明目十一味丸治療年齡相關(guān)性黃斑變性的活性單體

曉琴 魯占軍 于文貞 張?zhí)熨Y 李善善 王彥夫 布仁巴圖

(內(nèi)蒙古民族大學(xué) 1蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2附屬醫(yī)院；3北京大學(xué)人民醫(yī)院眼科暨眼科研究所視覺(jué)損傷與修復(fù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜疾病診治研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)是指隨著年齡增加，視網(wǎng)膜組織退化、變薄，引起黃斑功能下降，導(dǎo)致中心視力下降的致盲性眼病，發(fā)病率可達(dá)13%，約占老年人失明病因的20%〔1〕。臨床上AMD有干性和濕性兩種表現(xiàn)類型，濕性AMD患者比例較少，但約90%的AMD相關(guān)視力喪失與濕性AMD有關(guān)〔2〕，其主要的病理機(jī)制為脈絡(luò)膜新生血管(CNV)形成，導(dǎo)致血管滲漏和出血，最終引起盤狀瘢痕，進(jìn)而影響視力。研究證明，CNV的發(fā)生是促血管生長(zhǎng)因子和抑制血管形成因子平衡失調(diào)的結(jié)果，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是一種對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞具有高特異性的新生血管因子，是促進(jìn)新生血管形成的主要生長(zhǎng)因子，在CNV的發(fā)生中具有重要作用。AMD除了對(duì)患者造成嚴(yán)重的視力損傷，也給患者心理健康和社會(huì)功能帶來(lái)負(fù)面影響，給患者家屬和社會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前抗VEGF治療AMD有了一定的成效，但不能根治，在一定程度上延緩其進(jìn)展、減少?gòu)?fù)發(fā)率、有效減少嚴(yán)重視力喪失是目前所期望的。預(yù)防AMD的理想方法是早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷，有失明風(fēng)險(xiǎn)之前得到治療。AMD發(fā)病與患者的年齡、遺傳、吸煙、飲食、氧化應(yīng)激、免疫炎癥反應(yīng)、心血管疾病等因素有關(guān)。對(duì)于濕性AMD的治療，蒙醫(yī)具有多組分、多靶點(diǎn)、整體化的治療優(yōu)勢(shì)。蒙藥明目十一味丸〔3〕是蒙醫(yī)眼科常用驗(yàn)方，本方性涼，由訶子、姜黃、藏紅花、牛黃、丁香、手參、滑石、赭石、熊膽、朱砂、硇砂組成，主治血希拉性眼疾、昏朦、目赤、翳障、干性結(jié)膜炎等眼疾。各藥合用具備清肝熱、明目、解毒、去翳、滋補(bǔ)，對(duì)血希拉性眼疾及干性結(jié)膜炎均有功效，在視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜血管性眼病中也有廣泛的應(yīng)用〔4，5〕。為了更好地繼承和發(fā)展祖國(guó)傳統(tǒng)蒙醫(yī)藥學(xué)，需要進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)古方及驗(yàn)方的收集、歸納、整理和驗(yàn)證，同時(shí)結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和手段，明確眼科用蒙藥的有效成分及其對(duì)應(yīng)的藥理作用。明目十一味丸組方中的藏紅花、訶子、姜黃等藥物活性成分與黃斑變性密切關(guān)聯(lián)，本文對(duì)其抗氧化應(yīng)激、抗炎、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等幾個(gè)方面闡述其治療AMD的研究進(jìn)展。

1 訶 子

蒙藥訶子在蒙藥界被稱作是藥王，是使君子科欖仁樹屬植物訶子、絨毛訶子或恒河訶子的干燥成熟果實(shí)。訶子味澀、性平。有祛三弊所引起的諸疾，調(diào)理三根、解毒功效。用于治療赫依、希拉、巴達(dá)干合并癥和聚和性疾病，中毒癥及熱性眼疾。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)訶子提取物具有抗菌、抗氧化、降血糖、抗病毒、抗炎、殺滅或抑制惡性腫瘤細(xì)胞等作用〔6〕。

