不同劑量配伍的瀉心湯瀉下作用比較研究

陳　勇，陳子雋，魏江存,2，謝　臻，闕祖亮，李金洲，龐丹清

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不同劑量配伍的瀉心湯瀉下作用比較研究

陳勇1，陳子雋1，*魏江存1,2，謝臻1，闕祖亮1，李金洲1，龐丹清1

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西，南寧 530200；2.廣西國(guó)際壯醫(yī)醫(yī)院，廣西，南寧 530201）

分析比較不同劑量配伍的瀉心湯瀉下作用與小腸炭末推進(jìn)作用。將90只實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組及瀉心湯不同劑量配伍組（7.2 g/kg），按容積20 mL/kg的劑量給藥后，分別用代謝籠積分法、炭末推進(jìn)作用實(shí)驗(yàn)，比較不同劑量配伍的瀉心湯對(duì)小鼠的正常瀉下作用、炭末推進(jìn)率的差異。不同劑量配伍的瀉心湯對(duì)其瀉下作用有影響，與空白對(duì)照組比較，5 h內(nèi)各組瀉下小鼠只數(shù)、各小鼠首次瀉下時(shí)間、5 h內(nèi)小鼠瀉下次數(shù)、小鼠總排便數(shù)和炭末推進(jìn)率均有顯著性差異（< 0.05）；與劑量配伍4比較，5 h內(nèi)各組小鼠的瀉下只數(shù)、各組小鼠首次瀉下時(shí)間、5 h內(nèi)瀉下次數(shù)、總排便次數(shù)和炭末推進(jìn)率均有顯著性差異（< 0.05）。不同劑量配伍的瀉心湯瀉下作用有差異性變化，這可能與配伍后不同劑量的黃芩與黃連對(duì)大黃蒽醌類(lèi)成分溶出率的影響，該方法可作為不同劑量配伍的中藥方劑質(zhì)量控制方法，為今后綜合開(kāi)發(fā)和利用不同劑量配伍的中藥方劑提供參考依據(jù)。

瀉心湯；劑量配伍；瀉下作用

中藥復(fù)方是我國(guó)中醫(yī)臨床治療的基礎(chǔ)，也是中醫(yī)理論的體現(xiàn)。本次實(shí)驗(yàn)選用的三黃瀉心湯來(lái)自張仲景的《金匱要略》[1]，該方劑主治熱毒內(nèi)熾，迫血妄行，吐血，衄血，小便短赤；眼球充血紅腫，口腔潰瘍；心胸?zé)灒蟊忝亟Y(jié)；濕熱引起的黃疸，肺癰。方劑中君藥大黃主要活性物質(zhì)成分為蒽酮類(lèi)、番瀉苷類(lèi)等[2]；黃芩主要活性成分有黃芩苷、黃芩苷元、黃芩素、黃芩新素等黃酮類(lèi)物質(zhì)；黃連，主要活性成分物質(zhì)有小檗堿、黃連堿、巴馬汀等生物堿物質(zhì)[3]。三黃瀉心湯主要具有抗菌[4-7]、抗細(xì)菌內(nèi)毒素[8]、降血糖[9]、保護(hù)胃黏膜[10]等藥理作用，還對(duì)心血管系統(tǒng)以及血液系統(tǒng)有影響[11-16]。另外，該方對(duì)腦缺血再灌注也具有很好的抗損傷作用[17]。

臨床上通常將大黃與其他中藥配伍使用，如大黃與黃芩、黃連、厚樸、枳實(shí)、肉桂等藥材配伍使用從而改變其化學(xué)活性成分、降低肝毒性或提高其中一味藥的功效甚至選擇不同的功效[18-20]。有研究發(fā)現(xiàn)[21]，大黃和黃芩配伍時(shí)，蒽醌溶出率增加，而與黃連配伍時(shí)，蒽醌溶出率降低，三者合煎時(shí)，總蒽醌的溶出率增加。因此，本研究課題選擇大黃、黃連、黃芩配伍，來(lái)降低大黃的毒性，并通過(guò)與不同劑量的黃連、黃芩的配伍來(lái)改變蒽醌類(lèi)物質(zhì)這一有效化學(xué)活性成分的溶出率，并試圖通過(guò)藥理研究加以驗(yàn)證，從而進(jìn)一步篩選出瀉心湯對(duì)于瀉下作用較為優(yōu)良的劑量配伍比例，具有一定的科學(xué)現(xiàn)實(shí)意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；UV-1800 型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（美國(guó)，BIOTEK-Epoch，20110793）、代謝籠（安徽正華有限公司，ZH-B6）、育溫箱（廣東科力有限公司，PYX-190H-B）、離心機(jī)（德國(guó)，Thermo Fisher，41284881）、水浴鍋（上海一恒公司，HWS12）；電熱套（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司，DZTW）。

