心神寧片特征圖譜的初步研究

宋佳　侯超　段樹卿　李云霞

[摘要]目的 建立心神寧片的高效液相色譜法（HPLC）特征圖譜。方法 采用HPLC法建立心神寧片的特征圖譜，采用Perkin Elmer C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動相：以乙腈（A）～0.2%冰乙酸（B）為流動相進(jìn)行梯度洗脫;檢測波長260 nm;柱溫25℃;流速1.0 ml/min;進(jìn)樣體積10 μl。結(jié)果 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》進(jìn)行分析，共確定了8個共有峰，精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性實驗中共有峰相對保留時間RSD值均<0.62%，相對峰面積RSD值均<2.86%。初步建立了心神寧片的HPLC特征圖譜，并進(jìn)行了相似度分析。結(jié)論 所建立的方法簡便、有效、重現(xiàn)性良好，建立的對照特征圖譜對心神寧片的整體質(zhì)量提出了更高的要求，為從整體上控制心神寧片的質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]心神寧片;特征圖譜;高效液相;初步研究

[中圖分類號] R286 ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）11（c）-0034-03

Preliminary study on the characteristic atlas of Xinshenning Tablets

SONG Jia1，2? ?HOU Chao1*? ?DUAN Shu-qing1，2? ?LI Yun-xia1，2

1. Jingfukang Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Hebei Province， Chengde? ?067000， China; 2. Hebei New Engineering Technology Research Center of Traditional Chinese Medicine， Hebei Province， Chengde? ?067000， China

[Abstract] Objective To analyze the specific chromatograms of Xinshenning Tablets by high performance liquid chromatography （HPLC）. Methods Perkin Elmer C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm） column was used for high performance liquid HPLC with a gradient elution of acetonitrile-0.2% glacial acetic acid in mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/min. The wavelength was 260 nm， the column temperature was 25°C， and the injection volume was 10 μl. Results All results of the experiment were analyzed with Chromatographic Fingerprint Evaluation System， 8 common peaks were identified; the RSD of the relative retention time in precision， stability and repea-tability experiments were all less than 0.62%， and the RSD of relative peak area was less than 2.86%. The standard specific chromatogram was established， and similarity analysis was carried out. Conclusion The established HPLC method of Xinshenning Tablets is simple， effective and reproducible， the establishment of the control characteristic map will put forward higher requirements for product quality and provides a basis for the overall control of the quality of compound Xinshenning Tablets.

[Key words] Xinshenning Tablets; Specific chromatograms; High performance liquid chromatography; Preliminary study

心神寧片由酸棗仁、遠(yuǎn)志、茯苓、梔子、神曲、甘草等六味中藥組成，收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中[1]?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中含量測定項下只有梔子苷1項，其他相關(guān)研究，多是對一種或幾種成分進(jìn)行的定性或定量研究，用于中藥制劑的質(zhì)量評價已無法滿足實際需求[2-5]，難以從整體上評價心神寧片的質(zhì)量。而中藥指紋（特征）圖譜技術(shù)作為多指標(biāo)綜合評價中藥材或中成藥的有效手段，可較為全面的反映藥品化學(xué)成分的變化情況和評價中藥制劑均一性及穩(wěn)定性，更具科學(xué)性[6-9]。綜合中藥特征圖譜的特點和心神寧片質(zhì)量研究的需求，本實驗參考相關(guān)文獻(xiàn)[10-17]，采用高效液相色譜法（HPLC），建立了心神寧片的特征圖譜，同時對10批樣品的相似度進(jìn)行評價，并初步確立了共有峰的歸屬，以期為心神寧片的質(zhì)量研究提供科學(xué)依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1主要儀器

高效液相色譜儀（Agilent1260），紫外檢測器：Perkin Elmer C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱;KQ-500DE醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒AE 240）。

1.2試藥

乙腈（美國Fisher）為色譜純;冰乙酸、乙醇（天津佳興化工玻璃儀器工貿(mào)有限公司）分析純，純化水（三級反滲法）。心神寧片（批號392170、530011、530079， 530083、530269、530270、530271、530274、530275、530276）、陰性樣品及陰性樣品制備所用原料由頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供（頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司中藥鑒別師鑒定為真品）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱為Perkin Elmer C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動相為A（乙腈）～B（0.2%冰乙酸水），梯度洗脫0～12 min，17%～19%A;12～22 min，19%～30%A;22～25 min，30%～35%A;25～35 min，35%～55%A;35～38 min，55%～60%A;38～43 min，60%A;43～50 min，60%～65%A;50～52 min，65%～17%A。檢測波長為260 nm;柱溫為25℃;流速為1.0 ml/min;進(jìn)樣量為10 μl。

