紫錐菊的藥理藥效學(xué)、毒理學(xué)研究及其在犬臨床中的應(yīng)用現(xiàn)狀

馮言言，孔梅，鄭莉 ，魏秀麗，李龍飛，常雪，崔進(jìn)，吳連勇*

(1.齊魯動(dòng)物保健品有限公司，濟(jì)南 250100；2.山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所/山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250022)

隨著我國社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，我國的寵物文化也相應(yīng)有了較大的提升，越來越多的寵物進(jìn)入到人們的日常生活中，其中以寵物犬的飼養(yǎng)率最高，犬的健康問題也越來越引起人們的重視。寵物犬在飼養(yǎng)中遇到的常見病比較多，其中犬瘟熱和犬細(xì)小病毒病因傳染性強(qiáng)、發(fā)病率及死亡率高，已成為危害養(yǎng)犬業(yè)的主要傳染病。目前，對犬瘟熱和犬細(xì)小病毒病的治療尚無有效藥物，疫苗免疫對預(yù)防這兩種病取得了一定效果，但由于受疫苗自身、免疫程序、母源抗體及個(gè)體差異等多種因素的影響，造成免疫保護(hù)率低，免疫失敗而爆發(fā)疾病，為防止不必要的經(jīng)濟(jì)損失，有效的辦法就是使用增強(qiáng)機(jī)體抵抗力或增強(qiáng)疫苗效價(jià)的藥物，如免疫增強(qiáng)劑，來提高機(jī)體的免疫力以及增強(qiáng)疫苗效價(jià)。

紫錐菊作為一種天然植物中藥，是一種較好的免疫增強(qiáng)劑，具有安全、無毒的優(yōu)勢。紫錐菊除了具有增強(qiáng)機(jī)體免疫的作用外，還可以提高疫苗的免疫效果。紫錐菊與犬的主要傳染病疫苗(如犬瘟熱疫苗、犬細(xì)小病毒疫苗)聯(lián)合使用，能提高寵物免疫后的抗體效價(jià)，提高寵物的免疫力和抵抗力，減少寵物發(fā)病率。將紫錐菊擴(kuò)大應(yīng)用到寵物犬，可填補(bǔ)國內(nèi)寵物臨床免疫增強(qiáng)劑產(chǎn)品稀缺的現(xiàn)狀，具有廣闊的應(yīng)用前景。

1 藥理活性

紫錐菊的主要活性成分為咖啡酸類衍生物、多糖及糖蛋白和烷基酰胺類化合物[1-2]。紫錐菊及其活性成分具有豐富的藥理活性，包括免疫調(diào)節(jié)活性、抗炎活性、抗菌、抗病毒活性以及抗氧化能力等[3-5]。

1.1 免疫調(diào)節(jié)活性 紫錐菊具有顯著的免疫調(diào)節(jié)能力，可增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能(非特異性免疫和特異性免疫)，其免疫調(diào)節(jié)作用與增強(qiáng)巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞功能，刺激細(xì)胞因子和抗體的產(chǎn)生有密切關(guān)系。免疫調(diào)節(jié)活性是紫錐菊最重要的生物活性。

紫錐菊可促進(jìn)免疫器官的生長和發(fā)育[3]。郝智慧等[6]報(bào)道日糧中紫錐菊提取物能夠明顯增加肉仔雞的平均日增重，降低料肉比，提高胸腺和法氏囊指數(shù)。馮善祥[7]報(bào)道紫錐菊可顯著提高雞腔上囊、胸腺和脾臟指數(shù)，促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，從而增強(qiáng)機(jī)體的特異性與非特異性免疫功能。

紫錐菊可調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能與增殖。紫錐菊可顯著提高肉雞自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)的殺傷能力，可明顯刺激T淋巴細(xì)胞的增殖，并且對外周血單個(gè)細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用[8]。紫錐菊提取物能夠明顯提高傳染性法氏囊病病毒疫苗免疫的羅斯308肉雛雞的外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD/CD比值[9]。