1.2 藥材與試劑

大黃（批號(hào)：161008891）、黃連（批號(hào)：161106631）、黃芩（批號(hào)：161105141），均購(gòu)于廣州康美藥業(yè)股份有限公司；酚酞片（批號(hào)：141107，臨汾寶珠制藥有限公司）；生理鹽水（批號(hào)：170419，廣東艾希德藥業(yè)有限公司）。

1.3 動(dòng)物

KM小鼠SPF級(jí)，體重為(20 ± 2) g雌雄小鼠對(duì)半，購(gòu)于廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(桂)2014-002，質(zhì)量合格證號(hào)：001757）。

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1 不同劑量配伍的瀉心湯的制備[19]

按照劑量配伍比例分別精密稱(chēng)取4組瀉心湯藥材：①大黃:黃芩:黃連=1:0.97:0.028；②大黃:黃芩:黃連=1:1.70:0.096；③大黃:黃芩:黃連=1:1.18:0.61；④大黃:黃芩:黃連=1:0.5:0.5。

以上四個(gè)劑量配伍組瀉心湯的水提液的制備：稱(chēng)取后置于圓底燒瓶中，分別加10倍量的純化水，浸泡30 min；置于電熱套上加熱至微沸，保持微沸狀態(tài)20 min；四層紗布過(guò)濾，濾液濃縮成浸膏，灌胃時(shí)再配成相應(yīng)的濃度即可。

2.1.2 對(duì)小鼠瀉下作用的影響

取體重為(20 ± 2) g的SPF級(jí)昆明雄性小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，隨機(jī)分組，每組15只，分為以下6組：(a)生理鹽水組；(b)陽(yáng)性藥組；(c)劑量配伍1；(d)劑量配伍2；(e)劑量配伍3；(f)劑量配伍4。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天禁食4 h，除了生理鹽水組和陽(yáng)性藥組外，其余各給藥組均給與含大黃生藥量為7.2 g/kg的相應(yīng)劑量配伍的瀉心湯水提液，灌胃體積為20 mL/kg，然后把小鼠單獨(dú)放進(jìn)預(yù)先鋪有濾紙的老鼠籠中，記錄其在5 h首次瀉下時(shí)間、各組瀉下只數(shù)、瀉下次數(shù)，總排便數(shù)（正常便、軟便、溏便、水便）。溏便和水便即為瀉下。

2.1.3 對(duì)小鼠炭末推進(jìn)作用的影響

采用炭末推進(jìn)方法，小鼠實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水24 h，除了生理鹽水組和陽(yáng)性藥組外，其余各給藥組均給與含大黃生藥量為7.2 g/kg的相應(yīng)劑量配伍的瀉心湯水提液，灌胃體積為20 mL/kg給藥，給藥30 min后，再給與5%炭末（0.2 mL /只）作指示劑，20 min后脫頸處死，打開(kāi)腹腔，取出自幽門(mén)至回盲部的小腸，不加牽引地平鋪于玻璃板上，測(cè)其全長(zhǎng)和炭末前沿至幽門(mén)的距離，計(jì)算其與全長(zhǎng)的百分比，即推進(jìn)率。

炭末推進(jìn)率（%）= 炭末在腸內(nèi)推進(jìn)距離/小腸全長(zhǎng)× 100%。

2.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，數(shù)據(jù)以`x ± s表示，組間差異顯著性比較采用單因素方差分析。< 0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 對(duì)小鼠瀉下作用的影響

由表1可知，陽(yáng)性藥組及各劑量配伍組在首次瀉下時(shí)間、5 h內(nèi)瀉下次數(shù)和總排便次數(shù)與生理鹽水組比較具有顯著性差異（< 0.05）；與劑量配伍4組比較，劑量配伍1組首次瀉下時(shí)間降低（< 0.05）；與劑量配伍4組比較，陽(yáng)性藥組、劑量配伍1組和劑量配伍2組在首次瀉下時(shí)間、5 h內(nèi)瀉下次數(shù)和總排便次數(shù)上均有顯著性差異（< 0.05）；與劑量配伍4組比較，生理鹽水組在總排便次數(shù)上有顯著性差異。

