三丁酸甘油酯對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)體成分與形體指標(biāo)及腸道消化酶的影響

李雅敏　劉艷莉　石勇　胡毅　鐘蕾　王振東

摘要? ? 為研究草魚(yú)飼料中添加三丁酸甘油酯對(duì)其魚(yú)體成分、形體指標(biāo)及腸道消化酶的影響。選取健康的草魚(yú)幼魚(yú)（20.04 g±0.19 g）隨機(jī)分為4組，每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，分別投喂基礎(chǔ)日糧（T1）以及基礎(chǔ)日糧中添加300 mg/kg（T2）、600 mg/kg（T3）、1 000 mg/kg（T4）三丁酸甘油酯飼糧，在水庫(kù)網(wǎng)箱中進(jìn)行8周的養(yǎng)殖試驗(yàn)。結(jié)果表明，T4組的魚(yú)體粗蛋白含量較基礎(chǔ)日糧組（T1）有提高的趨勢(shì)（P>0.05），水分含量顯著降低（P<0.05），各組之間的粗脂肪和粗灰分含量無(wú)顯著差異（P>0.05）。與基礎(chǔ)日糧組相比，T2、T3和T4組的肝體比顯著提高，T2組的腸體比顯著提高（P<0.05）。T3和T4組的肥滿(mǎn)度、臟體比、腸體比和腸長(zhǎng)比均有上升的趨勢(shì)（P>0.05）。T3組腸道脂肪酶活力較T1組顯著提高，T4組的淀粉酶活力顯著提高（P<0.05）。綜上可得，飼料中添加三丁酸甘油酯能夠改變草魚(yú)幼魚(yú)的魚(yú)體成分和形體指標(biāo)，提高腸道消化酶活力。

關(guān)鍵詞? ? 三丁酸甘油酯;草魚(yú);體成分;形體指標(biāo);腸道消化酶

中圖分類(lèi)號(hào)? ? S963? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? ? A

文章編號(hào)? ?1007-5739（2019）24-0185-03? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）

Abstract? ? The experiment was conducted to study the effects of tributyrin on the body composition，body index，and intestinal digestive enzymes of Ctenopharyngodon idellus.Healthy Grass carps（20.04 g±0.19 g）were randomly divided into 4 groups with 3 replicates，and fed the basal diet（T1）and the basal diet were added with 300 mg/kg（T2）、600 mg/kg（T3）and 1 000 mg/kg（T4）tributyrin diet for 8 weeks.The results showed that the crude protein content in the T4 group was higher than that in the control group（P>0.05），and the water content was significantly lower（P<0.05）.There was no signific-ant difference in crude fat and ash content between the groups（P>0.05）.Compared with the T1 group，the hepatosomatic index of the T2，T3，and T4 groups significantly increased，and the intestosomatic index（ISI）of the T2 group significantly increased（P<0.05）.The condition factor，visceral index，ISI and relative gut length of T3 and T4 groups all increased（P>0.05）.The intestinal lipase activity of T3 group was significantly higher than that of T1 group，and the amylase activity of T4 group was significantly increased（P<0.05）.In summary，the addition of tributyrin to the feed can change the fish body compo-sition and body index of the grass carp，improve the intestinal digestive enzyme activity.

Key words? ? tributyrin;Ctenopharyngodon idellus;body composition;body index;intestinal digestive enzyme

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)高度集約化和工廠(chǎng)規(guī)模化的快速發(fā)展，抗生素濫用引發(fā)的細(xì)菌耐藥性[1]、藥物殘留[2]、水域環(huán)境污染[3]及水產(chǎn)動(dòng)物免疫功能受到抑制[4]等問(wèn)題日益凸顯。草魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）是我國(guó)年產(chǎn)量最大的淡水魚(yú)類(lèi)，據(jù)2019年漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒，2018年草魚(yú)產(chǎn)量高達(dá)550.43萬(wàn)t，同比增長(zhǎng)2.97%[5]。草魚(yú)幼魚(yú)的腸道等消化器官發(fā)育還不完善，環(huán)境和飼料的雙重脅迫易導(dǎo)致草魚(yú)出現(xiàn)各種疾病，危害草魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育[6]。因此，尋求一種綠色、高效、無(wú)污染的飼料添加劑對(duì)生產(chǎn)安全、環(huán)保、優(yōu)質(zhì)的草魚(yú)來(lái)說(shuō)具有非常重要的意義。