紫錐菊可改善血液的免疫功能和生化指標(biāo)。紫錐菊不僅能夠提高小鼠血清免疫球蛋白水平并降低總膽固醇水平，而且可以提高肉雞的紅細(xì)胞RBC-C3bR花環(huán)率(紅細(xì)胞免疫功能)和白細(xì)胞介素-2與腫瘤壞死因子-α含量，還能夠改善血常規(guī)指標(biāo)[10]。另有研究報(bào)道紫錐菊能夠提高雞血漿中的總蛋白和白蛋白的含量，并且降低甘油三酯水平[11]。

紫錐菊可增強(qiáng)體液免疫。研究表明，紫錐菊可提高犬對犬瘟熱疫苗和犬細(xì)小病毒疫苗的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)抗體效價(jià)[12-13]。能夠顯著提高肉雞外周血的IBDV與新城疫疫苗抗體滴度，能夠明顯增強(qiáng)NDV抗體效價(jià)[14]。紫錐菊可顯著提高豬瘟、豬呼吸繁殖障礙綜合征疫苗以及豬丹毒的抗體水平[15-17]。

1.2 抗炎活性 紫錐菊的根和地上部分含有多元不飽和異丁基酰胺，有免疫調(diào)節(jié)功能，可阻止病原體引起的炎癥，具有較強(qiáng)的抗炎活性。此外，紫錐菊的菊苣酸、多糖部分也都具免疫抗炎活性，菊苣酸能夠抑制透明質(zhì)酸酶，保護(hù)膠原蛋白Ⅲ免受可導(dǎo)致降解的自由基的影響[1]。

1.3 抗菌、抗病毒活性 紫錐菊中的菊苣酸和咖啡酸，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌有顯著的抗菌作用。紫錐菊中的多糖可通過調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫防御功能而發(fā)揮抑菌殺菌作用[18]。此外，紫錐菊可預(yù)防白色念珠菌引起的感染[4]。

紫錐菊莖葉及提取物表現(xiàn)出抗病毒活性，其作用機(jī)理與免疫刺激以及抗透明質(zhì)酸有關(guān)。紫錐菊對流感、孢疹病毒有一定的抑制作用，同時(shí)還能抑制透明質(zhì)酸酶的活性，從而阻斷細(xì)胞表面的病毒受體的結(jié)合[19]。

1.4 抗氧化能力 紫錐菊根部及其衍生物是一種很好的天然抗氧化物質(zhì)，且能用于防治由自由基誘導(dǎo)所致的危害。紫錐菊中的菊苣酸和多酚具有抗氧化和凈化體內(nèi)自由基的能力，可保護(hù)皮膚的膠原蛋白不受自由基的損害[5,20-21]。

2 安全藥理學(xué)

紫錐菊在治療范圍或治療范圍以上劑量時(shí)，對犬、貓、小鼠等動(dòng)物的心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)不存在潛在的不希望出現(xiàn)的不良影響。

龐云露等[22]研究了紫錐菊對清醒比格犬心率、心電、血壓和呼吸的影響。研究結(jié)果顯示，口服0.125～1.25 g/kg紫錐菊對清醒比格犬心率有明顯降低作用，對心電圖P波、T波、R波、Q-T間期、QRS間期、P-R間期及血壓、呼吸均無顯著影響(P>0.05)，這表明，紫錐菊對犬的呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)均無顯著影響，在藥效劑量應(yīng)用時(shí)安全可靠。

張英濤等[23]研究報(bào)道，以相當(dāng)于生藥量5、10、20 g/kg的松果菊提取物經(jīng)十二指腸給予麻醉貓后，對貓的血壓、心電圖、心率、心律、呼吸頻率、呼吸深度未見明顯影響；以松果菊生藥5、10、20 g/kg給小鼠灌胃，每日1次，連續(xù)7 d，對小鼠自發(fā)活動(dòng)及神經(jīng)系統(tǒng)均未見明顯影響。

