節(jié)節(jié)紅化學(xué)成分研究△

李秋萍，姚彩云，吳玲玲，閆炳雄，宋志軍，繆劍華，*，李力，*

1.廣西醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，廣西 南寧 530021；2.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 西南瀕危藥材資源開發(fā)國家工程實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530023

菊科艾納香屬BlumeaDC.植物約有80多個(gè)物種，主要分布于熱帶、亞熱帶地區(qū)。中國有30余種，分布于長江流域以南各省[1]。艾納香屬植物能祛風(fēng)除濕、清熱解毒和利水消腫等，在民間被廣泛應(yīng)用。目前從艾納香屬植物中分離得到的化合物主要為黃酮、苯丙素、萜和揮發(fā)油等成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，艾納香屬植物具有抗菌、抗氧化、肝臟保護(hù)和抗腫瘤等多種生物活性[2-3]。節(jié)節(jié)紅Blumeafistulosa(Roxb.)Kurz為菊科艾納香屬草本植物，別名聚花香艾納，主要分布于云南、貴州、廣西和廣東，生于山坡林緣、空曠草地或溪邊，為廣西民間廣泛應(yīng)用的草藥，見于《海南植物志》和《廣西植物名錄》，全草做強(qiáng)壯劑[4]。文獻(xiàn)調(diào)研表明，前人主要對艾納香屬植物如艾納香、山風(fēng)等的化學(xué)成分和藥理活性進(jìn)行研究[3，5]，而對廣西民間藥用植物節(jié)節(jié)紅的化學(xué)成分無文獻(xiàn)報(bào)道。本研究首次對節(jié)節(jié)紅的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，以期探究其活性化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 植物來源

節(jié)節(jié)紅莖葉，采自貴州省望謨縣，由貴州望謨縣林業(yè)局黃江華工程師鑒定為節(jié)節(jié)紅B.fistulosa(Roxb.)Kurz，標(biāo)本存放在廣西壯族自治區(qū)藥用植物園標(biāo)本館(No.0115698)。

1.2 儀器及試劑

瓦里安核磁共振儀(Varian-600 MHz NMR Spectrometer)。Pharmacia公司生產(chǎn)的Sephadex LH-20凝膠；薄層層析板GF254(50 mm×50 mm，0.20～0.25 mm，青島海洋化工廠分廠)，色譜硅膠(100～200、200～300目，青島海洋化工有限公司)，實(shí)驗(yàn)中所用到的有機(jī)試劑均為分析純。

2 提取與分離

粉碎后的節(jié)節(jié)紅莖葉6.14 kg，用80%乙醇-水提取3次，每次30 L，合并提取液，濃縮。濃縮液經(jīng)石油醚除脂后以乙酸乙酯(YY)萃取，得到Y(jié)Y部位的流浸膏，取少量流浸膏干燥至恒重后，經(jīng)折算得YY部位干質(zhì)量58.4 g。YY部位上MCI柱，以5%～100%甲醇水梯度洗脫，除去葉綠素。TLC檢測合并得到Fr-A、B、C、D、E、F、G、H部位。Fr-A經(jīng)凝膠柱分離純化，三氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫，得到化合物1(30.0 mg)和2(50.0 mg)?；衔?母液經(jīng)硅膠柱[石油醚-丙酮(7∶1→1∶1)]梯度洗脫得到化合物3(10.2 mg)。Fr-A-26經(jīng)硅膠柱[石油醚-丙酮(3∶1→1∶1)]梯度洗脫得到化合物4(75.3 mg)。Fr-B經(jīng)凝膠[三氯甲烷-甲醇(1∶1)]和硅膠柱[石油醚-丙酮(10∶1→1∶1)]梯度洗脫得到化合物5(5.0 mg)。Fr-C經(jīng)硅膠柱[三氯甲烷-甲醇(100∶1→0∶1)]梯度洗脫和凝膠柱[三氯甲烷-甲醇(1∶1)]分離純化，得到化合物6(15.1mg)和7(25.5 mg)。Fr-H經(jīng)凝膠[三氯甲烷-甲醇(1∶1)]和反相柱[甲醇-水(60∶40→100∶0)]梯度洗脫分離純化，得到化合物8(10.4 mg)和9(854.5 mg)。

