波棱瓜子化學成分的研究

董召月， 王 紅， 馬英雄， 蘭小中， 陳 敏?

（1.西南大學藥學院，重慶 400715；2.西藏農(nóng)牧學院西南大學藥用植物聯(lián)合研發(fā)中心，西藏農(nóng)牧學院，西藏 林芝 860000）

波棱瓜子為葫蘆科波棱瓜屬一年生攀援草本植物波棱瓜Herpetospermum caudigerum Wall的干燥成熟種子，收錄于 《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》藏藥標準[1］，主要分布在我國西藏、云南、四川等地及印度、尼泊爾等國。該藥味苦、性寒，具有瀉肝火、清膽熱的功效，藏醫(yī)臨床常用其治療黃疸型傳染性肝炎、膽囊炎、消化不良等癥?，F(xiàn)代藥理學研究表明波棱瓜子具有抗肝損傷[2-3］、抗乙肝病毒[4］、 抗疲勞[5］、 抗氧化[6］等作用。 課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，波棱瓜子95%乙醇提取物石油醚萃取部位對于ANIT誘發(fā)的膽汁淤積大鼠具有良好的保護作用，其可能的藥效活性成分為脂肪酸類[7］。目前，有關(guān)波棱瓜子石油醚萃取部位的研究，主要是集中在其脂肪油成分的分析上[8-9］，具體化學成分的分離研究報道很少，課題組對其進行了化學成分研究，從中分離得到9個化合物，其中6個為有機酸類，2個為木脂素類，1個為甾醇類，且化合物3、4、6、8首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑 HPLC液相色譜儀 （日本島津公司）；Bruker Avance-500，600型核磁共振光譜儀、Bruker DRX400型核磁共振儀 （德國Bruker公司，TMS為內(nèi)標）；YMC-Pack ODS-A半制備柱，250 mm×10 mm， 5 μm）； Sephadex LH-20 凝膠（美國 GE公司）；TLC板 GF254（德國默克爾公司）；制備 TLC板和柱色譜硅膠 （青島海洋化工廠）。

1.2 材料 藏藥波棱瓜藥材于2013年6月自西藏林芝地區(qū)采集，經(jīng)西藏農(nóng)牧學院動物科技系植物生物技術(shù)教研室蘭小中教授鑒定為正品，憑證標本（2013-CM-01）保存于西南大學藥學院藥物分析教研室。

2 提取與分離

干燥的成熟波棱瓜子27 kg，粉碎，室溫下用95%乙醇提取3次，合并提取液，減壓濃縮，得2.1 kg總浸膏。將浸膏分散在3 L水中制成混懸液，依次經(jīng)過石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。減壓濃縮得到石油醚萃取物1 500 g、乙酸乙酯萃取物175 g、正丁醇萃取物125 g。從石油醚萃取物中取出200 g樣品，經(jīng)過正相硅膠色譜 （2 000 g）分離，以石油醚-乙酸乙酯 （1∶0～0∶1）梯度洗脫，得到25個組分 （Fr.1-25）。Fr.2經(jīng)過制備薄層TLC（石油醚 ∶乙酸乙酯＝95∶5）得到化合物1（30 mg）；Fr.6經(jīng)過凝膠柱色譜得7個亞組份 （Fr.6-1～7），F(xiàn)r.6-3經(jīng)過半制備HPLC，流動相為甲醇-水 （85∶15） 分離，得化合物 2（4 mg），F(xiàn)r.6-3經(jīng)過制備薄層TLC（石油醚 ∶乙酸乙酯＝9∶1）得化合物3（7 mg）；Fr.10經(jīng)過硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯體系 （9∶1～5∶5） 分離得到6個亞組份 （Fr.10-1～6），F(xiàn)r.10-2經(jīng)過制備薄層 TLC（石油醚∶乙酸乙酯＝85∶15）分離得到化合物4（15 mg）、 5 （13 mg）； Fr.12經(jīng)過凝膠柱色譜分離得到5個亞組份 （Fr.12-1～5），F(xiàn)r.12-5經(jīng)半制備HPLC，流動相為甲醇-水 （35∶65）分離，得到化合物7（5 mg）；Fr.13洗脫流份中有白色結(jié)晶析出，重結(jié)晶得到化合物6（30 mg）；Fr.23經(jīng)過硅膠柱色譜，得到7個亞組份 （Fr.23-1～7），F(xiàn)r.23-5經(jīng)半制備HPLC，流動相為甲醇-水 （36∶64）分離，得到化合物8（4 mg）、9（3 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色油狀物，分子式C18H30O2。1HNMR （CDCl3，400 MHz） δ： 5.21～5.36 （6H， m，H-9， 10， 12， 13， 15， 16）， 2.74 （4H， t， J＝6.14 Hz， H-11， 14）， 2.28 （2H， t， J＝7.50 Hz， H-2），2.01 （4H， m， H-8， 17）， 1.57 （2H， m， H-3），1.19-1.25 （8H， m， H-4， 5， 6， 7）， 0.91 （3H， t，J＝7.52 Hz， H-18）；13C-NMR （CDCl3， 100 MHz）δ： 178.23 （C-1）， 130.96 （C-16）， 129.24 （C-9），127.29 （C-12）， 127.25 （C-13）， 126.76 （C-15），126.12 （C-10），32.90 （C-2），19.54 （C-4），28.55（C-5）， 28.12 （C-6）， 28.06 （C-7）， 28.02 （C-8），24.62 （C-11），26.19 （C-14），24.53 （C-3），23.66（C-17），13.24（C-18）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [10]基本一致，故鑒定為亞麻酸。