2.2供試品溶液的制備

取本品，去除包衣研細(xì)，取粉末約0.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 ml，稱定質(zhì)量，超聲提取10 min，放至室溫，稱重補重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液即得。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1精密度試驗? 取同一批次心神寧片（批號392170），按照“2.2”項制備供試品溶液，按照“2.1”項條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，計算共有峰的相對保留時間及相對峰面積，其相對保留時間RSD值均<0.09%，相對峰面積RSD值均<2.86%。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》對結(jié)果進(jìn)行計算，其相似度均>0.99，表明儀器精密度良好，符合特征圖譜的檢測要求。

2.3.2重復(fù)性試驗? 取同一批次心神寧片（批號392170），按照“2.2”制備供試品溶液6份，按照“2.1”項條件測定，共有峰相對保留時間RSD值均<0.62%，相對峰面積RSD值均<2.00%，其相似度均>0.99，表明該處理方法重現(xiàn)性良好。

2.3.3穩(wěn)定性試驗? 取同一批次心神寧片（批號392170），按照“2.2”項制備供試品溶液，按照“2.1”項條件測定，分別在0，2，4，6，8，10，12 h進(jìn)樣10 μl，進(jìn)行特征圖譜測定，相似度均>0.99，共有峰的相對保留時間RSD值均<0.15%，相對峰面積RSD值均<2.16%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.4心神寧片標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜的建立

2.4.1特征圖譜的建立? 取上述10批心神寧片，按照2.2方法分別制備供試品溶液，并按照“2.1”條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，通過對以10個不同批號心神寧片的紫外吸收光譜與保留時間方法，確認(rèn)共有特征峰包括參考峰（1號峰）在內(nèi)的8個共有色譜峰。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》進(jìn)行評定，色譜峰進(jìn)行匹配，時間窗寬度設(shè)為0.3 min，采用中位數(shù)法生成對照特征圖譜，見圖1（封四）、圖2。

2.4.2樣品相似度評價? 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》對上述10批樣品進(jìn)行相似度評價。將各批次色譜圖導(dǎo)入軟件，計算色譜圖的相似度（表1）。

由檢測結(jié)果可知，10批樣品的相似度達(dá)到0.972以上，說明生產(chǎn)工藝條件較為穩(wěn)定，選材提取過程較為嚴(yán)格

3討論

3.1色譜條件的優(yōu)選

流動相的選擇：比較了乙腈～水、甲醇～水、乙腈～0.1%冰乙酸、乙腈～0.2%冰乙酸、乙腈～0.5%冰乙酸、乙腈～1%冰乙酸等作為流動相時，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈～0.2%冰乙酸作為流動相，色譜峰數(shù)目較多，基線較平，干擾較少且分離度良好。

檢測波長的選擇：采用DAD檢測器，在200～400 nm進(jìn)行全波長掃描，發(fā)現(xiàn)在260 nm處，色譜峰較多，大部分色譜峰得到較好地分離且特征峰型較好，確定260 nm作為檢測波長。

3.2樣品制備條件的優(yōu)選

考察了提取溶劑甲醇（100%、70%、50%）、乙醇（100%、70%、50%），考察了加入溶劑量10、25、50 ml，考察了超聲5、10、25、35 min，最終確定條件為：精密加入70%甲醇25 ml，超聲10 min為宜。

3.3共有峰的初步歸屬

按照處方比例制備各陰性樣品、各單味藥材溶液進(jìn)行檢測，與對照特征圖譜對比，初步發(fā)現(xiàn)：峰1為梔子藥材的歸屬峰，峰2、3為遠(yuǎn)志藥材的歸屬峰，峰4為酸棗仁藥材的歸屬峰，峰5、6、7、8為甘草藥材的歸屬峰。

綜上所述，本研究初步建立了心神寧片的HPLC特征圖譜，所建立的方法簡便、有效、重現(xiàn)性良好，建立的對照特征圖譜為從整體上控制心神寧片的質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。10批樣品相似度達(dá)到0.972以上，反映了不同批次心神寧片的共性及差異，說明其生產(chǎn)工藝條件較為穩(wěn)定，選材提取過程較為嚴(yán)格。但考慮到投料藥材的批次等問題，還待收集更多批次和不同廠家的樣品，進(jìn)一步深入探究。

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（收稿日期2019-05-22? 本文編輯：崔建中）