張偉等[24]對健康昆明小鼠連續(xù)一周灌服不同濃度的紫錐菊根末生藥液，觀察其對健康昆明小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和心率的影響，以考察紫錐菊根末的潛在不良反應(yīng)。研究結(jié)果表明，紫錐菊根末對健康昆明小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和心率均無明顯影響。

3 毒理學(xué)研究

紫錐菊及其提取物毒性較低，安全范圍較大，是一種安全的中草藥。紫錐菊無致癌、致畸和致突變作用，無生殖遺傳毒性。

EMA報(bào)道[25]紫錐菊具有較低的急性毒性，新鮮壓制的紫錐菊汁液的LD50值高于推薦使用的最高劑量，例如高于大鼠口服給藥劑量15 g/kg bw，高于大鼠靜脈注射劑量5 g/kg，高于小鼠口服給藥劑量30 g/kg bw，高于小鼠靜脈注射劑量10 g/kg。

EMA報(bào)道了新鮮壓制的紫錐菊汁液的重復(fù)給藥毒性，以800、2400或8000 mg/kg bw/day劑量給藥，連續(xù)給藥4周，與對照組相比，臨床化學(xué)指標(biāo)以及尸檢指標(biāo)均未改變。EMA報(bào)道紫錐菊無致突變性。關(guān)于紫錐菊的致癌性，EMA稱考慮到紫錐菊無致突變性，因此，認(rèn)為沒有必要開展致癌性研究。

趙丹等[26]研究了紫錐菊粉對大鼠的致畸作用，評(píng)價(jià)紫錐菊的生殖毒性。試驗(yàn)將性成熟SD大鼠雌雄合籠交配，將孕鼠隨機(jī)分成紫錐菊高(1 g/kg)、中(0.5 g/kg)、低(0.05 g/kg)3個(gè)劑量組，陰性對照組和陽性對照組，于孕期7～16 d經(jīng)口給予受試物，觀察母鼠和胎鼠的生長發(fā)育情況。研究結(jié)果顯示，受試物各劑量組的孕鼠增重、活胎的體重、身長和尾長均顯著高于陽性對照組(P<0.01)，而吸收胎數(shù)、死胎數(shù)、畸形率均顯著低于陽性對照組。受試物各劑量組與陰性對照組間的所有指標(biāo)均無顯著差異。結(jié)果表明，紫錐菊粉對大鼠無母體毒性、胚胎毒性和致畸作用。

徐培渝等[27]研究了紫錐菊提取物浸膏對孕鼠和胎鼠的毒性和致畸性。研究根據(jù)人體推薦劑量，設(shè)3個(gè)劑量組，分別為833.3、1666.6和3333.3 mg/kg，分別相當(dāng)于人體推薦劑量的25、50和100倍，另設(shè)一個(gè)陰性對照組和一個(gè)陽性對照組。試驗(yàn)在孕期7～16 d經(jīng)口給予受試物，檢查孕鼠和胎鼠相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示，各劑量組孕鼠增重正常，對每窩活胎鼠的平均體重、身長和尾長無明顯的影響，未發(fā)現(xiàn)外觀畸形和內(nèi)臟畸形，各劑量組孕鼠增重?zé)o明顯減少。研究表明，紫錐菊無母體毒性和胚胎毒性，未見致畸性。

趙丹等[28]通過對紫錐菊提取物進(jìn)行昆明小鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗(yàn)，評(píng)價(jià)紫錐菊提取物的潛在致突變性。試驗(yàn)用紫錐菊提取物制備混懸液進(jìn)行Ames試驗(yàn)，采用平板滲入法，計(jì)數(shù)TA97、TA98、TA100、TA102標(biāo)準(zhǔn)測試株在4個(gè)不同濃度下，于37 ℃培養(yǎng)48 h后的回復(fù)突變菌落數(shù)。結(jié)果顯示無論在+S9和-S9的情況下，各劑量組均未引起測試菌株回變菌落數(shù)的明顯增加，Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。這表明，紫錐菊提取物不引起鼠傷寒沙門氏菌的回復(fù)突變數(shù)增加，無致基因突變性。

