為 170.5mg／100g。Pawlowska A M 等［15］采用2%HCl甲醇提取桑葚花色苷，料液比為1∶6（g／mL），得到花色苷含量為27mg／100g。

國(guó)內(nèi)對(duì)桑葚花青素的溶劑提取研究主要集中在提取工藝參數(shù)優(yōu)化上，提取劑多為鹽酸-乙醇。例如Qin C G等［16］用95%乙醇／0.1%HCl（比例1∶1）在室溫暗處提取4h，得到濃度為128μg／mL的桑葚花青素。江巖［17］采用溶劑浸提法從新疆藥桑椹中提取花青素，最佳提取工藝為溶劑體積比（0.1%HCl溶液∶95%乙醇）40∶60、固液比1∶20（g／mL）、提取溫度50℃、提取時(shí)間90min，得到桑椹花青素得率為0.0305%。李娜［18］選取酸化乙醇作溶劑提取桑葚花色苷，最佳工藝參數(shù)為乙醇水溶液（90∶10，V／V）、鹽酸濃度0.5%、提取時(shí)間30min、料液比1∶20（g／mL）、提取溫度50℃，該條件下花色苷得率為0.269%。蔡榮榮等［19］以浙江省內(nèi)栽培種植的十大品種為研究對(duì)象，利用正交試驗(yàn)篩選出提取桑葚花青素的最佳工藝：乙醇濃度50%、提取液pH 4、料液比1∶1（g／mL）、浸泡3次，從不同品種桑葚果汁和果渣中提取的花青素得率在0.04%～0.39%，其中從十大品種的果渣中提取的花青素的得率最高（0.39%）。程秀瑋等［20］在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面分析法對(duì)桑葚花色苷的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，最佳工藝條件為：料液比1∶25，提取時(shí)間135min，提取溫度62℃，在此條件下，花色苷提取率最高，達(dá)到5.09mg／g。朱建斌等［21］運(yùn)用響應(yīng)面分析法對(duì)桑葚花青素的提取參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，最佳工藝參數(shù)為料液比1∶39（g／mL），提取溫度51℃，提取時(shí)間39min。在此工藝參數(shù)下桑椹花青素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24.93mg／g。Wu X等［22］應(yīng)用雙水相萃取來(lái)提取桑葚花青素，得出由30%乙醇、20%硫酸銨組成雙水相系統(tǒng)，在pH 4.5、溫度（35±1）℃條件下，可分離出大部分花青素，去除大約90%的游離糖。

綜合以上實(shí)驗(yàn)研究可得：提取劑的使用量以1∶10～1∶40（g／mL）料液比為宜；在提取溫度的選擇上，國(guó)外通常將溫度控制在低溫或常溫下，而國(guó)內(nèi)的提取溫度在30～70℃之間，花青素屬于熱敏活性物質(zhì)，溫度過(guò)高易造成花青素降解，提取時(shí)間在1～2h為宜。

溶劑提取法雖然操作簡(jiǎn)單，對(duì)設(shè)備要求不高，但提取時(shí)間長(zhǎng)，提取效率低，因此盡量選擇現(xiàn)代化儀器或提取方法來(lái)提高提取效率。

1.2 超聲輔助提取法

超聲波提取法主要是利用超聲波的機(jī)械振動(dòng)及空化作用達(dá)到提高花青素提取率的目的。超聲波提取技術(shù)是一種物理方法，在提取過(guò)程中不易破壞花青素的結(jié)構(gòu)，不易造成花青素的損失。

