土拉桿菌病特征及其國內外流行狀況

周曉翠，孫翔翔，張喜悅

（中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島 266032）

土拉桿菌病在我國又被稱為野兔熱，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為須通報的多種動物共患疫病[1]，屬于我國二類動物疫病[2]。土拉桿菌病病原為土拉桿菌，在我國人間傳染的病原微生物名錄中，被列入第二類細菌，其活菌操作和動物試驗均需在生物安全三級實驗室進行，樣品檢測需在生物安全二級實驗室進行，運輸包裝需遵守UN2814標準。近年來世界各地均有土拉桿菌病的報道。本文主要從土拉桿菌病的病原學、流行病學、臨床癥狀、病理變化、診斷、治療以及國內外流行狀況等進行綜述。

1 病原學

1911年Mccoy和Chapin首次在美國土拉地區(qū)的黃鼠體內發(fā)現土拉桿菌，1919—1920年Francis從病人的血液和淋巴腺中分離出土拉桿菌，1921年Francis將此菌引起的疾病命名為土拉桿菌病[3]。

根據培養(yǎng)特性、流行病學特征和毒力，可將土拉桿菌分為土拉桿菌土拉熱亞種（A型）和土拉桿菌全北區(qū)亞種（B型）兩個型： A型與北美地區(qū)的兔類發(fā)病有關，主要通過蜱、蠅的叮咬或直接接觸感染動物傳播，對人和家兔具有極強的致病性，大部分分離株能發(fā)酵甘油；B型主要發(fā)生于水生嚙齒動物（海貍、麝鼠）、北美的野鼠及歐亞大陸的兔類和嚙齒類動物，主要通過直接接觸或節(jié)肢動物（主要是虱子和蚊子）傳播，也可通過呼吸或食入污染的水或食物傳播，對人和家兔的致病性較小，且不發(fā)酵甘油[4]。

土拉桿菌是一種微小的細菌，大小約（0.7～1.0）μm×（0.2～0.5）μm，需要借助于顯微鏡才能觀察到，為革蘭氏陰性球桿菌，無運動力，不形成芽胞，嚴格需氧，最適生長溫度為37 ℃；過氧化物酶試驗陰性，過氧化氫酶試驗弱陽性，生長需要半胱氨酸。土拉桿菌在低溫條件下和在水中能長時間存活，在室溫下的動物尸體中可存活40 d，在禽類（鳥、雞等）臟器中可存活26～40 d，在病獸皮毛中能存活35～45 d。對紫外線、熱與化學藥物抵抗力弱，56 ℃ 30 min可死亡，在沸騰的開水中立即死亡；在直射太陽光下經30 min死亡，一般消毒藥物都能很快將其殺死。因此，如發(fā)生該病，可以用高溫消毒、紫外線照射和消毒劑進行殺菌。

2 流行病學

本病的潛伏期一般為3～5 d，其中野兔為1～9 d，最長可達15 d。在自然條件下，該病常發(fā)生于兔（家兔和野兔）及其他嚙齒類動物，尤其是田鼠、香鼠、松鼠和海貍鼠等小型嚙齒動物。此外，也有多種哺乳動物、鳥類、兩棲動物和無脊椎動物被感染的報道。土拉桿菌病在北半球多呈地方性流行，其中在歐洲和北美洲許多國家呈暴發(fā)流行，在亞洲和歐洲其他一些國家僅有零星散發(fā)，而在熱帶地區(qū)和南半球很少有本病的報道[5]。

因為致人感染的劑量特別低，加之染病動物從糞尿中排菌，所以人類感染土拉熱弗朗西斯桿菌的風險很高，簡單接觸便能發(fā)生感染。因此，操作病原時，必須遵守相關的生物安全管理規(guī)定，做好防護措施，嚴格按照相關操作規(guī)程進行。

有綜述認為，健康者與病人接觸時也可感染該病，因此對病人應隔離治療；也有綜述認為，人不能作為傳染源傳播本病。筆者查閱文獻，尚未見到人與人之間傳播導致發(fā)病的報道。人的土拉桿菌病多是由于接觸感染動物或宿主引起的?；疾〉囊巴谩⒁笆蟮纫吧鷦游锸窃摼闹饕獢y帶者。已發(fā)現有83種節(jié)肢動物能傳播該病，主要有蜱、螨、蚊、虱類等。從事屠宰、皮毛加工和鹿鼠飼養(yǎng)的人員以及獵人、實驗室人員和林業(yè)工人等接觸病菌機會較多，為感染本病的高危人群。該病一般多發(fā)于春末、夏初季節(jié)，但也有秋末冬初發(fā)病的報道，這與各地野生嚙齒類動物和吸血昆蟲的繁殖時間有關。洪災或其他自然災害可導致該病大流行[6]。