于蒙等[29]研究了紫錐菊提取物的遺傳毒性。試驗(yàn)選用常規(guī)方法進(jìn)行骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)和Ames試驗(yàn)。研究結(jié)果顯示，紫錐菊提取物各劑量組與陰性對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。研究可以得出結(jié)論，紫錐菊提取物對小鼠未見生殖遺傳毒性，對鼠傷寒沙門氏菌無致突變性。

4 臨床應(yīng)用

紫錐菊可增強(qiáng)犬對犬瘟熱疫苗、犬細(xì)小病毒疫苗以及狂犬病疫苗的抗體效價(jià)，對犬免疫系統(tǒng)具有正向促進(jìn)作用，并且安全無毒副作用，可作為臨床上用于增強(qiáng)犬對犬瘟熱疫苗和犬細(xì)小病毒疫苗等免疫效果的免疫增強(qiáng)劑。

余殷興[12]研究了紫錐菊根末在犬臨床上的應(yīng)用。研究將試驗(yàn)犬隨機(jī)分成4組，分別為紫錐菊根末低、中、高劑量組及空白對照組，觀察7d后，再連續(xù)給藥21 d，停藥后觀察7 d，試驗(yàn)期共28 d，分別在試驗(yàn)第7、14、21、28天，前肢橈靜脈采血后分離血清，檢測血清犬瘟熱病毒(CDV)、犬細(xì)小病毒(CPV)抗體含量，測定白細(xì)胞介素(IL-2、IL-6、IFN-α、LYS)含量。研究結(jié)果顯示，紫錐菊根末能夠提高免疫犬外周血清中IL-2含量，降低IL-6含量，增加LYS含量，并且能夠在一定時(shí)間內(nèi)保持一定濃度水平。

Guan等[13]研究了紫錐菊根制劑對犬瘟熱病毒(CDV)和犬細(xì)小病毒疫苗(CPV)的免疫增強(qiáng)作用。試驗(yàn)選用25只健康貴賓犬幼犬，隨機(jī)分到5個(gè)試驗(yàn)組，每組5只。所有試驗(yàn)犬接種弱毒活疫苗，連續(xù)三天觀察副作用。試驗(yàn)第1～4組犬分別以0.1 g/kg、0.2 g/kg、0.4 g/kg或0.8 g/kg的劑量每日口服紫錐菊制劑，第 5組犬作為不給藥對照組。在給予紫錐菊制劑21 d后，再繼續(xù)觀察7 d，整個(gè)試驗(yàn)周期為28 d。在研究第7、14、21和28天使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定血清抗體對CPV和CDV的效價(jià)，使用單因素方差分析進(jìn)行結(jié)果分析。研究結(jié)果顯示，口服紫錐菊制劑后抗體效價(jià)明顯升高，并且與劑量呈正相關(guān)，0.8 g/kg(第4組)犬的犬瘟熱病毒抗體和犬細(xì)小病毒抗體在所有時(shí)間點(diǎn)均有明顯升高。研究表明，紫錐菊可以作為增強(qiáng)犬對犬瘟熱疫苗和犬細(xì)小病毒疫苗效價(jià)的免疫增強(qiáng)劑。

