探討酶聯(lián)免疫法與膠體金法檢測(cè)乙肝表面抗原的效果

王川，程郁菁，雷靜，童劍嘯

（國(guó)藥集團(tuán)武漢血液制品有限公司，湖北武漢 430207）

在我國(guó)，HBV(乙型肝炎病毒)的高度流行地區(qū)，乙型肝炎病毒的感染率為60%～70%。全國(guó)約有9 300萬(wàn)人攜帶乙型肝炎病毒，其中約3 000萬(wàn)人是乙型肝炎患者，60%的肝炎患者是慢性肝炎患者[1]。HBV與肝硬化和原發(fā)性肝癌密切相關(guān)。HBV的預(yù)防和治療是我國(guó)傳染病控制的首要問題，尚無(wú)明確有效的治療方法。此外，隨著人們生活水平的提高和健康意識(shí)的增強(qiáng)，檢測(cè)出兩對(duì)半的乙型肝炎已成為人們?nèi)粘ｓw檢，獻(xiàn)血者體檢，醫(yī)院急診患者和外科手術(shù)的常規(guī)檢查項(xiàng)目。目前實(shí)驗(yàn)室普遍采用的酶聯(lián)免疫法檢測(cè)，雖然其性能得到公認(rèn)，但需要相應(yīng)設(shè)備，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，操作較繁瑣，不便單樣本快速檢測(cè)。但膠體金快速檢測(cè)板不需要相應(yīng)設(shè)備也能夠快速檢測(cè)單個(gè)樣本，非常便捷，適于快速初步檢測(cè)[2]。

HBV屬于嗜肝病毒科的DNA病毒，其大小形狀是直徑為42nm的球形顆粒。乙型肝炎病毒具有非常高的感染能力[4-5]。在我國(guó)境內(nèi)，乙型肝炎病毒的感染率已接近5成，主要的感染途徑包括母嬰傳播、血液感染、醫(yī)源性感染、性行為以及日常生活中的體液等等途徑都是極易造成感染的。傳染性病原體不僅對(duì)人體功能造成嚴(yán)重危害，HBV還會(huì)引起嚴(yán)重的肝病，如HBV感染引起的肝硬化和肝癌。因此，必須高度重視乙型肝炎的防治。為提高乙型肝炎防治工作的針對(duì)性和有效性，必須進(jìn)行準(zhǔn)確有效的乙型肝炎病毒檢測(cè)。一旦乙型肝炎病毒進(jìn)入人體，經(jīng)過一系列的變化，乙型肝炎病毒基因（HBV-DNA）通過肝細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核。此時(shí)，乙型肝炎病毒基因的雙鏈結(jié)構(gòu)的一部分變?yōu)殚]環(huán)結(jié)構(gòu)，并且基于該模板轉(zhuǎn)錄，成為mRNA，最后翻譯成乙型肝炎表面抗原。HBsAg主要反映乙型肝炎病毒的活性和患者的乙型肝炎狀況。日前，最常用的乙型肝炎表面抗原檢測(cè)方法包括有：酶聯(lián)免疫法、膠體金法等[6]。

酶聯(lián)免疫法（ELISA），也稱為固相酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，使用化學(xué)反應(yīng)將測(cè)試對(duì)象與酶連接，然后使用免疫反應(yīng)將抗原結(jié)合在測(cè)試對(duì)象和固相載體，最后添加基板進(jìn)行顯色。通過顏色的深度判斷抗體的水平，酶聯(lián)免疫法（ELISA）廣泛用于乙型肝炎病毒的檢測(cè)。它主要起定性檢測(cè)作用，具有以下優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)成本低、無(wú)污染。但是，這種檢測(cè)方法也存在一定的缺陷：實(shí)驗(yàn)操作步驟復(fù)雜、操作時(shí)間長(zhǎng)；根據(jù)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)證明，酶聯(lián)免疫法在乙型肝炎抗體的檢測(cè)中存在一定的缺陷，即發(fā)生假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果[7]。

1 資料與方法

1.1 樣本來源

選取來自湖北某單采血漿站的76份抗-HBV陽(yáng)性血清，年齡在18～49歲，其平均年齡在（28.3±15.6）歲，男性樣本43份，女性樣本33份。

1.2 檢測(cè)方法

血樣本為靜脈血，每份5 mL。及時(shí)分離血清，分別用酶聯(lián)免疫法和膠體金法進(jìn)行測(cè)定。酶聯(lián)免疫法診斷試劑盒（由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司提供）、膠體金法診斷試劑盒（由英科新創(chuàng)廈門科技有限公司提供）[3]。嚴(yán)格按照試劑說明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。符合正態(tài)分布的測(cè)量數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（±s）；計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)用示例（百分比）表示，并使用χ2測(cè)試。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

酶聯(lián)免疫法陽(yáng)性26份，膠體金法陽(yáng)性26份。2種測(cè)試方法陽(yáng)性均為26份，占比為34.21%，均為陰性的有45份，占比為59.21%，2種測(cè)試方法的一致率非常高，其占比為93.42%。酶聯(lián)免疫法的假陰性有3份，占比為3.95%，假陽(yáng)性有2份，其占比為2.63%，與膠體金法測(cè)試的不符合率為6.58%。詳情如表1所示。

表1 兩種測(cè)試方法對(duì)76份血清樣本的HBsAg檢測(cè)結(jié)果詳情

3 討論

綜上所述，酶聯(lián)免疫法與膠體金法均是檢測(cè)乙肝表面抗原的比較可靠的方法。然而，膠體金檢測(cè)法對(duì)檢測(cè)設(shè)備的要求較低，對(duì)單個(gè)樣體測(cè)試結(jié)果迅速，但是偶有假陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)，所以膠體金檢測(cè)法適合于大規(guī)模的乙肝病毒快速篩檢；酶聯(lián)免疫檢測(cè)法對(duì)檢測(cè)設(shè)備要求高，測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確，可以有效避免假陽(yáng)性結(jié)果，所以，酶聯(lián)免疫檢測(cè)法則適合于對(duì)少數(shù)膠體金法檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性的患者進(jìn)行再次篩檢，進(jìn)而大幅度提升檢測(cè)的準(zhǔn)確率。