化合物2：黃色油狀物，分子式C18H32O2。1HNMR （CDCl3， 400 MHz） δ： 5.33～5.38 （4H， m，H-9， 10， 12， 13）， 2.77 （2H， m， H-11）， 2.23（2H， m， H-2）， 2.05 （4H， m， H-8， 14）， 1.64（2H，m，H-3），1.26～1.33 （14H，m，H-4～7，H-15～17）， 0.89 （3H， t， J＝ 6.90 Hz， H-18）；13CNMR （CDCl3， 100 MHz） δ： 175.45 （C-1）， 130.24（C-13）， 130.04 （C-9）， 128.08 （C-10）， 127.92（C-12）， 35.93 （C-2）， 31.54 （C-16）， 29.61 （C-7）， 29.36 （C-15）， 29.24 （C-4）， 29.21 （C-5），29.13 （C-6）， 27.22 （C-8）， 27.20 （C-14）， 25.65（C-11）， 25.52 （C-3）， 22.58 （C-17）， 14.08 （C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻 [10］基本一致，故鑒定為亞油酸。

化合物3：無色油狀物，分子式C18H30O2。1HNMR （CDCl3， 400 MHz） δ： 5.99～6.11 （2H， m，H-10， 11）， 5.60～5.69 （4H， m， H-9， 12， 15，16）， 2.34 （2H， t， J＝7.52 Hz， H-2）， 2.07 （6H，m，H-8，13，14，17），1.62（2H，tt，J＝7.26，7.20 Hz， H-3）， 1.30～1.38 （8H， m， H-4， 5， 6， 7），0.88 （3H， t， J ＝ 7.13 Hz， Me-18）；13C-NMR（CDCl3， 100 MHz） δ： 178.07 （C-1）， 133.49 （C-16）， 133.27 （C-9）， 129.89 （C-12）， 129.75 （C-15），129.53 （C-11）， 129.42 （C-10）， 32.85 （C-2）， 31.72 （C-13）， 27.92 （C-14）， 23.65 （C-3），28.06 （C-4）， 28.26 （C-5）， 30.51 （C-6）， 31.46（C-7）， 27.98 （C-8）， 21.21 （C-17）， 12.90 （C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻 [11］基本一致，故鑒定為9，11，15-十八碳三烯酸。

化合物4：無色油狀液體，分子式C57H98O6。1HNMR （CDCl3， 400 MHz） δ： 5.24～5.40 （12H， overlap）， 4.29 （2H， dd， J＝4.08， 11.88 Hz）， 4.14（2H， dd， J＝5.94， 11.89 Hz）， 2.79 （2H， dt， J＝6.23， 11.31 Hz）， 2.31 （2H， dt， J＝ 2.83， 7.65 Hz）， 2.03 （2H， dt， J＝ 6.84， 12.81 Hz）， 1.27（66H， overlap）， 0.89 （9H， overlap）；13C-NMR（CDCl3， 100 MHz） δ： 173.46 （C-1）， 173.46 （C-1″）， 172.70 （C-1′）， 34.03 （C-2）， 34.03 （C-2″），34.19 （C-2′）， 24.8 （C-3）， 24.8 （C-3″）， 24.8 （C-3′）， 29.1 （ C-4）， 29.1 （ C-4″）， 29.0 （ C-4′），29.19 （C-5）， 29.19 （C-5″）， 29.21 （C-5′）， 29.13（C-6）， 29.13 （C-6″）， 29.15 （C-6′）， 29.63 （C-7）， 29.63 （C-7″）， 29.64 （C-7′）， 27.22 （C-8），27.22 （ C-8″）， 27.21 （ C-8′）， 130.22 （ C-9），130.22 （C-9″）， 130.22 （C-12）， 130.22 （C-12″），130.01 （C-9′）， 130.01 （C-12′）， 129.46 （C-10），129.46 （C-10′）， 129.46 （C-10″）， 129.46 （C-13），129.46 （C-13′）， 129.46 （C-13″）， 27.21 （C-11），27.21 （C-11″）， 27.20 （C-11′）， 29.37 （C-12），29.37 （C-12″）， 29.36 （C-13）， 29.36 （C-13′），29.36 （C-13″）， 24.31 （C-14）， 24.31 （C-14′），24.31 （C-14″）， 22.89 （C-15）， 22.89 （C-15′），22.89 （ C-15″）， 32.0 （C-16）， 32.0 （ C-16′），32.0 （C-16″）， 22.70 （C-17）， 22.70 （C-17′），22.70 （C-17″）， 14.04 （C-18）， 13.99 （C-18′），13.85（C-18″），68.91（CHO），62.11（CH2O）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [12］基本一致，故鑒定為甘油三亞油酸酯。