三丁酸甘油酯（Tributyrin，TB）是一種短鏈脂肪酸酯，其具有較低的熔點(diǎn)（-75 ℃）和較高的沸點(diǎn)（305～310 ℃），適合目前各類(lèi)飼料加工的生產(chǎn)工藝[7]。在豬[8]和菊黃東方鲀（Ta-kifugu flavidus）[9]上的研究發(fā)現(xiàn)，三丁酸甘油酯能夠提高腸道消化酶活力，提高機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力。同時(shí)，在肉雞[10]和菊黃東方鲀[9]上得出三丁酸甘油酯會(huì)對(duì)機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)成分有一定的影響。但目前有關(guān)三丁酸甘油酯對(duì)草魚(yú)的作用研究鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)向草魚(yú)幼魚(yú)飼料中添加不同水平的三丁酸甘油酯，探究其對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)體成分、形體指標(biāo)和腸道消化酶活力的影響，以期為三丁酸甘油酯在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗(yàn)飼料的制作

參照草魚(yú)幼魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)參數(shù)和商品飼料配方，以魚(yú)粉、豆粕、棉粕和菜粕為蛋白源，豆油為脂肪源，面粉為糖源，配制4組等氮等脂的飼料。分別為基礎(chǔ)日糧組（T1）以及在基礎(chǔ)日糧組中分別添加300 mg/kg（T2）、600 mg/kg（T3）和1 000 mg/kg（T4）三丁酸甘油酯（由青島柯能生物科技有限公司提供）的4個(gè)試驗(yàn)組，每個(gè)處理組設(shè)置3個(gè)重復(fù)。在飼料制備之前，魚(yú)粉和豆粕等飼料原料先粉碎，過(guò)40目篩網(wǎng)，再按配比從小到大逐級(jí)定量均勻混合;再將其放入V型攪拌機(jī)中充分混合25 min。隨后將豆油與已混好的干粉充分混合，再加入適量的水揉勻，將其加工制成直徑2.0 mm的顆粒飼料，晾干至飼料水分為10%左右，置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。飼料配方表及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

1.2? ? 試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)與管理

選用同規(guī)格、同批次的健康草魚(yú)魚(yú)苗，在婁底水庫(kù)中進(jìn)行網(wǎng)箱養(yǎng)殖。正式養(yǎng)殖試驗(yàn)之前，馴食1周以適應(yīng)環(huán)境和飼料（5 m×5 m×5 m）。饑餓24 h后，挑選規(guī)格一致、體質(zhì)健壯的草魚(yú)幼魚(yú)隨機(jī)分到各個(gè)網(wǎng)箱（2 m×2 m×2 m），每個(gè)網(wǎng)箱投放40尾草魚(yú)，草魚(yú)初始體重（20.04±0.19）g。每天投喂3次，投喂時(shí)間為7：00、12：00和17：00，日投餌量為體質(zhì)量的3%～5%，養(yǎng)殖周期為8周。養(yǎng)殖試驗(yàn)期間，水溫為27.0～31.0 ℃。

1.3? ? 樣品采集

試驗(yàn)第8周結(jié)束時(shí)，禁食24 h，每網(wǎng)箱隨機(jī)選取5尾草魚(yú)測(cè)量體長(zhǎng)、體重后，冰盤(pán)迅速解剖并分離內(nèi)臟團(tuán)、肝胰臟，腸道并稱(chēng)取重量，測(cè)量腸道長(zhǎng)度，計(jì)算形體指標(biāo)。同時(shí)用冷凍的去離子水沖去剔除的腸周?chē)竞蛢?nèi)容物，取腸道放入1.5 mL離心管中，編號(hào)并標(biāo)記，放入-80 ℃冰箱保存?zhèn)錅y(cè)腸道消化酶活力。取5尾草魚(yú)置于-20 ℃冰箱冰凍作全魚(yú)樣品，用于體成分的測(cè)定。