3 結(jié)果與討論

化合物1：為淡黃色粉末，ESI-MS準(zhǔn)分子離子峰：m/z431 [M-H]-提示其分子式為C21H20O10。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.93(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.91(2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′)，6.85(1H，s，H-3)，6.81(1H，s，H-8)，6.42(1H，s，H-6)，5.43(1H，brs，OH)，5.15(1H，brs，OH)，5.09(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，5.03(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，4.63(1H，brs，OH)，3.27-3.63(6H，m，H-2″，6″)。以上氫譜數(shù)據(jù)基本與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6-7]，故鑒定化合物1為芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物2：為白色粉末，通過ESI-MS準(zhǔn)分子離子峰：m/z269[M-H]-，推測其分子量為270。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.90(2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′)，6.89(2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′)，6.76(1H，s，H-3)，6.46(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.16(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)。以上數(shù)據(jù)基本與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]，鑒定化合物2為芹菜素(Apigenin)。

化合物3：為白色粉末，通過ESI-MS準(zhǔn)分子離子峰：m/z207[M-H]-，提示其分子式為C21H20O10。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.42(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，7.01(1H，s，H-6)，6.96(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz，H-2)，6.73(1H，d，J=8.4 Hz，H-3)，6.23(1H，d，J=16.2 Hz，H-8)，4.11(1H，dd，J=7.2，13.8 Hz，H-1′)，1.20(3H，t，J=7.2，14.4 Hz，H-2′)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：167.1(C-9)，148.8(C-4)，145.9(C-3)，145.6(C-7)，125.9(C-1)，122.0(C-5)，116.1(C-2)，114.5(C-6)，114.4(C-8)，60.2(C-1′)，14.8(C-2′)。以上數(shù)據(jù)基本與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8-9]，鑒定化合物3為咖啡酸乙酯(Ethyl caffeate)。

化合物4：為淡黃色粉末，通過ESI-MS準(zhǔn)分子離子峰：m/z285[M-H]-，提示其分子式為C15H10O6。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.39(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz，H-6′)，7.36(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，6.86(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.65(1H，s，H-3)，6.42(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.16(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：182.1(C-4)，164.5(C-7)，164.3(C-2)，161.8(C-5)，157.7(C-9)，150.1(C-4′)，146.1(C-3′)，121.8(C-1′)，119.4(C-6′)，116.4(C-5′)，113.7(C-2′)，104.1(C-10)，103.2(C-3)，99.3(C-6)，94.3(C-8)。以上數(shù)據(jù)基本與文獻(xiàn)[10-11]報(bào)道一致，故化合物4為木犀草素(Luteolin)。

化合物5：為白色立方晶體，通過ESI-MS準(zhǔn)分子離子峰：m/z164[M-H]-，提示其分子式為C9H10O3。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.15～7.24(5H，m，H-1，H-2，H-3，H-4，H-5，)，4.10(1H，m，H-8)，2.93(1H，dd，J=13.2，4.2 Hz，H-7)，2.75(1H，m，H-7)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：139.5(C-1)，128.4(C-2，6)，129.8(C-3，5)，126.5(C-4)，71.5(C-8)，40.4(C-7)，175.6(C-9)。核磁共振1H及13C譜圖在δH7.15～7.24(5H，m，H-1，H-2，H-3，H-4，H-5)及δC139.5(C-1)，128.4(C-2，6)，129.8(C-3，5)，126.5(C-4)的信號提示該化合物存在一個(gè)單取代苯環(huán)；扣除上述6個(gè)芳碳信號，尚有δC71.5(C-8)，40.4(C-7)和175.6(C-9)碳信號，提示存在一個(gè)羥丙酸片段，查閱文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)應(yīng)為α-羥基苯丙酸[12]。

化合物6：為黃色粉末，通過ESI-MS準(zhǔn)分子離子峰：m/z328[M-H]-和331[M+H]+提示其分子式為C17H14O7。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.29(2H，s，H-2′，6′)，6.96(1H，s，H-3)，6.53(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.17(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，3.85(6H，s，OCH3)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：182.2(C-4)，164.5(C-7)，164.1(C-2)，161.7(C-5)，157.7(C-9)，148.6(C-3′，5′)，140.2(C-4′)，120.8(C-1′)，104.6(C-2′，6′)，104.1(C-10)，104.0(C-3)，99.3(C-6)，94.7(C-8)，56.8(OCH3)。以上數(shù)據(jù)基本與文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]，故鑒定化合物6為小麥黃素(Tricin)。