Espada-bellido E等［23］對(duì)桑葚花青素的提取進(jìn)行了優(yōu)化，最佳提取條件為pH 3的76%甲醇水溶液，提取溫度48℃，超聲振幅為70%，循環(huán)0.7s，料液比1.5∶11，得到花青素提取率為4.02%。馬義虔等［24］運(yùn)用超聲波輔助提取桑葚花青素。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用Box-Benhnken設(shè)計(jì)研究超聲時(shí)間、超聲溫度和乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)桑椹花青素提取率的影響。結(jié)果表明：最佳提取工藝條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，以檸檬酸調(diào)pH為2.0，料液比1∶10，超聲時(shí)間35min，超聲溫度53℃，加裝冷凝回流管提取2次，得到桑椹花青素含量約為259.50mg／100g。牛天羽等［25］選取4種桑葚（黑果桑、白果桑、野生蒙桑和栽培蒙桑）超聲輔助提取花色苷，最佳提取條件為：提取液為體積分?jǐn)?shù)60%的酸化甲醇，超聲溫度41℃，超聲時(shí)間39min，料液比1∶53（g／mL），4種桑葚中栽培蒙?；ㄉ蘸孔罡?，為11.815mg／g。程秀瑋等［26］在溶劑提取的基礎(chǔ)上采用超聲輔助提取桑葚花色苷，結(jié)果表明：最佳提取工藝條件為超聲時(shí)間20min，超聲溫度50℃，超聲功率430W，在此條件下，花色苷含量最高，達(dá)到5.7681mg／g，較溶劑提取法測(cè)得的花色苷含量顯著提高。Zou T B等［27］運(yùn)用64%甲醇（含1%三氟乙酸）提取桑葚花青素，提取溫度43℃，料液比1∶24，提取時(shí)間40min，花青素含量為（64.70±0.45）mg／g。李紅姣等［28］運(yùn)用超聲波輔助乙醇的方法提取桑椹花青素，最佳工藝條件為料液質(zhì)量濃度0.07g／mL，提取劑乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，提取液pH 5，提取時(shí)間0.5h，超聲波功率180W。在優(yōu)化的工藝條件下，桑椹花青素的提取得率為69.01mg／g。徐建國(guó)［29］以陜西安康的桑椹果渣為原料，研究超聲波提取桑椹紅色素的最佳工藝，得出最佳工藝參數(shù)為含0.01%HCl的60%乙醇溶液為提取劑，提取功率200W，超聲時(shí)間10min，料液比1∶15，提取1次，色素提取率為97.76%。

超聲輔助提取法具有提取時(shí)間短、提取效率高、適用范圍廣、設(shè)備簡(jiǎn)單易操作等特點(diǎn)，將超聲輔助提取法應(yīng)用于桑葚花青素的提取過(guò)程中，可提高桑葚花青素的得率，也可適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

1.3 微波輔助提取法

微波頻率較高，會(huì)導(dǎo)致植物細(xì)胞內(nèi)溫度迅速上升，利用細(xì)胞內(nèi)外的不同滲透壓使細(xì)胞壁破裂或結(jié)構(gòu)疏散，胞外溶劑滲入到細(xì)胞內(nèi)，溶解并且釋放細(xì)胞內(nèi)花青素。微波熱效率較高，溫度迅速升高，使用微波輔助提取可縮短提取時(shí)間，明顯提高花青素的提取效率。目前微波輔助技術(shù)在黃酮類、多酚類物質(zhì)等有效成分的提取已廣泛應(yīng)用。

張朝紅等［30］利用響應(yīng)面法對(duì)微波輔助提取果桑花色苷的工藝進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明：料液比1∶20（g／mL）、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、pH 1、微波功率540W和提取時(shí)間100s為最佳工藝參數(shù)，果?；ㄉ盏奶崛÷蕿?.89mg／g。Zou T等［31］運(yùn)用微波輔助提取法提取桑葚花青素，結(jié)合響應(yīng)面分析法，得出桑葚花青素最佳提取條件為：59.6%酸化甲醇，微波功率425W，料液比1∶23，提取時(shí)間132s，得出桑葚花青素含量為54.72mg／g。羅政［32］分別采用溶劑提取法和微波輔助提取法提取桑葚花色苷，通過(guò)單因素試驗(yàn)，得出了微波輔助提取法桑葚花色苷的提取率相較溶劑提取法要提高15%～20%。通過(guò)響應(yīng)面試驗(yàn)得出，微波提取的最佳工藝參數(shù)為料液比1∶16，時(shí)間50s，功率626W，乙醇濃度70%，得到粗提物中花色苷含量為3.54mg／g。張國(guó)棟等［33］研究了微波輔助提取桑葚紅色素的最佳工藝，發(fā)現(xiàn)在40%的乙醇-1%鹽酸，1∶20的料液比，微波功率800W處理10min時(shí)其512nm的處吸光值達(dá)0.662，提取效率最佳。同參數(shù)下與不進(jìn)行微波提取的對(duì)照相比較，微波提取的提取率顯著高于對(duì)照。