1.1訶子有效活性成分 訶子主要含鞣質(zhì)類、芬酸類、三萜類等。訶子中的鞣質(zhì)是抗腫瘤、減烏頭毒的活性成分，其成分為訶子酸、訶黎勒酸、訶子次酸等〔7〕，酚酸類沒(méi)食子酸是抗腫瘤的活性成分〔8〕。

1.2訶子治療AMD相關(guān)藥理作用 細(xì)胞在整個(gè)生命過(guò)程中不斷進(jìn)行氧化反應(yīng)，這一連鎖反應(yīng)產(chǎn)生的副產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞的損傷涉及各種疾病的發(fā)生過(guò)程，包括AMD。因視網(wǎng)膜本身比其他組織器官耗氧量高，易受到累積性光輻射，容易產(chǎn)生氧化反應(yīng)，故容易受到氧化反應(yīng)的損傷。臨床觀察發(fā)現(xiàn)訶子具有解毒、抗氧化能力，其清除自由基的能力是依達(dá)拉奉的數(shù)倍〔9〕。訶子醇提物、水提物、乙酸乙酯萃取物均有較強(qiáng)的抗氧化活性〔10〕，其多酚類化合物沒(méi)食子酸，對(duì) 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和 2，2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)的清除率較高，其抗氧化能力與維生素C相當(dāng)〔11〕，其水提物能夠降低巨噬細(xì)胞中促炎介質(zhì)一氧化氮、誘生型一氧化氮合酶和環(huán)氧合酶-2的表達(dá)〔12〕。在各種多酚中，沒(méi)食子酸(3，4，5-三羥基苯甲酸)，一種天然存在的低分子量三苯酚化合物，已成為一種強(qiáng)大的抗氧化劑和有效的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑，主要有自由基清除活性，可抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，維持內(nèi)源性防御系統(tǒng)能力〔13〕。訶黎勒酸有抗視網(wǎng)膜腫瘤作用，可調(diào)控凋亡蛋白，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。訶黎勒酸可影響腫瘤信號(hào)傳導(dǎo)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡〔14〕。視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜新生血管與腫瘤血管新生過(guò)程基本相同，訶子中的活性成分可抑制血管新生。訶黎勒酸是雙重抑制劑，能夠減少VEGF，抑制大鼠主動(dòng)脈環(huán)和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEs)血管生成〔15〕，降低VEGF-A〔16〕。訶子還具有抗病毒〔17〕和免疫調(diào)節(jié)〔18〕及調(diào)節(jié)代謝活性作用，研究顯示沒(méi)食子酸可能會(huì)減少高脂膳食(HFD)大鼠的腎周脂肪組織，這些發(fā)現(xiàn)也表明沒(méi)食子酸(GA)有可能預(yù)防糖尿病(DM)并發(fā)癥，包括視神經(jīng)及視網(wǎng)膜病變的進(jìn)展〔19〕。

2 藏紅花

藏紅花為鳶尾科番紅花屬多年生草本植物的干燥柱頭，性涼，味微苦，是一種昂貴的蒙藥材，有清肝熱，調(diào)經(jīng)，活血，止血，止痛，消腫，滋養(yǎng)正精之功效。用于治療肝腫大、肝損傷、目黃、肝血熱盛、肝功衰弱、月經(jīng)失調(diào)等疾患。

2.1藏紅花有效活性成分 藏紅花的化學(xué)成分主要包括萜類、黃酮類、蒽醌類、多取代單苯環(huán)類、環(huán)己烷和環(huán)己烯衍生物、氨基酸及生物堿類、呋喃類等，其黃酮類成分主要包括黃酮醇及其苷類、黃酮及其苷類，以花瓣中的含量最豐富，目前已分離鑒定得到19個(gè)化合物〔20〕。藏紅花化學(xué)成分的研究主要集中在柱頭部位。主要有效成分為藏紅花酸和藏紅花素〔21〕。藏紅花酸具有抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗高血壓及治療出血性休克、抗氧化、保肝利膽等作用；藏紅花苷具有降血壓、降糖、降脂、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化等多種藥理作用〔20〕。