美國統(tǒng)計1 824例病人的感染途徑發(fā)現，由于加工兔皮、食用兔肉而被感染的占84.7%。因傳播途徑不同，該菌的流行季節(jié)和類型各異：蟲媒傳播多于7—9月散發(fā)，經水傳播常為暴發(fā)，見于夏秋季，經食物傳播多散發(fā)于秋冬季，經空氣傳播多見于冬春，接觸性傳播全年可見，而且呈散在發(fā)生。

土拉桿菌具有高致病性，可以用于生物戰(zhàn)劑，因此必須做好相應的技術儲備和預防工作。如美軍已將黃熱病、Q熱、炭疽、土拉桿菌、布魯氏菌、肉毒毒素、葡萄球菌腸毒素等列為標準化生物戰(zhàn)劑。

3 臨床癥狀

3.1 動物土拉桿菌病

易感動物的臨床癥狀首先主要表現為極度沉郁，而后出現致死性敗血癥，病程約2～10 d，診斷時動物往往已經死亡。多數動物感染后無臨診癥狀，但可產生土拉熱特異性抗體[7]。

3.1.1 野生動物 表現精神沉郁、昏迷、垂頭，鼻、前爪瘙癢，有時擦地，不愿活動，行動蹣跚，有時呈反復僵硬性抽搐。野兔患病時常表現為驚恐，移動緩慢，容易被人捕獲。在自然條件下，當人們發(fā)現野生動物患病時，動物常處于瀕死狀態(tài)或已死亡。

3.1.2 兔 急性病例不表現明顯癥狀而呈敗血癥死亡，非急性病例表現體溫升高，死前食欲廢絕、運動失調。多數病例病程較長，呈高度消瘦和衰竭。

3.1.3 山羊和綿羊 表現發(fā)熱、呼吸加快、垂頭站立或臥地、后肢麻痹，頸部、背、肩胛前及腋下淋巴結腫大，有時出現化膿灶；妊娠母羊表現流產、難產或產死胎，羔羊還表現腹瀉、黏膜蒼白、麻痹、興奮或昏睡，不久死亡。

3.1.4 牛 癥狀一般不明顯，妊娠母牛常發(fā)生流產，犢牛表現全身虛弱、腹瀉、體溫升高等癥狀，多為慢性病例。

3.1.5 馬屬動物 無明顯癥狀，有的體溫升高，母畜可發(fā)生流產。

3.1.6 豬 多發(fā)生于小豬，表現體溫升高、咳嗽、腹瀉，病程7～10 d，很少死亡。

3.2 人土拉桿菌病

潛伏期常為3～5 d，也可1～21 d。根據細菌的毒力、數量和進入體內的途徑以及人體的免疫力等不同，本病的臨床癥狀變化較大。人土拉桿菌病可僅表現為血清學陽性，不呈現癥狀，也可導致膿毒癥，甚至是死亡。無臨床癥狀的病例占所有病例的4%～19%。癥狀常表現為突然發(fā)病、高燒、寒顫、疲乏無力、周身疼痛、頭痛及惡心；有時干咳、喉痛，發(fā)熱時間可持續(xù)幾天或幾周。B型土拉桿菌病的癥狀較輕，一般不致死，而A型土拉桿菌病可導致橫紋肌溶解以及敗血癥、休克等。

4 病理變化

急性死亡動物通常身體狀況良好，剖檢可見肝、骨髓和脾發(fā)生不規(guī)則分布的灰白色壞死灶的特征性敗血癥病變，脾臟通常腫大，壞死灶大小不一，在有些病例中肉眼很難被發(fā)現。肺臟通常充血、水腫，可見器質性變化和纖維素性肺炎或胸膜炎。腹腔中可出現纖維蛋白。一處或多處淋巴結發(fā)生干酪樣壞死，腹腔、胸腔和四肢的淋巴結最常受到侵害。易感性較低動物的肺臟、心包膜、腎臟、脾臟和肝臟中出現肉眼可見的類似于結核病的亞急性或慢性肉芽腫。巨噬細胞是肉芽腫中最主要的細胞組成類型，但偶爾也可發(fā)現淋巴細胞、中性粒細胞、多核巨細胞和成纖維細胞。在這些病變中心，多見單灶性或多灶性壞疽[8]。