微波輔助提取法對(duì)植物細(xì)胞壁的破裂能力強(qiáng)，提取效率高，提取時(shí)間短，適用范圍廣，但微波輔助法在提取過(guò)程中易造成局部過(guò)熱而導(dǎo)致桑葚花青素降解，且對(duì)實(shí)驗(yàn)容器要求高，一般容器不能滿足微波要求，而且微波輔助法提取目前僅限于少量提取實(shí)驗(yàn)，還不具備工業(yè)化大生產(chǎn)。

1.4 酶法提取法

酶提取法一般是建立在溶劑提取法的基礎(chǔ)上，根據(jù)植物細(xì)胞壁的構(gòu)成選擇相應(yīng)酶將植物細(xì)胞壁組分成分分解或者降解，暴露出細(xì)胞內(nèi)的有效成分，溶解于溶劑中，從而提取細(xì)胞內(nèi)的有效成分，此類方法稱為酶提取法。

胡彥新等［34］利用響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化果膠酶提取桑葚酒渣中花色苷的工藝條件，得出加酶量0.2%、提取溫度64℃、提取時(shí)間145min。在此試驗(yàn)條件下花色苷的提取率為4.68mg／g?；袅樟眨?5］通過(guò)比較纖維素酶和果膠酶的添加對(duì)色素提取的影響得知，添加纖維素酶對(duì)色素提取的影響不大，而少量添加果膠酶能顯著提高色素得率，即果膠酶濃度0.2%，在溫度50℃下提取2h，色素得率為0.499mg／g。

1.5 其他提取法

1.5.1 聯(lián)合輔助提取

基于單一提取方法的局限，許多學(xué)者開(kāi)始采用多種聯(lián)合輔助提取方法提取桑葚花色素，彌補(bǔ)單一提取方法的缺陷，提高花青素的提取率。

胡金奎［36］采用水浴振蕩提取、超聲輔助提取和超聲-微波輔助提取桑葚中的花色苷，并分別優(yōu)化了這3種方法的提取工藝條件，在各自最優(yōu)提取條件下，比較發(fā)現(xiàn)超聲-微波輔助提取方法優(yōu)于超聲輔助提取，超聲輔助提取優(yōu)于水浴振蕩提取，最優(yōu)條件為：微波功率90W，料液比3，提取時(shí)間180s。

1.5.2 超臨界CO2法

超臨界二氧化碳萃取分離過(guò)程的原理是利用超臨界二氧化碳對(duì)花青素具有特殊的溶解作用，利用超臨界二氧化碳的溶解能力與其密度的關(guān)系，即利用壓力和溫度對(duì)超臨界二氧化碳溶解能力的影響而進(jìn)行的。超臨界流體二氧化碳萃取過(guò)程是由萃取和分離組合而成的。

羅政通過(guò)響應(yīng)面試驗(yàn)，優(yōu)化超臨界CO2提取桑葚花色苷的工藝參數(shù)，得出提取壓力31MPa，時(shí)間80min，提取溫度40℃，花色苷提取率為83.10%。

超臨界CO2法比傳統(tǒng)溶劑提取法擁有更高的溶解性和滲透力，由于其能避免提取物的熱降解，因此，比溶劑提取法的提取率和純度更高。但目前國(guó)產(chǎn)的超臨界萃取設(shè)備容積小，進(jìn)口設(shè)備價(jià)格昂貴，因此，無(wú)法滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需要。