1.4? ? 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1? ? 魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)成分。魚(yú)體常規(guī)成分測(cè)定參照文獻(xiàn)[11]。其中水分的測(cè)定采用105 ℃烘箱干燥恒重法測(cè)定，粗蛋白的測(cè)定采用凱氏定氮法，粗脂肪的測(cè)定采取索氏抽提法，粗灰分采用550 ℃灼燒法測(cè)定。

1.4.2? ? 形體指標(biāo)。肥滿(mǎn)度（CF）（g/cm3）=100×終末魚(yú)重（g/尾）×體長(zhǎng)（cm/尾）-3;臟體指數(shù)（VSI）（%）=100×內(nèi)臟重量（g/尾）/終末魚(yú)重（g/尾）;肝體指數(shù)（HSI）（%）=100×肝胰臟重量（g/尾）/終末魚(yú)重（g/尾）;腸體指數(shù)（ISI）（%）=100×腸道重量（g/尾）/終末魚(yú)重（g/尾）;腸長(zhǎng)指數(shù)（RGL）（%）=100×腸道長(zhǎng)度（cm/尾）/終末魚(yú)重（g/尾）。

1.4.3? ? 腸道消化酶。腸道消化酶在測(cè)定前需將腸道樣品解凍，淀粉酶和脂肪酶用生理鹽水進(jìn)行勻漿，胰蛋白酶用勻漿介質(zhì)進(jìn)行勻漿，放入離心機(jī)3 500 r/min下離心10 min，取上清液保存待測(cè)，然后用南京建成生物有工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定儀器為酶標(biāo)儀（Thermo-1510）和分光光度計(jì)（UV-5200）。

1.5? ? 數(shù)據(jù)處理與分析

通過(guò)SPSS 19.0和Excel 2016對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和數(shù)據(jù)處理，若數(shù)據(jù)差異顯著（P<0.05），則Duncan分析進(jìn)行多重檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SE）表示。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)成分

由表2可知，與對(duì)照組T1相比，T4組的水分含量顯著下降（P<0.05），粗蛋白含量有提高的趨勢(shì)，T2、T3組的魚(yú)體水分和粗蛋白含量無(wú)顯著差異（P>0.05）。各組之間的粗脂肪和粗灰分含量無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.2? ? 形體指標(biāo)

由表3可知，與對(duì)照組T1相比，T2、T3和T4組的肝體指數(shù)顯著提高（P<0.05），T2組的腸體指數(shù)顯著提高（P<0.05）。T3和T4組的肥滿(mǎn)度、臟體指數(shù)、腸體指數(shù)和腸長(zhǎng)指數(shù)較對(duì)照組均有上升的趨勢(shì)（P>0.05）。

2.3? ? 腸道消化酶活性

由圖1、2、3可知，與對(duì)照組T1相比，T3組草魚(yú)腸道脂肪酶活力顯著提高（P<0.05），淀粉酶和胰蛋白酶活力呈下降趨勢(shì)（P>0.05）。T1、T2和T4組間的脂肪酶活力無(wú)顯著變化（P>0.05）。T2組的淀粉酶活力較T1組有提高的趨勢(shì)（P>0.05），T4組顯著提高（P<0.05）。T2和T4組的胰蛋白酶活力與對(duì)照組T1比有提高的趨勢(shì)（P>0.05）。

3? ? 結(jié)論與討論

該試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加三丁酸甘油酯能夠改變草魚(yú)幼魚(yú)的魚(yú)體成分、提高肝體指數(shù)、腸體指數(shù)等形體指標(biāo)，增加腸道消化酶活力。

魚(yú)類(lèi)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值主要在于魚(yú)肉中含有豐富的完全蛋白質(zhì)。通常來(lái)說(shuō)，魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)成分是比較穩(wěn)定的。本研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，不同添加量的三丁酸甘油酯對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)的魚(yú)體粗脂肪和粗灰分含量無(wú)顯著影響，這與研究丁酸鈉對(duì)草魚(yú)[12]體成分的作用研究結(jié)果類(lèi)似。但是添加1 000 mg/kg三丁酸甘油酯顯著降低了草魚(yú)魚(yú)體的水分含量，粗蛋白含量有提高的趨勢(shì)。這說(shuō)明三丁酸甘油酯能促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，原因可能與丁酸能調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)分泌水平有關(guān)[13]，具體原因需要進(jìn)一步深入的研究。陳秀梅等[14]在建鯉（Cyprinus carp-iovar Jian）上的研究也發(fā)現(xiàn)γ-氨基丁酸（4-Aminobutyric acid）的添加提高了魚(yú)體肌肉中的蛋白質(zhì)含量。