化合物 5：白色粉末，分子式 C37H70O5。1HNMR （CDCl3， 500 MHz） δ： 5.34 （2H， d， J＝4.47 Hz）， 4.17 （2H， td， J＝ 5.55， 11.50 Hz）， 3.69（1H， dd， J＝4.21， 11.83 Hz）， 3.59 （1H， dd， J＝6.15， 11.89 Hz）， 2.34 （2H， t， J＝7.98 Hz）， 1.26（48H， overlap）， 0.87 （6H， t， J＝7.21 Hz）；13CNMR （CDCl3， 125 MHz） δ： 174.32 （C-1）， 174.28（C-1′）， 130.01 （C-9）， 129.67 （C-10）， 70.28 （C-19）， 65.12 （C-20）， 63.38 （C-21）， 34.16 （C-2），34.14 （C-2′）， 31.89 （C-16）， 31.87 （C-14′），29.06～29.74 （C-4， 5， 6， 7， 12， 13， 14， 15， 4′，5′， 6′， 7′， 8′， 9′， 10′， 11′， 12′， 13′）， 27.20 （C-8）， 27.14 （C-11）， 24.90 （C-3）， 24.88 （C-3′），22.65 （C-17）， 22.64 （C-15′）， 14.05 （C-18），14.05（C-16′）。以上數(shù)據(jù)與文獻 [13]基本一致，故鑒定為9-十八碳烯酸。

化合物6：白色粉末，分子式 C29H58O4。1HNMR （Acetone-d6， 400 MHz） δ：4.05 （1H， dd， J＝11.22， 6.28 Hz）， 3.82 （1H， d， J＝ 5.50 Hz），3.54 （2H， dd， J＝ 11.22， 6.28 Hz， H-2）， 2.98（44H， brs， H-4′～ 25′）， 0.88 （3H， m， 26′-Me）；13C-NMR （Acetone-d6， 100 MHz） δ： 173.02 （C-1′）， 69.84 （C-2）， 65.28 （C-1）， 63.00 （C-3），33.66 （ C-2′）， 31.72 （ C-24′）， 29.52， 29.48，28.37， 28.4 （C-4′～ 23′）， 24.75 （C-3′）， 22.41（C-25′）， 13.44 （C-26′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [14］基本一致，故鑒定為1-O-二十六烷?；视王?。