表1 四個(gè)劑量配伍的瀉心湯水提液對(duì)正常小鼠瀉下作用的影響（`x ± s）

Table 1 Effects of four doses of Xiexin Decoction on diarrhea in normal mice

注：與生理鹽水比較，*< 0.05；與劑量配伍4比較#< 0.05

2.2.2 對(duì)小鼠炭末推進(jìn)作用的影響

由表2可知，陽(yáng)性藥組及各個(gè)劑量配伍組炭末推進(jìn)率與生理鹽水組比較都具有顯著性差異（< 0.05）；與劑量配伍4組比較，生理鹽水組、陽(yáng)性藥組、劑量配伍1組和劑量配伍2組在炭末推進(jìn)率上都有顯著性差異（< 0.05）。

表2 四個(gè)劑量配伍瀉心湯水提液對(duì)小鼠小腸推進(jìn)作用的影響（`x ± s）

Table 2 Effects of four doses of Xiexin Decoction on intestinal propulsion in mice

注：與生理鹽水比較，*< 0.05，與劑量配伍4比較#< 0.05

3 討論

本實(shí)驗(yàn)選用瀉下和炭末推進(jìn)作用實(shí)驗(yàn)，通過(guò)與生理鹽水組和劑量配伍4組比較，探討4個(gè)劑量配伍組的瀉下作用差異，為三黃瀉心湯劑量配伍對(duì)瀉下作用影響的研究奠定基礎(chǔ)。由表1和表2可知，將不同劑量配伍的瀉心湯對(duì)瀉下及小腸炭末推動(dòng)作用的影響與生理鹽水組做比較，各小鼠首次瀉下時(shí)間降低、5 h內(nèi)小鼠瀉下次數(shù)、小鼠總排便數(shù)及5 h內(nèi)各組瀉下的老鼠只數(shù)均有差異性。引起瀉下作用的有效成分為蒽醌類(lèi)成分，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，劑量配伍1和2組的瀉下作用最大，原因可能有：一、盡管黃芩可以促進(jìn)大黃中蒽醌類(lèi)物質(zhì)的溶出，黃連可抑制大黃中蒽醌類(lèi)物質(zhì)的溶出，但是黃芩對(duì)大黃蒽醌類(lèi)物質(zhì)的溶出的促進(jìn)作用大于黃連對(duì)大黃蒽醌類(lèi)物質(zhì)的抑制作用；二、黃連中的小檗堿等生物堿本身就具有抗腹瀉的作用，而劑量配伍組1和2的蒽醌類(lèi)成分含量高瀉下作用強(qiáng)，究其原因有待進(jìn)一步的研究其作用機(jī)制。因此，在中藥復(fù)方中，可以通過(guò)改變不同劑量配伍比例來(lái)達(dá)到改變其有效化學(xué)成分含量高低或療效的目的。本次實(shí)驗(yàn)從大黃基礎(chǔ)功效瀉下切入，探討瀉心湯不同劑量配伍后對(duì)小鼠瀉下作用和炭末推進(jìn)作用的影響，對(duì)于深入了解瀉心湯在瀉下作用，不同劑量配伍使用規(guī)律有著重要的借鑒和指導(dǎo)意義[22]。

大黃與不同劑量配伍后都會(huì)引起蒽醌類(lèi)成分含量的改變，有研究報(bào)道大黃蒽醌類(lèi)成分對(duì)肝腎存在潛在毒性[23-24]，由此推測(cè)大黃與不同劑量配伍后對(duì)蒽醌類(lèi)成分含量有影響，降低則有助于減輕大黃的毒性作用，從而也減弱了大黃的瀉下作用，含量升高則反之，但兩者的相關(guān)性有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)中不同劑量配伍的瀉心湯對(duì)其促進(jìn)腸推進(jìn)功能作用、炭末推進(jìn)率在宏觀(guān)上反映不同劑量配伍的瀉下作用變化的結(jié)果，提示不同劑量配伍在經(jīng)典組方“瀉心湯”中所起到瀉下作用變化的相關(guān)效應(yīng)，這些變化可能由大黃蒽醌類(lèi)含量的的轉(zhuǎn)移或轉(zhuǎn)化有關(guān)，在一定程度上具有共性關(guān)系，至于不同劑量配伍的瀉心湯在人體內(nèi)這些變化是否會(huì)改變，有待今后進(jìn)一步研究探索。