2 桑葚花青素的純化

桑葚花青素的提取液中含有淀粉、蛋白質(zhì)、糖類等雜質(zhì)，影響花青素的純度和穩(wěn)定性，也不利于花青素的鑒定和利用，所以需要對(duì)花青素提取液進(jìn)行純化。目前，花青素的純化方法有紙層析法、薄層析法、柱層析法（包括大孔樹(shù)脂法和離子交換樹(shù)脂法）、膜分離法、高效液相色譜法和聯(lián)合技術(shù)法等。已報(bào)道的桑葚花青素的純化方法有大孔樹(shù)脂法、高速逆流色譜法、聯(lián)合技術(shù)法。

2.1 大孔樹(shù)脂法

大孔吸附樹(shù)脂是利用樹(shù)脂的吸附性和篩選性能相結(jié)合的原理對(duì)目標(biāo)成分進(jìn)行分離的方法。該方法具有操作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、可重復(fù)利用等特點(diǎn)。近幾年，許多學(xué)者用大孔樹(shù)脂對(duì)桑葚花青素的分離得到了廣泛的應(yīng)用。

徐穎［37］利用 Amberlite XAD-7HP型大孔樹(shù)脂對(duì)桑葚花色苷進(jìn)行純化，經(jīng)過(guò)純化，花色苷含量從3.14%上升到35.32%，從而分離出純度較高的花色苷純化物。Yao C等［38］對(duì)5種大孔樹(shù)脂（XAD-7HP、AB-8、HP20，D101和X-5的吸附／解吸性能進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果顯示：XAD-7HP顯示出比其他樹(shù)脂更高的吸附／解吸能力和比率，吸附率容量為3.57mg／g，吸附率和解吸率分別為86.45%和80.81%，純度達(dá)93.6%。李瑞琦［39］使用D101型大孔樹(shù)脂對(duì)提取后的桑葚紅色素進(jìn)行純化，對(duì)純化前后的桑葚紅色素的色價(jià)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果分別為38.6和91.4，說(shuō)明D101型大孔樹(shù)脂對(duì)桑葚紅色素的純化效果很好。張?jiān)雠娴龋?0］采用AB-8大孔樹(shù)脂分離、純化藥桑葚花青素，得出最佳工藝參數(shù)為：樣液質(zhì)量濃度為0.3g／mL，pH 為2.54，吸附流速0.5mL／min；洗脫劑乙醇體積分?jǐn)?shù)為 45%，pH 為0.5，洗脫流速為2mL／min。吳慶智［41］綜合比較了AB-8、HPD-400A、HPD100 3種樹(shù)脂對(duì)桑葚色素的吸附、解吸性能，結(jié)果顯示：AB-8樹(shù)脂吸附性能好，解吸量最大。唐榕等［42］從 大 孔樹(shù)脂 HPD600、D101、LX1180、AB-8、DA201-C中篩選出性能較優(yōu)的樹(shù)脂對(duì)桑葚花色苷進(jìn)行純化，結(jié)果表明：HPD600是純化花色苷較為理想的樹(shù)脂，除糖率為67.6%，純化后的樣品總花色苷含量為16.7%，色價(jià)為46.1。趙麗萍等［43］比較了AB-8、NKA 2種大孔樹(shù)脂分離、純化藥桑椹花青素的效果，經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂純化后，藥桑椹花青素總黃酮含量及總抗氧化能力分別提高了8.507mg／g和55.207U／mg，分別是NKA大孔樹(shù)脂純化后提高值的3.3倍和14.1倍，與NKA大孔樹(shù)脂法相比，AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)藥桑椹花青素的分離、純化效果更好。Liu X等［44］用大孔樹(shù)脂法分離、純化桑葚花青素，發(fā)現(xiàn)純化后桑葚總花色苷含量由147.68mg／L上升至2725.46mg／L，在選取的6種樹(shù)脂（D3520、D4020、X-5、NKA-9、AB-8、D101A）中，X-5顯示出對(duì)桑葚花青素最佳的吸附能力。胡金奎等［45］分別對(duì)12種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)桑葚花色苷的吸附性能進(jìn)行了比較，通過(guò)靜態(tài)吸附和解吸實(shí)驗(yàn)篩選出最佳大孔吸附樹(shù)脂為L(zhǎng)X-68。用LX-68樹(shù)脂純化后色素的色價(jià)為114，純度為39.9%，花色苷收率為91.5%。