2.2藏紅花治療AMD相關(guān)藥理作用 視網(wǎng)膜及其黃斑部是最容易受到活性氧損傷的組織。視網(wǎng)膜疾病，無(wú)論其病因如何，都涉及氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡途徑的激活，神經(jīng)保護(hù)因子的使用在病理學(xué)的所有階段都是至關(guān)重要的，即使視力完全喪失也是如此?！惭芯孔C明，P23H大鼠(一種視網(wǎng)膜色素變性動(dòng)物模型)保存的藏紅花成分保護(hù)視網(wǎng)膜光感受器的形態(tài)和數(shù)量，毛細(xì)管網(wǎng)絡(luò)和視覺(jué)反應(yīng)，藏花醛的神經(jīng)保護(hù)作用使這些化合物可能用于視網(wǎng)膜退行性疾病的治療應(yīng)用〔22〕?！巢丶t花素可抑制視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)凋亡和視神經(jīng)纖維的變性，對(duì)慢性高眼壓大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用〔23〕。越來(lái)越多的研究顯示藏紅花和各關(guān)鍵成分的價(jià)值單獨(dú)或與其他草藥提取物結(jié)合應(yīng)用于各種治療或制藥領(lǐng)域，可以作為光療法、癌癥、心血管和神經(jīng)退行性疾病及缺氧誘導(dǎo)的危險(xiǎn)病癥的輔助治療〔24〕。P2X7型嘌呤能受體存在于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外，包括調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)和視網(wǎng)膜細(xì)胞健康的小膠質(zhì)細(xì)胞，涉及視網(wǎng)膜色素變性和AMD等視網(wǎng)膜神經(jīng)退行性疾病。藏紅花通過(guò)靶向P2X7受體減少ATP誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)研究表明，藏紅花可保護(hù)光感受器免受光誘導(dǎo)的損傷，同時(shí)保留視網(wǎng)膜形態(tài)和視覺(jué)功能，并改善AMD患者的視網(wǎng)膜光敏感性〔25〕。藏紅花素類似物可增加視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜中的血流量，并促進(jìn)視網(wǎng)膜功能恢復(fù)〔26〕。在大鼠視網(wǎng)膜缺血/再灌注模型中，藏紅花素通過(guò)激活肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信號(hào)通路阻止損傷誘導(dǎo)的RGCs凋亡〔27〕。藏紅花素在大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注(RIR)中發(fā)揮著重要作用，其不僅可以降低視網(wǎng)膜炎性因子腫瘤壞死因子(TNF)-α及白細(xì)胞介素(IL)-1β的含量，對(duì)恢復(fù)視網(wǎng)膜組織形態(tài)也具有促進(jìn)作用〔28〕。

目前藏紅花抗氧化作用的相關(guān)研究較多，例如，藏紅花的活性成分被描述為具有保護(hù)和治療特性的強(qiáng)效類胡蘿卜素抗氧化劑〔29，30〕。藏紅花補(bǔ)充劑可以誘導(dǎo)AMD中期視網(wǎng)膜功能的顯著改善〔31〕，并在短期內(nèi)治療難治性DME〔32〕。

3 姜 黃

姜黃(Curcumin)是姜科姜黃屬植物姜黃的干燥根莖，為多年生草本植物，是常用的蒙藥。本品味辛、苦、性溫，歸脾、肝經(jīng)，有殺粘、防腐爛、解毒、療傷之功效，被廣泛應(yīng)用于白喉、炭疽等粘毒性疾病，遺精、中毒癥等。

3.1姜黃的有效活性成分 姜黃主要包含揮發(fā)油和姜黃素類，此外還有糖類、甾醇等；其中姜黃素是蒙藥姜黃的主要成分，有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣泛的臨床作用，如抗氧化、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂等〔33〕。目前已鑒定了姜黃素β-谷甾醇、琥珀酸、丁烯醛、姜酮、3，3，5-三甲基-4-對(duì)甲基-苯基4-羥基-環(huán)己酮、雙去甲氧基姜黃素、單去甲氧基姜黃素、N，N-二甲基苯甲醛、原兒茶酸、胡蘿卜苷、蔗糖等13個(gè)化合物。