化合物7：為黃色粉末，ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰在m/z301[M+H]+和299[M-H]-，說明其分子量為300，提示其分子式為C16H12O6。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：12.94(1H，s，5-OH)，10.87(1H，s，7-OH)，10.00(1H，s，4′-OH)，7.54(1H，brs，H-6′)，7.53(1H，s，H-2′)，6.90(1H，d，J=7.8 Hz，H-5′)，6.88(1H，s，H-3)，6.49(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.17(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，3.86(3H，s，OCH3)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：182.2(C-4)，164.5(C-7)，164.1(C-2)，161.8(C-5)，157.8(C-9)，151.1(C-4′)，148.4(C-3′)，121.9(C-1′)，120.8(C-6′)，116.2(C-5′)，110.4(C-2′)，104.1(C-10)，103.6(C-3)，99.3(C-6)，94.5(C-8)，56.3(MeO)。以上數(shù)據(jù)基本與文獻(xiàn)報(bào)道一致[14]，故化合物7為金圣草黃素(Chrysoeriol)。

化合物8：為白色粉末，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)推測分子式為C30H50O。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.17(1H，dd，H-3)，2.36(1H，m，H-18)，2.27(1H，m，H-7)，1.66(3H，m，H-30)，1.65(1H，m，H-1)，1.50～1.70(2H，m，H-2)，1.50(1H，m，H-6)，1.36(1H，m，H-6)，1.36(1H，m，H-7)，1.38(1H，m，H-11)，1.25(1H，s，H-9)，1.23(1H，m，H-11)，1.65(1H，s，H-12)，1.01(1H，s，H-12)，1.64(1H，s，H-13)，0.96(1H，m，H-15)，1.10(1H，m，H-15)，1.47(1H，m，H-16)，1.38(1H，m，H-22)，1.36(1H，m，H-16)，1.35(1H，m，H-19)，1.24(1H，s，H-21)，1.18(1H，m，H-22)，1.02(3H，s，H-26)，0.95(3H，s，H-23)，0.93(3H，s，H-27)，0.89(1H，m，H-1)，0.81(3H，s，H-25)，0.77(3H，s，H-28)，0.74(3H，s，H-24)，0.66(1H，d，J=9.0 Hz，H-5)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：151.0(C-20)，109.3(C-30)，79.0(C-3)，55.2(C-5)，50.4(C-9)，48.3(C-19)，48.0(C-18)，43.0(C-17)，42.8(C-14)，40.8(C-8)，40.0(C-22)，38.8(C-4)，38.7(C-1)，38.0(C-13)，37.1(C-10)，35.6(C-16)，34.2(C-7)，29.8(C-21)，28.0(C-23)，27.4(C-2)，27.4(C-15)，25.1(C-12)，20.9(C-11)，19.4(C-29)，18.3(C-6)，18.0(C-28)，16.0(C-25)，16.1(C-26)，15.4(C-24)，14.5(C-27)。以上數(shù)據(jù)基本與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物8為羽扇豆醇(Lupeol)。