魚(yú)體肥滿(mǎn)度是檢驗(yàn)魚(yú)體肥瘦的重要指標(biāo)，臟體比、肝體比、腸體比和腸長(zhǎng)比是判斷內(nèi)臟、肝臟及腸道發(fā)育程度的關(guān)鍵標(biāo)志。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，添加600、1 000 mg/kg三丁酸甘油酯的處理組較對(duì)照組而言，草魚(yú)的肥滿(mǎn)度和臟體比均有提高的趨勢(shì)。喬麗紅等[15]研究表明，三丁酸甘油酯有提高建鯉臟體比的趨勢(shì);而孫浪等[16]發(fā)現(xiàn)2.5 g/kg丁酸鈉可以顯著提高鯽魚(yú)（Carassius auratus）的肥滿(mǎn)度。上述研究結(jié)果與本結(jié)果類(lèi)似。同時(shí)，與對(duì)照組相比，添加不同水平的三丁酸甘油酯顯著提高了草魚(yú)幼魚(yú)的肝體比。這可能是因?yàn)槎∷崮艽龠M(jìn)乙酰COA合成脂肪，或通過(guò)羥甲基戊二酸單酰COA途徑促進(jìn)胴體合成，從而促進(jìn)了脂肪的吸收利用[17]。研究表明，腸體比和腸長(zhǎng)比是衡量動(dòng)物腸道消化吸收功能的指標(biāo)之一[18]。本研究中，與對(duì)照組相比，飼料中添加600、1 000 mg/kg三丁酸甘油酯后，草魚(yú)的腸體比和腸長(zhǎng)比也有增加的趨勢(shì)。原因可能是丁酸通過(guò)調(diào)節(jié)mRNA和蛋白質(zhì)的合成，或者刺激結(jié)腸內(nèi)水和鈉離子的吸收，提高黏膜修復(fù)酶的活性，從而促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞增殖，提高腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度，并增加其質(zhì)量和長(zhǎng)度[19-20]。相似結(jié)論在田莉[21]研究丁酸鈉對(duì)草魚(yú)腸道健康影響的試驗(yàn)中也有體現(xiàn)。

腸道消化酶（脂肪酶、淀粉酶和胰蛋白酶等）活力的增加能夠提高動(dòng)物腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)[22-23]。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，添加600 mg/kg三丁酸甘油酯能顯著提高草魚(yú)的腸道脂肪酶活力，添加300、1 000 mg/kg三丁酸甘油酯組的淀粉酶和胰蛋白酶活力也有不同程度的上升。在豬[24-25]、肉雞[26]、草魚(yú)[21]的研究也發(fā)現(xiàn)，三丁酸甘油酯能夠提高動(dòng)物腸道脂肪酶、淀粉酶和胰蛋白酶活力，與本研究結(jié)果類(lèi)似。通常來(lái)說(shuō)，丁酸具有降低飼糧pH值、增加腸道酸度、激活蛋白酶原和提高消化酶的作用[27-28]。同時(shí)，丁酸可以誘導(dǎo)胰島素和胰高血糖素的產(chǎn)生，起到調(diào)節(jié)腸道消化酶的效果[29-30]。但是600 mg/kg三丁酸甘油酯組的草魚(yú)幼魚(yú)腸道淀粉酶和胰蛋白酶活力較對(duì)照組而言有一定的下降趨勢(shì)，這與以往的研究結(jié)論稍有不同，具體原因需要進(jìn)一步的研究。從整體上講，草魚(yú)幼魚(yú)飼糧中添加三丁酸甘油酯能夠提高機(jī)體腸道消化酶活力。

4? ? 參考文獻(xiàn)

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