膀胱癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表達(dá)變化及其與臨床病理特征的關(guān)系

何雪峰，平季根，邱峰，黃琛，陸勇

(蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院，江蘇蘇州215000)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，占我國(guó)泌尿生殖系腫瘤發(fā)病率的第1位[1]。大多數(shù)患者最初表現(xiàn)為血尿，而且是無(wú)痛性、間歇性、肉眼全程血尿，有時(shí)也可為鏡下血尿[2]。目前，膀胱癌的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，其分化程度越低，預(yù)后往往較差。膀胱癌治療方式主要有包括手術(shù)治療、化療、藥物治療等，但復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移仍是患者主要的死亡原因之一。窖蛋白1(CAV-1)是構(gòu)成細(xì)胞膜表面小窩的主要蛋白，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。性別決定區(qū)Y框蛋白2(SOX-2)是多潛能性干細(xì)胞標(biāo)志物，在腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[3]。基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)屬于Ⅳ膠原蛋白酶，參與腫瘤的轉(zhuǎn)移。本研究觀察了膀胱癌組織和癌旁組織CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年2月～2017年8月在蘇州大學(xué)第一附屬醫(yī)院行手術(shù)治療的膀胱癌患者80例，術(shù)前均未行放療、化療及其他抗腫瘤治療。術(shù)中留取癌組織及癌旁正常組織，術(shù)后均經(jīng)病理檢查確診為膀胱尿路上皮癌?；颊咧心?5例、女25例，年齡42～65歲；組織分化程度高分化52例，中、低分化28例；浸潤(rùn)深度T1～T238例，T3～T442例，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期50例，Ⅲ～Ⅳ期30例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 膀胱癌組織CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化染色法。將膀胱癌組織和癌旁組織制成病理切片，二甲苯脫蠟；梯度乙醇脫水，H2O2孵育；PBS沖洗3次，在枸櫞酸緩沖液中用煮沸，冷卻至室溫；PBS沖洗3次，滴加一抗后放置于4 ℃冰箱過(guò)夜；PBS沖洗3次，加入生物素標(biāo)記二抗孵育0.5 h；PBS沖洗3次，滴加標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液孵育0.5 h；PBS沖洗3次，用DAB/H2O2反應(yīng)染色；染色完全后，用自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染；常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。在顯微鏡下選取5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞；陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)染成棕黃或棕褐色，以染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)判斷結(jié)果。染色強(qiáng)度以無(wú)染色、淡黃色、黃色、棕黃色分別計(jì)0、1、2、3分，陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)0、﹤25%、25%～50%、﹥50%分別計(jì)0、1、2、3分，兩項(xiàng)得分相加≥2分即判為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以例表示，膀胱癌和癌旁組織、不同特征膀胱癌患者癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2表達(dá)情況的比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic回歸分析法分析膀胱癌患者CAV-1、SOX-2、MMP-2表達(dá)的影響因素。P﹤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膀胱癌及癌旁組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表達(dá)比較 膀胱癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2陽(yáng)性表達(dá)率分別為77.50%(62/80)、81.25%(65/80)、85.00%(68/80)，癌旁組織中分別為13.75%(11/80)、12.50%(10/80)、10.00%(8/80)，膀胱癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表達(dá)均高于癌旁組織(χ2分別為65.527、75.922、90.226，P均﹤0.01)。

2.2 不同臨床病理特征膀胱癌患者膀胱癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表達(dá)比較 中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度為T(mén)3～T4、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的膀胱癌患者癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度為T(mén)1～T2、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期者(P均﹤0.05)，而不同年齡、性別患者癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

2.3 膀胱癌患者CAV-1、SOX-2、MMP-2表達(dá)的影響因素 將單因素分析有意義的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度和TNM分期作為自變量，將CAV-1、SOX-2、MMP-2陽(yáng)性表達(dá)作為因變量，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)入回歸方程，其OR分別為5.034、4.359、4.446、4.987、5.021、4.987。

3 討論

膀胱癌可發(fā)生于任何年齡，甚至發(fā)生于兒童。其發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而增加，高發(fā)年齡為50～70歲。該病具有一定的性別差異，男性發(fā)病率是女性的3～4倍[4]。膀胱癌的病理類(lèi)型有膀胱尿路上皮癌、膀胱鱗狀細(xì)胞癌、膀胱腺癌，但通常所說(shuō)的膀胱癌就是指膀胱尿路上皮癌[5]。膀胱癌的病因復(fù)雜，既有內(nèi)在遺傳因素，又有外在環(huán)境因素，較明確的兩大致病危險(xiǎn)因素是吸煙和職業(yè)接觸芳香胺類(lèi)化學(xué)物質(zhì)[6]。對(duì)于非肌層浸潤(rùn)性尿路上皮癌多采用經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)，而肌層浸潤(rùn)性尿路上皮癌和膀胱鱗癌、腺癌多采用全膀胱切除術(shù)治療，轉(zhuǎn)移性膀胱癌則以化療為主，因此病理診斷在治療方式的選擇中至關(guān)重要[7]。

CAV-1蛋白是一種細(xì)胞表面的穴樣內(nèi)陷中的主要膜內(nèi)在蛋白，在保持穴樣內(nèi)陷完整性、小胞運(yùn)輸、信號(hào)傳導(dǎo)中起一定的作用；其是細(xì)胞膜上的一種整合膜蛋白，是形成微囊的主要成分，在人類(lèi)腫瘤中可能會(huì)產(chǎn)生突變；當(dāng)體內(nèi)出現(xiàn)腫瘤時(shí)，其表達(dá)顯著增加[8～10]。MMP-2蛋白具有破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障的作用，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵性作用，其含量增加會(huì)加快腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。MMP-2蛋白及CAV-1蛋白在膀胱癌細(xì)胞膜上具有相同位點(diǎn)，可導(dǎo)致內(nèi)源性CAV-1蛋白促進(jìn)MMP-2蛋白分泌，以降低細(xì)胞外基質(zhì)[11]。在正常情況下MMP-2表達(dá)量很低，但在腫瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)量增加[12]。SOX-2屬于SOX基因家族成員，是一個(gè)重要的干細(xì)胞標(biāo)志基因，可調(diào)控干細(xì)胞基因的表達(dá)。其位于干細(xì)胞信號(hào)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的中心，對(duì)干細(xì)胞自我更新、多向分化等均可發(fā)揮重要作用。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，SOX-2表達(dá)增加與膀胱癌的發(fā)生及不良預(yù)后相關(guān)[13～15]。

表1 不同臨床病理特征膀胱癌患者膀胱癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表達(dá)比較(例)

本研究結(jié)果顯示，膀胱癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織。這可能與腫瘤組織中CAV-1蛋白促進(jìn)MMP-2蛋白分泌，破壞組織屏障，加劇病理進(jìn)程有關(guān)。另外，中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度為T(mén)3～T4、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的膀胱癌患者癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度為T(mén)1～T2、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期者，而不同年齡、性別患者癌組織中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白與病理分期可能存在一定聯(lián)系，可以輔助臨床進(jìn)行分期診斷。Logistic回歸分析顯示，分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響膀胱癌患者CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表達(dá)的因素。這進(jìn)一步說(shuō)明分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白具有密切關(guān)系，可將其陽(yáng)性表達(dá)量作為判斷腫瘤程度的一類(lèi)指標(biāo)，具有一定的精確性。由此可見(jiàn)，膀胱癌組織CAV-1、SOX-2、MMP蛋白表達(dá)水平增高，且與患者的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，可作為膀胱癌分期診斷的指標(biāo)。