化合物9：為白色粉末，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)推測分子式為C44H76O6。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：0.94～0.97((1H，m，H-1)，1.91～1.93(1H，m，H-2)，3.44(1H，m，H-3)，0.78～0.81(1H，m，H-5)，0.97～0.99(1H，m，H-6)，1.46～1.51(1H，m，H-7)，0.97～0.99(1H，m，H-9)，0.88～0.91(1H，m，H-10)，0.88～0.91(1H，m，H-11)，0.92～0.94(1H，m，H-12)，0.88～0.91(1H，m，H-15)，5.00(1H，dd，J=9.0 Hz，H-16)，0.56～0.59(1H，m，H-19)，0.56～0.59(1H，m，H-20)，1.01(1H，m，H-21)，1.96～1.98(1H，m，H-22)，0.96(1H，overlap，H-23)，0.95(1H，overlap，H-24)，0.88(1H，overlap，H-25)，0.90(1H，overlap，H-26)，0.91(1H，overlap，H-27)，0.85(1H，overlap，H-28)，1.18(1H，overlap，H-29)，1.96～1.98(1H，m，H-30)，1.90～1.94(1H，m，H-31)，1.90～1.94(1H，m，H-32)，0.77(1H，m，H-32a)，2.08～2.10(1H，m，H-33)，0.73(1H，overlap，H-33a)，2.48～2.50(1H，m，H-34)，0.67(1H，overlap，H-34a)，0.65(1H，overlap，H-35)，5.13(1H，d，J=8.4 Hz，H-1′)，3.09～3.15(1H，m，H-2′)，3.62～3.66(1H，m，H-3′)，4.20～4.24(1H，m，H-4′)，3.04～3.09(1H，m，H-5′)，4.44～4.48(1H，m，H-6′)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：140.8(C-17)，121.7(16)，101.2(C-1′)，77.3(C-3)，73.9(C-5′)，77.2(C-3′)，77.2(C-2′)，70.5(C-4′)，61.5(C-6′)，56.6(C-21)，55.9(C-5)，51.0(C-9)，50.0(C-13)，45.6(C-4)，42.3(C-14)，42.2(C-18)，40.4(C-10)，38.7(C-19)，37.3(C-1)，36.7(C-8)，31.9(C-2)，31.8(C-15)，29.7(C-7)，21.6(C-11)，24.3(C-12)，29.1(C-20)，35.9(C-22)，28.3(C-23)，25.8(C-34)，20.2(C-26)，25.3(C-30)，23.0(C-31)，23.0(C-32)，21.4(C-33)，21.0(C-29)，19.4(C-24)，19.5(C-25)，19.5(C-27)，19.3(C-6)，19.1(C-28)，12.1(C-35)，12.6(32-CH3)，12.3(33-CH3)，12.2(34-CH3)。以上數(shù)據(jù)基本與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]，鑒定化合物9為32，33，34-三甲基-細(xì)菌藿烷-16-烯3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

4 結(jié)論

本研究從節(jié)節(jié)紅中共分離得到了9個(gè)化合物，其中7個(gè)酚酸性化合物、2個(gè)萜類化合物。其中，芹菜素具有抗炎、抗氧化、舒張血管等活性。芹菜素不溶于水，但是可以通過疏水作用力與黃嘌呤氧化酶形成基態(tài)復(fù)合物，并引起黃嘌呤氧化酶二級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而抑制黃嘌呤氧化酶活性[17]；芹菜素可能通過下調(diào)Bcl-2并同時(shí)上調(diào)Bax表達(dá)，從而導(dǎo)致Bcl-2/Bax比值下降、PARP活化等，抑制人膀胱癌5637細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[18]?？Х人嵋阴ゾ哂幸欢ǖ目寡谆钚?，邱文慧等[19]從穗花蛇菰中分離得到的咖啡酸乙酯，藥理活性研究顯示其具有溫和的抗炎活性，IC50值為7.29 μmol·L-1?？Х人崮苡行б种艸PV-6、HPV-16及HPV-18 3株不同亞型的HPV(人乳頭瘤病毒)感染，對病毒進(jìn)入靶細(xì)胞的早期階段具有一定抑制作用[20]。木犀草素廣泛分布于自然植物中，研究顯示木犀草素能抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移并且可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡[21]。3-苯基乳酸是由乳酸細(xì)菌等微生物合成的一種天然抗菌物質(zhì)。龔春燕等[22]從多粘類芽孢桿菌的發(fā)酵液中分離得到3-苯基乳酸，對青枯勞爾氏菌的最小抑菌濃度(MIC)為2 mg·mL-1。小麥黃素具有抑制HCMV(人類巨細(xì)胞病毒)復(fù)制的作用。CCL5是參與HCMV復(fù)制的趨化因子之一，小麥黃素可以使CCL5蛋白表達(dá)水平降低從而顯示抗HCMV活性。由此確定趨化因子CCL5可能是小麥黃素的靶點(diǎn)之一[23]。金圣草黃素不僅具有抗菌活性，還是一種選擇性的PI3K-AKT-mTOR通路抑制劑，它通過抑制PI3K-AKT-mTOR信號通路而表現(xiàn)出細(xì)胞周期調(diào)控作用，抑制人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的增殖[24]。Wang等[25]的研究表明，羽扇豆醇可以通過抑制COX-2、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)來抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的遷移和侵襲。節(jié)節(jié)紅化合物的分離鑒定基本闡釋了節(jié)節(jié)紅的活性物質(zhì)基礎(chǔ)，從這些成分藥理作用的文獻(xiàn)調(diào)研說明節(jié)節(jié)紅作為廣西民間用藥，具有進(jìn)一步研究和開發(fā)的價(jià)值。