3.2姜黃素治療AMD的相關(guān)藥理作用 姜黃素具有廣泛的藥理學(xué)活性，能夠調(diào)節(jié)促炎及抗炎因子的表達(dá)，抑制氧自由基及抑制細(xì)胞凋亡，是多類疾病的潛在藥劑〔34〕。姜黃素具有很強(qiáng)的抗炎作用〔35〕，用于治療腸道疾病，如潰瘍性結(jié)腸炎〔36〕。姜黃素可抑制炎癥反應(yīng)介質(zhì)，從而有效保護(hù)血管內(nèi)皮〔37，38〕。視網(wǎng)膜細(xì)胞在生命過(guò)程中進(jìn)行氧化反應(yīng)，姜黃素可激活抗氧化酶，保護(hù)活性氧 (ROS)〔39〕。研究表明，姜黃素在 Nrf2 通路中激活抗氧化蛋白、硫氧還蛋白，保護(hù)神經(jīng)元免受氧和葡萄糖剝奪引起的死亡，防止視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化〔40〕，其作用可能與選擇性抑制核因子(NF)-κB信號(hào)通路有關(guān)〔41〕。 姜黃素C和其衍生物C3對(duì)丙烯醛誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮(ARPE)細(xì)胞死亡有抑制效果，對(duì)丙烯醛誘導(dǎo)的ARPE細(xì)胞線粒體膜功能衰退具有抑制作用〔42〕；姜黃素的抗腫瘤作用被認(rèn)為是通過(guò)許多不同的信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的，如自噬〔43〕、血管生成〔44〕。VEGF是刺激視網(wǎng)膜新生血管的關(guān)鍵因子，與AMD脈絡(luò)膜新生血管的關(guān)系密不可分。姜黃素納米顆粒在角膜病治療中證實(shí)了其可抑制VEGF、炎性細(xì)胞因子和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的表達(dá)，抑制脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的角膜細(xì)胞中的NF-κB，是預(yù)防角膜新生血管形成的潛在候選者〔45〕。兔減燒傷角膜實(shí)驗(yàn)研究表明，姜黃素可有效降低角膜減燒傷后房水VEGF的表達(dá)并使CNV數(shù)目減少〔46〕。姜黃素類組分可通過(guò)下調(diào)Toll樣受體(TLR)4/NF-κB通路抑制IL-6、TNF-α等炎癥因子的產(chǎn)生，從而發(fā)揮對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用〔47〕。Curcumin能提高人胚胎干細(xì)胞(ESCs)向視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)樣細(xì)胞的定向誘導(dǎo)效率，其主要機(jī)制可能是通過(guò)促進(jìn)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的活性，從而促進(jìn)ESCs誘導(dǎo)獲得性視網(wǎng)膜色素上皮樣細(xì)胞(iRPE)樣細(xì)胞的分化和成熟〔48〕。

蒙藥明目十一味丸是依功方配制而成的復(fù)方制劑，方中訶子、姜黃為君藥，藏紅花、牛黃為臣藥。明目十一味丸是依功效理論指導(dǎo)下配制的復(fù)方制劑，是蒙醫(yī)臨床用藥的主要形式。蒙藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)未能充分揭示蒙藥配伍理論及臨床功效的核心內(nèi)容。在與蒙醫(yī)藥同屬傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的中醫(yī)學(xué)研究中，北京中醫(yī)藥大學(xué)雷海敏研究團(tuán)隊(duì)在中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究中發(fā)現(xiàn)超分子結(jié)構(gòu)的形成會(huì)顯著影響單體的活性〔49〕。該結(jié)果從新的視角揭示超分子是復(fù)方藥物物質(zhì)基礎(chǔ)之一，詮釋了復(fù)方配伍理論的科學(xué)內(nèi)涵，這對(duì)于同屬的蒙醫(yī)方劑治療各種疾病的研究，包括AMD及蒙藥開發(fā)研究具有重要的借鑒意義。