牛小飛等[30]研究了紫錐菊對犬瘟熱疫苗免疫效果的影響。試驗(yàn)將健康犬隨機(jī)分為2組，即試驗(yàn)組和對照組，每組8只，根據(jù)抗體水平的檢測結(jié)果在第45日齡時(shí)所有犬只接種犬瘟熱疫苗，試驗(yàn)組在45～60日齡時(shí)每日分別灌服紫錐菊提取物20 ml，對照組灌服同樣劑量的生理鹽水。研究在45、60、75日齡對試驗(yàn)犬進(jìn)行前肢靜脈采血，離心，制備血清。采用血清微量中和試驗(yàn)測定血清中犬瘟熱病毒(CDV)抗體效價(jià)。研究結(jié)果顯示，幼犬在45日齡時(shí)母源抗體效價(jià)較低，處于有效保護(hù)的臨界點(diǎn)，此時(shí)接種犬瘟熱疫苗，到60日齡時(shí)幼犬重新處于有效的抗體保護(hù)狀態(tài)下，其中試驗(yàn)組犬只抗體效價(jià)顯著高于對照組；75日齡時(shí)抗體效價(jià)有所下降，但仍處在有效保護(hù)范圍內(nèi)，試驗(yàn)組犬抗體效價(jià)仍顯著高于對照組。研究表明，飼喂紫錐菊提取物的試驗(yàn)組犬瘟熱病毒抗體效價(jià)明顯高于正常飼喂的對照組，紫錐菊對犬的疫苗免疫有增強(qiáng)作用。

Torkan等[31]研究口服紫錐菊提取物對犬免疫系統(tǒng)的作用。研究選用14只健康犬，隨機(jī)分到兩個(gè)治療組，第一組給予5%紫錐菊提取物，每天兩次，連續(xù)給藥兩個(gè)月，第二組動(dòng)物飲水作為對照組。在第0、30和60天對試驗(yàn)犬采血進(jìn)行血液學(xué)和免疫學(xué)試驗(yàn)，血液試驗(yàn)包括紅細(xì)胞積壓、血紅蛋白、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和B細(xì)胞，進(jìn)一步使用血液樣本進(jìn)行IgM和巨噬細(xì)胞吞噬百分?jǐn)?shù)檢測。研究結(jié)果顯示，紫錐菊給藥組犬血液中紅細(xì)胞積壓、血紅蛋白、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞、吞噬百分?jǐn)?shù)和IgM數(shù)量明顯升高。同時(shí)，在試驗(yàn)中觀察到紫錐菊對免疫系統(tǒng)具有正向促進(jìn)作用。紫錐菊給藥組動(dòng)物的紅細(xì)胞積壓、血紅蛋白、吞噬百分?jǐn)?shù)以及IgM隨著時(shí)間具有明顯的改變。研究表明，紫錐菊提取物對犬具有免疫刺激活性。

Sgorlon等[32]研究了犬在飼喂過程中分別添加紫錐菊等4種營養(yǎng)劑的作用。研究選用74只犬進(jìn)行試驗(yàn)，24只健康犬作為對照，試驗(yàn)組犬連續(xù)60 d飼喂分別含有包括紫錐菊在內(nèi)的4種營養(yǎng)劑，其中紫錐菊試驗(yàn)組犬為14只。在試驗(yàn)開始前(第0天)以及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)(第60天)對試驗(yàn)犬稱重，并采集血漿樣品。紫錐菊營養(yǎng)劑添加組犬的作用體現(xiàn)在血漿中腫瘤壞死因子(TNF)和核因子(NFKB1)水平明顯降低，血漿中鋅濃度升高。研究結(jié)果顯示，紫錐菊作為營養(yǎng)劑可以調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體的免疫反應(yīng)，能夠提高動(dòng)物機(jī)體的健康狀態(tài)。

5 結(jié) 語

紫錐菊在動(dòng)物保健上的免疫增強(qiáng)作用逐漸被認(rèn)可，我國先后批準(zhǔn)紫錐菊末、紫錐菊口服液用于提高雞新城疫疫苗的免疫效果，批準(zhǔn)紫錐菊根末用于增強(qiáng)豬藍(lán)耳病滅活疫苗和雞新城疫疫苗的免疫效果，批準(zhǔn)紫錐菊顆粒用于增強(qiáng)豬瘟疫苗和雞新城疫疫苗的免疫應(yīng)答。目前，國內(nèi)無相關(guān)紫錐菊產(chǎn)品被批準(zhǔn)用于犬上，因此，開發(fā)紫錐菊應(yīng)用于犬以增強(qiáng)犬的疫苗免疫效果具有廣闊的市場應(yīng)用前景。