綜上可知，大孔樹(shù)脂法可分離出純度較高的桑葚花色苷純化物，各種各樣的樹(shù)脂填料也能不同程度地提高花青素的色價(jià)和純度，其中，國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多的樹(shù)脂是AB-8型大孔樹(shù)脂，用得較好的是XAD-7HP型大孔樹(shù)脂，花青素純度可達(dá)93.6%。不同大孔樹(shù)脂對(duì)桑葚花青素純化的效果差別很大，可能是受到大孔樹(shù)脂的孔徑、比表面、極性等因素的影響。

2.2 高速逆流色譜法

高速逆流色譜法是一種液-液分配色譜技術(shù)，不用固體支撐體來(lái)保留固定相，避免樣品的不可逆吸附、失活和變性等問(wèn)題，近年來(lái)逐步發(fā)展成為一種備受關(guān)注的新型色譜分離技術(shù)。

楊玲等［46］采用高速逆流色譜分離制備藥桑葚花色苷。以甲基叔丁基醚-正丁醇-乙腈-水-三氟乙酸（2∶2∶1∶5∶0.01，V／V）為 溶 劑 體 系，進(jìn) 樣 量50mg，分離得到純度分別為99.24%、88.5%、99.9%和96%的4個(gè)花色苷單體。徐淵金［47］采用高速逆流色譜對(duì)桑葚花色苷進(jìn)行分離、純化，溶劑系統(tǒng)為水-正丁醇-TBME-乙腈-TFA（5∶3∶1∶1∶0.001，V／V）和水-正丁醇-TBME-乙腈-TFA（5∶4∶1∶1∶0.001，V／V），分離得到花色苷單體Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ。Soojung C等［48］使用高效逆流色譜法分離桑葚花青素，雙相溶劑體系組成為叔丁基甲基醚-正丁醇-乙腈-0.01%三氟乙酸（1∶3∶1∶5，V／V），結(jié)果顯示：高效液相色譜法即使在較大的樣品量下也能快速有效地分離矢 車 菊-3-葡 萄 糖 苷 和 矢 車 菊-3-蕓 香 苷 （200～1000mg）。

目前，利用高速逆流色譜法分離純化桑葚花青素的研究頗少，由于高速逆流色譜法不僅可以獲得高純度的分離組分，同時(shí)具有操作成本低、制備量大等特點(diǎn)，能用于工業(yè)化生產(chǎn)，具有廣闊的發(fā)展研究前景。

2.3 聯(lián)合純化方法

為了尋找更好的純化方法，聯(lián)合純化技術(shù)對(duì)桑葚花青素的純化研究相繼得到報(bào)道。如Mariana N S等［49］采用C18Acclaim?120色譜柱結(jié)合甲醇-三氟乙酸-水為流動(dòng)相在黑桑葚提取物中分離出3種花青素，經(jīng)鑒定為矢車菊素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-蕓香苷和天竺葵素-3-葡萄糖苷。通過(guò)MS分析確定，桑椹提取物中含量最豐富的花青素是矢車菊素-3-葡萄糖苷（64.13%）和矢車菊素-3-蕓香糖苷（35.21%）。Zhang W N等［50］從2種桑葚渣中鑒定出5種花青素，其中矢車菊素-3-葡萄糖苷和矢車菊素-3-蕓香苷是主要的花青素成分，經(jīng)Sephadex LH-20分離及AB-8大孔樹(shù)脂純化后純度均在98%以上，2種花青素的完全回收率為57.4%。Chen Y等［51］采用柱層析和高速逆流色譜法相結(jié)合的方法，從桑葚中分離出高純度的花青素單體。用Amberlite XAD-7HP柱和80%乙醇（0.1%HCl）純化后，得到一部分純度為68.6%的花青素混合物。使用正丁醇-甲基叔丁基醚-乙腈-水-三氟乙酸（30∶10∶10∶50∶0.05，V／V）的雙相溶劑系統(tǒng)的高速逆流色譜法分離花青素單體。獲得3種單獨(dú)的飛燕草素-3-O-蕓香糖苷、矢車菊素-3-O-蕓香糖苷和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷。