5 診斷

5.1 臨床診斷

可根據本病的流行病學、臨床癥狀做出初步判斷，但需進一步進行實驗室確診。

5.2 實驗室診斷

近幾年，中國動物衛(wèi)生與流行病學中心從位于德國耶拿的細菌感染與人畜共患病研究所（Institute for bacterial infections and zoonoses） 引進了土拉桿菌病實驗室診斷技術。由于病原的分離鑒定需要較高的生物安全防護措施，且初代培養(yǎng)時間很長，該實驗室主要的檢測方法是采集動物的脾臟和肝臟進行多重PCR檢測。

5.2.1 多重PCR方法 該方法即可以定性，也可以定型，即區(qū)分A型和B型。通常來說，感染動物的均為B型。在歐洲分離的菌株也多為B型，A型僅見于北美。該多重PCR主要應用TUL4-435、TUL4-863、FtC1和FtC4等 4條引物，經94 ℃ 5 min 的初變性，經 94 ℃ 30 s、60 ℃ 60 s、72 ℃ 30 s的35個循環(huán)，經72 ℃ 5 min延伸后，所有土拉桿菌均有428 bp擴增，所有A型土拉桿菌成員均有200 bp擴增，所有B型土拉桿菌成員均有170 bp擴增。

5.2.2 熒光定量PCR方法 德國土拉桿菌病參考實驗室的熒光定量PCR雖然能夠定性，但不能區(qū)分A型和B型，因此應用較少。其目標基因是Tul4基因，引物為Ft上游和Ft下游，探針為FtTM探針，經50 ℃ 2 min的去污染、95 ℃ 2 min的初變性，經95 ℃ 15 s、60 ℃ 30 s的55個循環(huán)，陽性樣品可見有正弦曲線形成。

5.2.3 血清學試驗 血清學常用于診斷人土拉桿菌病，對敏感動物的診斷價值不大，因為動物在產生抗體前常常已經死亡。血清學主要用于那些對土拉桿菌有較強或相對較強抵抗力的動物，如綿羊、牛、豬、駝鹿、狗、狐貍、野豬、鳥類，或用于歐洲中部歐洲野兔的流行病學調查。目前應用最普遍的血清學方法是凝集試驗。常用的有玻片凝集試驗、試管凝集試驗和微量凝集試驗。

6 防治

預防該病的方法主要是撲殺鼠、野兔，消滅動物身上的蜱、跳蚤等吸血性寄生蟲。自然環(huán)境中，野兔和野鼠的土拉桿菌病不易被根除，但清除鼠類棲息場所、保護食鼠動物是防止該病流行的最有效和安全的措施。對于人工飼養(yǎng)的野生動物，為控制本病的發(fā)生，應注意根除野生嚙齒動物和外寄生蟲，加強飲食管理，做好衛(wèi)生防疫工作。鏈霉素是治療土拉桿菌病的最有效抗生素，既有抑菌作用也有殺菌作用，其治療效果已在小白鼠、猴的土拉桿菌的試驗感染中得到驗證。

7 流行狀況

7.1 國外狀況

土拉桿菌病在北美、中亞、北歐、巴爾干地區(qū)以及東歐的俄羅斯、東亞的日本等地均有病例報道，北美和北歐是土拉菌病的主要流行地區(qū)。美國1939年的一次大暴發(fā)，波及2 291人，20世紀50年代后病例逐漸減少，2010年僅為100例。前蘇聯(lián)1940年暴發(fā)的疫情波及10萬多人（有人推測這可能是由于生物武器泄露所致）。受科索沃戰(zhàn)爭影響，巴爾干地區(qū)在1999—2000年暴發(fā)了疫情，之后疫情延續(xù)，1999—2010年的病例數達到了1 221例。2001—2010年，科索沃、瑞典、芬蘭、斯洛伐克、捷克、挪威、塞爾維亞黑山、匈牙利、保加利亞和克羅地亞的發(fā)病率分別為每10萬人中5.20、2.80、1.19、1.00、0.81、0.42、0.40、0.36、0.21和0.15例，而英國、冰島以及非洲、南美洲和南極洲未見報道，澳大利亞僅有2例報道[9-10]。