在此基礎(chǔ)上，中藥復(fù)方的化學(xué)成分研究的是在復(fù)方配伍過(guò)程中是否有新成分的產(chǎn)生，是否由于新成分的產(chǎn)生才顯示出復(fù)方的獨(dú)特療效。復(fù)方配伍過(guò)程中各成分的含量變化規(guī)律，是否由于各化學(xué)成分的協(xié)同作用而產(chǎn)生復(fù)方的獨(dú)特療效[25]。

中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)極為復(fù)雜，包括有機(jī)酸、黃酮類(lèi)、無(wú)機(jī)元素、生物堿、皂苷等及蛋白質(zhì)、多糖等。近年來(lái)復(fù)方配伍的化學(xué)成分研究主要集中在配伍前后個(gè)別化學(xué)成分的定量分析、復(fù)方配伍后質(zhì)變研究以及配伍后多成分定量研究[26-28]。

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COMPARATIVE STUDY ON PURGING EFFECT OF DIFFERENT DOSES OF XIEXIN DECOCTION

CHEN Yong1, CHEN Zi-juan1,*WEI Jiang-cun1’2, XIE Zhen1, QUE Zu-liang1, LI jin-zhou1, PANG Dan-qing1

(1.College of Pharmacy, Guangxi University of Chinese Traditional Medicine, Nanning, Guangxi 530200, China; 2.International Zhuang Medical Hospital of Guangxi, Nanning, Guangxi 530201, China）

To analyze and compare the purging effect of different doses of Xiexin Decoction and the promoting effect of carbon powder on small intestine.90 experimental mice were randomly divided into blank control group, positive control group and Xiexin Decoction (7.2 g/kg).According to the dosage of 20 mL/kg, the metabolic cage integral method and the carbonaceous propulsive experiment were used to compare the difference of the normal diarrhea effect and the carbon end of Xiexin Decoction with different doses of Xiexin Decoction.Xiexin Decoction with different doses had an effect on its diarrhea.Compared with the blank control group, there were significant differences in the number of mice, the first diarrhea time, the times of diarrhea in 5h, the number of total defecation and the propelling rate of the carbon in 5h (< 0.05).There were significant differences in the number of purging, the first time of diarrhea, the frequency of purging in 5h, the frequency of total defecation and the propelling rate of charcoal at the end of each group (< 0.05) between the group of dose 4 and other groups.The purgative effect of Xiexin Decoction with different dosage has differential changes, which may be caused by the dissolution rate of anthraquinone inandwith different doses.This method can be used as the quality control method of different dosage of traditional Chinese medicine prescription, and provide a reference basis for the comprehensive development and use of different dosage of traditional Chinese medicine in the future.

Xiexin decoction; dose compatibility; purgative action

R298.1

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2018.06.015

2018-09-06；

2018-10-16

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81360524，81660701）；廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2016GXNSFAA380148，2014GXNSFAA118208）；廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（17-259-20）；廣西高校中藥提取純化與質(zhì)量分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（桂教科研〔2014〕6號(hào)）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局科研三級(jí)實(shí)驗(yàn)室中（壯）藥化學(xué)與質(zhì)量分析實(shí)驗(yàn)室（國(guó)中醫(yī)藥發(fā)2009[21]號(hào)）

陳勇(1961-)，男，江西南昌人，教授，主要從事中藥及其制劑質(zhì)量分析研究(E-mail:cy6381@163.com);

陳子雋(1994-)，女，廣西南寧人，碩士生，碩士，從事藥物分析學(xué)專(zhuān)業(yè)研究(E-mail:244366797@qq.com);

*魏江存(1989-)，男，廣西賀州人，藥師，碩士，主要從事中藥、民族藥質(zhì)量分析及其藥效機(jī)制研究(E-mail: WJC2553@163.com);

謝 臻(1979-)，男，廣西玉林人，副教授，博士，主要從事中藥質(zhì)量控制及復(fù)方配伍研究(E-mail: xie_zhen@126.com);

闕祖亮(1991-)，男，廣西博白人，碩士生，主要從事藥物分析學(xué)專(zhuān)業(yè)研究(E-mail:841316277@qq.com);

李金洲(1995-)，男，湖南常德人，碩士生，主要從事藥物分析學(xué)專(zhuān)業(yè)研究(E-mail:981530708@qq.com);

龐丹清(1993-)，女，廣西貴港人，碩士生，主要從事藥物分析學(xué)專(zhuān)業(yè)研究(E-mail:1450358251@qq.com).

1674-8085(2018)06-0082-04