除此之外，花青素的分離純化方法還有膜分離法、凝膠層析法等。膜分離法是在分子水平上不同粒徑分子的混合物在通過(guò)半透膜時(shí)，實(shí)現(xiàn)選擇性分離純化的技術(shù)。采用膜分離法純化桑葚花青素的報(bào)道還未見(jiàn)報(bào)道，陳文良等［52］研究膜分離技術(shù)分離、純化葡萄籽中低聚原花青素的工藝過(guò)程。采用微濾、超濾的膜分離過(guò)程，對(duì)葡萄籽中低聚原花青素進(jìn)行分離和提純。相比于傳統(tǒng)的以熱濃縮為主的工藝方法，工藝過(guò)程引入膜分離的高新技術(shù)，工藝簡(jiǎn)單、高效，耗能少，產(chǎn)品的質(zhì)量指標(biāo)接近國(guó)外高端產(chǎn)品，適用于產(chǎn)業(yè)化的規(guī)模應(yīng)用。

凝膠層析又稱分子篩過(guò)濾、排阻層析等。它的突出優(yōu)點(diǎn)是層析所用的凝膠屬于惰性載體，不帶電荷，吸附力弱，操作條件比較溫和，可在相當(dāng)廣的溫度范圍下進(jìn)行，不需要有機(jī)溶劑，并且對(duì)分離成分理化性質(zhì)的保持有獨(dú)到之處。對(duì)于高分子物質(zhì)有很好的分離效果。王二雷［53］將藍(lán)莓花青素粗提物經(jīng)過(guò)Sephadex LH-20凝膠層析后，發(fā)現(xiàn)25%的酸化乙醇能將粗提物分離成3段穩(wěn)定的花青素組分，且每段組分中花青素純度分別達(dá)到59.53%、68.04%和65.79%。此法在花青素純化方面的應(yīng)用不多，該技術(shù)尚不成熟，與其他方法的聯(lián)合使用將會(huì)是新的發(fā)展趨勢(shì)。

3 展望

桑葚花青素作為一種天然水溶性食品色素，具有很好的保健功效和藥用價(jià)值。花青素的應(yīng)用前景廣闊，但仍有很多問(wèn)題需要進(jìn)一步解決。

研究層面上：雖然在桑葚花青素提取、純化的研究方面已有很大進(jìn)展，但目前提取分離的桑葚花青素提取率低，產(chǎn)量不高，研究開(kāi)發(fā)出高效、高純度的提取純化技術(shù)是近一段時(shí)間的研究熱點(diǎn)；目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)桑葚花青素的提取普遍使用酸化的甲醇和乙醇溶劑，考慮到食品中殘留甲醇的毒性及安全、適口的要求，使用食品級(jí)提取劑將會(huì)是合理的提取溶劑。

產(chǎn)業(yè)層面上：目前，桑葚花青素的產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)少，難以形成規(guī)模；桑葚的開(kāi)發(fā)利用多為果汁、果酒、果醋等，桑葚花青素的藥用價(jià)值較少得到合理的開(kāi)發(fā)利用。

總而言之，桑葚花青素的開(kāi)發(fā)利用將是近幾年的研究熱點(diǎn)，與人體健康、食品安全和工業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域均有聯(lián)系。我國(guó)開(kāi)展了桑葚花青素的研究和利用，與世界頂尖水平相差不遠(yuǎn)，市場(chǎng)對(duì)桑葚花青素產(chǎn)品有大量需求，科研工作者應(yīng)抓住機(jī)遇，深入研究，為推動(dòng)研究工作而努力。