7.2 國內狀況

7.2.1 動物間 1957年，內蒙古鼠防站在通遼地區(qū)，首次從自斃的達烏利黃鼠中分離出本菌。目前，我國動物發(fā)病的報道主要集中在水貂和海貍鼠等經濟動物，死亡率多在20%以上。如1995年，我國報道了陜西省1起水貂土拉桿菌病疫情，全群共245只，先后發(fā)病223只，發(fā)病率為91%，死亡185只，病死率為75.5%。2006年，于俊開等[11]報道遼寧省莊河市的水貂發(fā)生土拉桿菌病疫情，飼養(yǎng)種貂650只，死亡130只，死亡率為20%。2010年，李建新等[12]報道甘肅武威市發(fā)生水貂土拉桿菌病疫情，156只水貂中，死亡78只，死亡率達50%。從上述報道的發(fā)病病例來判斷，我國土拉桿菌病主要呈點狀散發(fā)流行。

7.2.2 人間 1959年，黑龍江省杜爾伯特縣某村，農民從黃鼠洞內掏黃豆，擦傷手指引發(fā)疫情，最終全村發(fā)病14例，發(fā)病率為5.8%。1986年，山東省膠南縣某野兔肉加工廠暴發(fā)土拉桿菌病疫情，10 d內發(fā)病31 人。之后尚未見我國人間病例報道，相關報道主要集中在土拉桿菌病的血清流行病學調查方面。

7.2.3 血清流行病學調查 我國學者在西藏、甘肅等地開展了相關工作。如1962年原西藏軍區(qū)軍事醫(yī)學研究所對藏區(qū)進行該病調查，共檢測居民5 034人，發(fā)現陽性375人，陽性率為7.45%；同時對昌都地區(qū)進藏部隊6年以上人員共67人進行血清學調查，發(fā)現感染率為25.30%[13]。1993年，王大虎等[14]在甘肅省迭部林區(qū)進行的土拉桿菌病血清流行病學調查，檢測人血清689份，檢出陽性93份，陽性率為13.50%；牛血清56份，陽性8份，陽性率為14.29%；山羊血清270份，陽性40份，陽性率為14.81%。經統(tǒng)計分析，證實男性感染率（16.58%）顯著高于女性（9.12%），不同民族的感染率無明顯差異，40～49歲年齡組土拉菌病血清感染率最高，認為可能是由于在一線作業(yè)工人中男性占的比重較大且男性戶外活動較女性多，從而接觸媒介蟀的機會和受蟬叮咬的概率及受感染頻率多的緣故。1998年，黨榮理等[15]在西藏阿里地區(qū)進行土拉桿菌病血清流行病學調查，檢測人血清349份，檢出陽性4份，陽性率為1.15%；羊血清425份，陽性90份，陽性率為21.18%，認為當地的抗體陽性率遠高于國內其他地區(qū)。

7.2.4 自然疫源地調查 目前的報道主要集中在西藏地區(qū)。如張桂林等[13]和黨榮理等[15]對西藏阿里地區(qū)的疫源地進行了分析。他們認為該地區(qū)的自然疫源地分布在4個縣境內，疫區(qū)空間結構呈島狀或帶狀排列，夏季牧場和冬季牧場為疫區(qū)中心地帶；疫源地內蜱類有5屬8種，其中銀盾革蜱為優(yōu)勢種，是主要媒介，對土拉桿菌在嚙齒類動物中的傳播和越冬起著決定性作用。西藏地區(qū)吸血昆蟲種類、數量較多，嚙齒類動物及家畜種群豐富，數量多、密度大，滿足了自然疫源性疾病長期存在和世代交替的條件。

8 防控建議

根據上述內容。我國人間土拉桿菌病近年來的報道病例極少，動物土拉桿菌病僅有零星散發(fā)。這可能有2個原因：一是隨著社會發(fā)展，人類與野生動物和吸血昆蟲的接觸日漸減少，從而導致病例逐漸減少；二是由于本病病原對鏈霉素敏感，很多病人在確診前就得到了及時治療并痊愈。今后建議對我國的嚙齒類經濟動物和水貂等進行病原學流行病學調查，并對那些對土拉桿菌有較強抵抗力的動物，如綿羊、牛、豬、駝鹿、狗、狐貍、野豬等進行血清學流行病調查，根據調查結果掌握土拉桿菌病在動物間的流行狀況，及時提出土拉桿菌病向人間傳播的預警。