牛奶中四環(huán)素類獸藥殘留的快速檢測(cè)關(guān)鍵技術(shù)應(yīng)用研究

從上世紀(jì)70年代起，養(yǎng)殖戶就開始對(duì)動(dòng)物使用促進(jìn)生長(zhǎng)和催情的獸藥，并且隨著市場(chǎng)需求的不斷增長(zhǎng)，獸藥的使用數(shù)量也持續(xù)不斷地攀升，這就在無意識(shí)的情況下加劇了各產(chǎn)品上的藥物殘留危害。VA、VB的含量在牛乳中占有的比例比較大，在一定程度上這二者可以促進(jìn)人的骨骼生長(zhǎng)，乳制品被廣泛應(yīng)用到人們的日常生活中。而像四環(huán)素等獸藥會(huì)傷害人體健康。所以為了保障人類的健康安全，需要對(duì)人們?nèi)粘Ｉ钚枰氖称愤M(jìn)行更為全面的監(jiān)管，通過快速檢測(cè)方法，以實(shí)現(xiàn)其食品的安全使用。

國(guó)內(nèi)外乳制品快速檢測(cè)方法

目前國(guó)內(nèi)外就乳制品的抗生素快速檢測(cè)方法最常用的是色譜法、免疫法以及微生物法。[1]

色譜法。色譜法是牛奶中抗生素檢測(cè)方面應(yīng)用最廣泛的一種方法，主要是用各組在兩相中的不同分配系數(shù)，讓各組的混合物進(jìn)行分離的。

現(xiàn)在色譜根據(jù)流動(dòng)相與色譜柱的不同，又可分為以下三種：（1）氣相色譜法：可以分離復(fù)雜的多組混合物，主要優(yōu)點(diǎn)在于分析速度快、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣泛。主要應(yīng)用在農(nóng)藥殘留、獸藥殘留和成分的分析等方面。（2）高效液相色譜：氣相色譜法雖然應(yīng)用廣泛，但是不適宜于揮發(fā)性差和發(fā)熱不穩(wěn)定的化合物，而高效液相色譜法，就是能高效自動(dòng)的色對(duì)譜進(jìn)行分離。（3）色譜-質(zhì)譜聯(lián)用：這是當(dāng)前最重要的分離分析方法之一，聯(lián)合作用各取所長(zhǎng)，能對(duì)復(fù)雜基質(zhì)的多殘留進(jìn)行快速篩選，靈敏度高、適用范圍寬廣。

微生物學(xué)檢測(cè)法：一般可分為三種：（1）微生物抑制法：主要原理是通過使用抗生素從而發(fā)揮對(duì)微生物的生長(zhǎng)抑制作用，進(jìn)而可以計(jì)算出樣品中的抗生素殘留量。（2）微生物受體法：主要包括CHARMI和CHARMII，它可以應(yīng)用在不同基質(zhì)中的抗生素檢測(cè)。（3）酶比色法：主要檢測(cè)對(duì)象是牛奶中的β-內(nèi)酰胺類抗生素。

免疫分析法：就是以抗原-抗體為基礎(chǔ)，將抗體作為生物化學(xué)檢測(cè)器對(duì)化合物、酶等進(jìn)行定性或者定量分析的技術(shù)。比較常見的免疫分析主要包括放射免疫、熒光免疫分析以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等等。放射免疫主要是把放射性物質(zhì)作為標(biāo)記物，它的突出優(yōu)點(diǎn)在于靈敏度高，但是其突出劣勢(shì)就在于對(duì)環(huán)境的損害，從而影響了其應(yīng)用范圍。[2][3]

本文中牛奶的四環(huán)素類獸藥殘留的快速檢測(cè)關(guān)鍵性技術(shù)

本文根據(jù)牛奶中四環(huán)素農(nóng)藥殘留的關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行分析，采用靈敏度最高、精密度最高和比較快速及應(yīng)用最為廣泛的液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行快速研究，通過對(duì)牛乳中的土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素4種抗生素進(jìn)行檢測(cè)，為牛乳中四環(huán)素類抗生素的獸藥殘留分析提供參考。

試驗(yàn)材料及試驗(yàn)方式

試驗(yàn)儀器：H66MC超聲波發(fā)生器：上海醫(yī)療企業(yè)集團(tuán)；旋轉(zhuǎn)儀蒸發(fā)儀：日本EYELA公司；固相萃取柱：賽默飛世爾科技有限公司。

試驗(yàn)試劑：試驗(yàn)試劑主要是純度均超過95%的甲醇、四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素標(biāo)準(zhǔn)品等。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取四環(huán)素、土霉素、金霉素和強(qiáng)力霉素各10mg，純度要求100%。稱取完成后，使用一定量的甲醇與之融合，定容至100ml。然后將儲(chǔ)備液放到-18℃以下的棕色瓶?jī)?nèi)進(jìn)行存儲(chǔ)，存儲(chǔ)的時(shí)間能超過一年。

試樣的制備：從樣品中取出500g并進(jìn)行充分的攪拌，然后將其放入容器之中并進(jìn)行密封，做好標(biāo)記后放入-18℃的環(huán)境內(nèi)進(jìn)行封存。再稱取5g混合試樣用HLB固相萃取柱對(duì)其相應(yīng)的處理，等混合試樣全部從柱內(nèi)流出后，分別進(jìn)行5ml水和5ml甲醛水的順序進(jìn)行淋洗。將壓強(qiáng)持續(xù)控制在2.0kPa內(nèi)，再進(jìn)行減壓，然后再使用容量為10ml的甲醇乙酸乙酯洗脫。[4]

液質(zhì)條件：（1）色譜柱：選取Inertsil C8-3，5μm，150mm×2.1mm(內(nèi)徑)。（2）流動(dòng)相：甲醇乙酸乙酯洗脫。（3）流速：300μL/min。（4）柱溫：30℃。（5）進(jìn)樣量：30μL。（6）質(zhì)譜條件：質(zhì)譜掃描模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)，單位分辨率，霧化氣(NEB)為6.00L/min(氮?dú)?，氣簾氣(CUR)為10.00L/min(氮?dú)?，噴霧電壓(IS)為4500V，去溶劑溫度(TEM)為500℃，去溶劑氣流為7.00L/min(氮?dú)?，碰撞氣(CAD)為 6.00 mL/min(氮?dú)?。

結(jié)果分析

定性測(cè)定：樣品中混合的化合物色譜峰值殘留的時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比較而言波動(dòng)的范圍在2.5%左右。

定量測(cè)定：通過分析實(shí)驗(yàn)中樣品液體中被測(cè)定的四環(huán)素含量的整體情況，選取定峰高相接近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中的標(biāo)準(zhǔn)重構(gòu)離子能在5.07min時(shí)達(dá)到100。）

結(jié)束語

乳制品中四環(huán)素類藥品殘留的快速檢測(cè)方法有很多種，本文選取了最為普遍的液相色譜—質(zhì)譜法進(jìn)行快速檢測(cè)，用試驗(yàn)檢測(cè)的方法分析四環(huán)素類抗生素中的獸藥殘留，實(shí)現(xiàn)其定性檢測(cè)的高效性和定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性。今后還要實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因食品、畜牧類等與人類健康息息相關(guān)的食品和產(chǎn)品進(jìn)行快速檢測(cè)，在推動(dòng)檢測(cè)技術(shù)深入開展的同時(shí)保障食品的安全問題。