化合物7：白色針狀結(jié)晶 （甲醇），mp 122.0～25.0 ℃， 分子式 C30H30O9。1H-NMR （CDCl3， 400 MHz） δ： 7.57 （1H， d， J＝ 1.55 Hz， H-2）， 7.55（1H， dd， J＝1.73， 8.24 Hz， H-6）， 6.90 （2H， m，H-2″， 6″）， 6.89 （1H， d， J＝3.84 Hz， H-2′）， 6.88（1H， d， J＝ 1.93 Hz， H-6′）， 6.82 （2H， dd， J＝8.21， 1.90 Hz， H-5， 5″）， 6.39 （1H， s， H-4），6.07 （1H， s， H-4″）， 6.02 （1H， d， J＝1.18 Hz， H-9）， 5.73 （1H， d， J＝1.11 Hz， H-9′）， 5.59 （1H，s， H-4′）， 4.74 （2H， t， J ＝ 4.92 Hz， H-7′， 7″），4.25 （2H， ddd， J＝ 8.71， 6.85， 1.60 Hz， H-9′，9″）， 3.94 （3H， s， 3-OMe）， 3.91 （3H， s， 5′-OMe）， 3.88 （4H， m， 3″-OMe， H-9″）， 3.11 （2H，m， H-8′， 8″）；13C-NMR （ CDCl3， 100 MHz） δ：196.23 （C-7）， 150.44 （C-4）， 147.20 （C-5′），146.73 （C-3）， 146.44 （C-3′）， 145.57 （C-4″），145.29 （C-3″）， 142.66 （C-4′）， 132.93 （C-1″），132.71 （C-1′）， 129.48 （C-1）， 126.12 （C-8），124.86 （C-6）， 123.98 （C-9）， 119.27 （C-6′），118.99 （C-6″）， 114.28 （C-5）， 113.58 （C-5″），111.48 （C-2）， 108.81 （C-2″）， 108.61 （C-2′），85.90 （C-7″）， 85.82 （C-7′）， 71.78 （C-9′）， 71.72（C-9″）， 56.25 （C-2-OMe）， 56.10 （C-5′-OMe），56.00 （C-3″-OMe）， 54.24 （C-8″）， 54.19 （C-8′）。以上數(shù)據(jù)與文獻 [15］基本一致，故鑒定為（+） - （7′S， 7″S， 8′R， 8″R） -4， 4′， 4″-trihydroxy-3， 5′， 3″-trimethoxy-7-oxo-8-ene [8-3′， 7′-O-9″， 8′-8″， 9′-O-7″]lignoid。

化合物 8：白色結(jié)晶 （氯仿），mp 152.0～156.0℃， 分子式 C29H48O。1H-NMR （CDCl3，600 MHz） δ：0.55 （3H，s，18-CH3），0.80 （3H，s，19-CH3）， 0.82 （3H， d， J＝ 7.40 Hz， 26-CH3）， 0.83（3H， t， J＝6.30 Hz， 27-CH3）， 0.87 （3H， d， J＝6.28 Hz， 29-CH3）， 1.03 （3H， d， J＝6.63 Hz， 21-CH3）， 3.60 （1H， m， 3-H）， 5.04 （1H， dd， J＝8.9， 8.6 Hz， H-22 or 23）， 5.16 （2H， dd， J＝8.6，8.7 Hz， 22 or 23-H）；13C-NMR （CDCl3， 150 MHz）δ： 139.56 （C-8）， 138.07 （C-22）， 129.53 （C-23），117.46 （C-7），71.06 （C-3），55.94 （C-17），55.14（C-14）， 51.23 （C-24）， 49.50 （C-9）， 43.30 （C-13）， 40.71 （C-5）， 40.30 （C-12）， 39.49 （C-12），38.03 （C-2）， 37.17 （C-1）， 34.24 （C-10）， 31.81（C-25）， 31.51 （C-4）， 29.66 （C-6）， 28.36 （C-16），25.36 （C-28），23.00 （C-15），21.56 （C-11），21.32 （C-21）， 20.89 （C-26）， 18.94 （C-27），13.01 （C-19）， 12.39 （C-29）， 12.05 （C-18）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [16］基本一致，故鑒定為 α-菠甾醇。

化合物9：淡黃色粉末，分子式C30H32O10。1HNMR （CDCl3， 400 MHz） δ： 7.28～7.61 （2H， m，H-2， 6）， 6.76～6.89 （6H， m， H-2′， 2″， 5， 5″， 6′，6″）， 5.20 （1H， dd， J＝4.64， 8.12 Hz， H-8）， 4.68（1H， d， J＝5.18 Hz， H-7″），4.60 （1H， d， J＝5.12 Hz， H-7′）， 4.14～4.26 （4H， m， H-9′， 9″）， 3.89（6H， s， 3″， 3′-OCH3）， 3.88 （3H， s， 3-OCH3），2.93～3.07 （2H， m， H-8′， 8″）；13C-NMR （CDCl3，100 MHz） δ： 199.06 （C-7）， 150.60 （C-4），146.97 （C-3″）， 146.74 （C-3）， 146.40 （C-3′），145.27 （C-4″）， 142.20 （C-4′）， 132.93 （C-1″），132.89 （C-1′）， 128.97 （C-1）， 124.22 （C-6），122.35 （C-5′）， 118.95 （C-6′）， 118.14 （C-6″），114.28 （C-5″）， 114.06 （C-5）， 110.66 （C-2″），108.62 （C-2）， 107.55 （C-2′）， 85.83 （C-7′），85.70 （C-7″）， 71.69 （C-9′）， 71.60 （C-9″）， 63.91（-CH2OH）， 56.11 （3-OCH3）， 55.98 （3′-OCH3），55.96 （3″-OCH3）， 54.22 （C-8′）， 54.10 （C-8″），47.94（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻 [17］基本一致，故鑒定為波棱甲素。