左旋肉堿在食品檢測(cè)中的研究新進(jìn)展

高澤岳，張雨桐，王璐，侯佳琪，李暉，周迎楠，禾苗，任明月

（吉林省安信食品技術(shù)服務(wù)有限責(zé)任公司，吉林長(zhǎng)春130118）

左旋肉堿是一種白色晶狀體或白色透明細(xì)粉，穩(wěn)定性、溶水性和吸水性較好。左旋肉堿存在于大多數(shù)哺乳動(dòng)物組織中，屬于類維生素的營(yíng)養(yǎng)素，與動(dòng)物體內(nèi)的脂肪酸代謝密切相關(guān)，是一種具有調(diào)節(jié)線粒體內(nèi)酰基比率、促進(jìn)脂肪酸β－氧化、抗疲勞排毒和促進(jìn)支鏈氨基酸正常代謝等多種生理功能的氨基酸物質(zhì)[1]。當(dāng)前，世界上已有22個(gè)國(guó)家和地區(qū)允許在嬰兒奶粉中添加左旋肉堿。我國(guó)也規(guī)定可在嬰幼兒奶粉中添加適量的左旋肉堿，以滿足嬰幼兒的生長(zhǎng)需要。因此，研究食品中左旋肉堿的檢測(cè)新進(jìn)展非常必要。

1 左旋肉堿在食品檢測(cè)中的研究新進(jìn)展

目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)左旋肉堿的檢測(cè)方法主要有：離子色譜法、分光光度法、液相色譜法以及液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法等。每種方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，例如，分光光度法需酶解過(guò)夜，檢出限較高、反應(yīng)效率比較低；離子色譜法特異性比較差；液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法雖然準(zhǔn)確性比較高，但是儀器比較昂貴，成本太高。

隨著研究的不斷進(jìn)步，左旋肉堿在食品檢測(cè)中的研究方法也在不斷發(fā)展，趙淑娟建立了乳粉中左旋肉堿含量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定法。樣品20%甲酸水-乙腈提取，正交試驗(yàn)優(yōu)化皂化條件，為15%氫氧化鉀溶液，按5∶1在60℃，皂化20 min。左旋肉堿的檢出限為 97.5μg/kg，定量限為 0.33 mg/kg。低、中和高3個(gè)水平的加標(biāo)回收率平均在97.5%～102.5%，RSD值為2.4%～3.2%。方法快速簡(jiǎn)便，靈敏度高，重復(fù)性好，已應(yīng)用于乳粉中左旋肉堿的測(cè)定[2]。

李秀英等利用微波消解技術(shù)對(duì)乳粉樣品進(jìn)行水解，釋放結(jié)合態(tài)的膽堿和左旋肉堿，優(yōu)化乳粉中膽堿和左旋肉堿的微波水解快速提取方法以及超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)的條件參數(shù)。本方法分析速度快、靈敏度高、重復(fù)性好，與現(xiàn)有技術(shù)對(duì)比，該方法通過(guò)微波技術(shù)輔助水解，縮短了樣品處理的時(shí)間，適用于乳粉中的膽堿和左旋肉堿的檢測(cè)[3]。

宋周虎等建立一種離子對(duì)高效液相色譜方法，簡(jiǎn)便、快速檢測(cè)減肥類保健食品中左旋肉堿含量。方法：采用ODS柱進(jìn)行分離，以40mmol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液－乙腈（95∶5）為流動(dòng)相，流速：0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm 定量管進(jìn)樣20 μL。結(jié)論：方法簡(jiǎn)便、快速，可用于含左旋肉堿保健食品的含量檢測(cè)[4]。

莫紫梅建立了高效液相色譜測(cè)定口服液中左旋肉堿含量的方法。方法：樣品經(jīng)鹽酸溶液超聲提取，采用C18柱，以辛烷磺酸鈉溶液為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，柱溫：25℃。結(jié)論：本方法快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為口服液類輔助降血脂保健食品的質(zhì)量控制方法[5]。

單藝建立了超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀和分光光度計(jì)測(cè)定乳及乳制品中L-肉堿的方法。超高壓液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法采用 C8（3.5 μm，50 mm ×2.1mm）色譜柱，0.1% 七氟丁酸/水溶液和甲醇作為流動(dòng)相分離樣品，L-肉堿-（甲基-d3）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)用以消除信號(hào)抑制和基質(zhì)干擾，質(zhì)譜采用ESI+電離模式、多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方式進(jìn)行檢測(cè)。分光光度法采用高氯酸沉淀蛋白質(zhì)，堿皂化使溶液中結(jié)合態(tài)的左旋肉堿游離出來(lái)，通過(guò)酶促反應(yīng)，使用分光光度計(jì)間接測(cè)定左旋肉堿。結(jié)果表明：分光光度法的檢出限為 2.0 mg/100 g，回收率在 96.2%～104.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD 在 1.34%～3.69% 。UPLC-MS/MS法的檢出限為2ng/100 g，回收率在97.8%～ 109%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.77%～5.65%。以上2種方法均適用于乳及乳制品中L-肉堿的檢測(cè)，且測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異。UPLC-MS/MS法具有操作簡(jiǎn)便、快速、高效、可控性強(qiáng)等特點(diǎn)，更適用于大量樣品的集中快速檢測(cè)[6]。

2 展望

左旋肉堿因具有多重生理功能，在很多領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。因此，研究左旋肉堿的檢測(cè)方法是十分必要的。分光光度法是檢測(cè)左旋肉堿最常用的方法，但精確度較低。因儀器設(shè)備及分析方法的進(jìn)步與發(fā)展，利用色譜法、質(zhì)譜法等研究方法被廣泛關(guān)注。這些新的檢測(cè)方法具有選擇性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)是操作過(guò)于繁瑣，成本較高。在今后的研究中，優(yōu)化各種檢測(cè)方法，朝方便、快速、量化的方向發(fā)展。