液體活檢在頭頸鱗癌中的研究和應(yīng)用

張依楠，李夢(mèng)瑋，李 鑫，徐寒梅

隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)和個(gè)體化治療在腫瘤領(lǐng)域的發(fā)展，出現(xiàn)了采用腫瘤分子生物學(xué)特征進(jìn)行檢測(cè)的需求。液體活檢技術(shù)克服了傳統(tǒng)組織活檢的高侵入性、取樣困難和難以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)等局限性，使腫瘤的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)成為可能。液體活檢技術(shù)以無(wú)創(chuàng)、快捷、可重復(fù)等特點(diǎn)得到了廣泛關(guān)注，在未來(lái)有巨大的發(fā)展?jié)摿?。頭頸鱗癌(head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC)是常見(jiàn)的癌癥之一，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存期。作者對(duì)液體活檢在HNSCC中的研究和應(yīng)用作一綜述。

1 頭頸癌與液體活檢

頭頸部腫瘤是世界上常見(jiàn)的癌癥之一，其中HNSCC占90%以上[1]。頭頸癌包括起源于唇、口腔、鼻腔、副鼻竇、咽和喉等部位的腫瘤。此疾病可使患者產(chǎn)生生理缺陷，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量。不同部位的腫瘤，發(fā)病誘因不盡相同。鼻咽癌主要由Epstein-Barr病毒引起，而口咽癌主要由人類(lèi)乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的HPV-16和HPV-18致癌型感染引起。在全球范圍內(nèi)，HPV-16引起的口腔癌發(fā)病率最高的國(guó)家是中國(guó)(81%)，然后分別是印度(74%)、荷蘭(63%)、西班牙(47%)、英國(guó)(20%)和美國(guó)(20%)[2]。HNSCC的發(fā)病機(jī)制與飲酒、吸煙和高危HPV感染密切相關(guān)，其中吸煙者患病的可能性比不吸煙者高10倍[3]。

乳腺癌的5年相對(duì)生存率為89%，膀胱癌為77%，結(jié)直腸癌為65%,皮膚癌為92%[4]。而頭頸癌患者從診斷出疾病到死亡的中位生存時(shí)間為1～12個(gè)月。患者5年總體生存率為50%左右[1]。頭頸癌的高死亡率與診斷較晚和轉(zhuǎn)移有關(guān)。大多數(shù)患者被診斷為局部晚期疾病，頭頸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移傾向于肺部(66%)、骨骼(22%)、肝臟(10%)、皮膚(>2%)、縱隔(>2%)和骨髓(>2%)等[2]。

成像技術(shù)和腫瘤組織活檢是目前頭頸癌診斷的常用方法。其中成像技術(shù)包括磁共振成像、電子計(jì)算機(jī)斷層掃描以及正電子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層顯像等。對(duì)于難以進(jìn)入的部位，通常使用超聲引導(dǎo)的細(xì)針抽吸器對(duì)該部位進(jìn)行取樣[5]?；颊咧饕捎檬中g(shù)、放療和化療相結(jié)合的治療方式。然而現(xiàn)有的圖像技術(shù)仍不能滿(mǎn)足對(duì)腫瘤早期轉(zhuǎn)移和預(yù)后監(jiān)測(cè)的需求；腫瘤組織活檢存在著取樣困難、只有一個(gè)樣本無(wú)法顧及腫瘤異質(zhì)性、多次取樣成本較高、容易造成患者面部毀容等缺陷。因此，迫切需要一種侵入性較小的檢測(cè)方式來(lái)監(jiān)測(cè)患者腫瘤的發(fā)生和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，從而提高患者的生存率。

液體活檢是指用體液樣本代替腫瘤組織進(jìn)行病理學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等方面的檢測(cè)，從而獲取疾病信息，幫助疾病的診斷和治療。液體活檢的檢測(cè)對(duì)象包括血液、唾液等體液中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells，CTCs)、循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA，ctDNA)、腫瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體等。液體活檢具有微創(chuàng)、自動(dòng)化完成、可重復(fù)、減小腫瘤異質(zhì)性干擾等優(yōu)點(diǎn)[6-8]。

2 CTCs與HNSCC

1869年，Ashworth[9]首次發(fā)現(xiàn)了腫瘤患者體內(nèi)存在CTCs，他在血液中檢測(cè)到了形態(tài)異常的細(xì)胞，并認(rèn)為它們來(lái)自腫瘤組織，因?yàn)樗鼈兣c實(shí)體腫瘤細(xì)胞具有相同的形態(tài)特征。CTCs是來(lái)源于腫瘤組織，可通過(guò)主動(dòng)脫落或被動(dòng)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程脫落后進(jìn)入血液循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞。大部分CTCs被機(jī)械因素和免疫系統(tǒng)破壞，只有極少部分的CTCs存活下來(lái)進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)[10]。進(jìn)入血液循環(huán)的未被清除的腫瘤細(xì)胞通過(guò)遷移、粘附、相互聚集形成微小癌栓，并在一定條件下發(fā)展為轉(zhuǎn)移灶[11]。CTCs是惡性腫瘤患者出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要原因，也是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的重要因素[12]。CTCs與腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)性越來(lái)越受到人們的關(guān)注。

2.1 CTCs及其檢測(cè) 1 mL的血液攜帶大約10億紅細(xì)胞、700萬(wàn)白細(xì)胞和2.95億血小板[13]。這對(duì)CTCs檢測(cè)技術(shù)的靈敏度和精確度提出了很高的要求?，F(xiàn)有多種檢測(cè)CTCs的方法，包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)、流式細(xì)胞術(shù)、微流控芯片、免疫磁性富集法和激光掃描細(xì)胞術(shù)等。

一種廣泛使用的CTCs檢測(cè)方法是利用細(xì)胞標(biāo)志物來(lái)識(shí)別。基于此原理，科學(xué)家研究出了CellSearch系統(tǒng)[14]。該方法將腫瘤細(xì)胞固定并富集在磁珠上，隨后通過(guò)熒光染料標(biāo)記細(xì)胞核，具有EpCAM+、CK+、DAPI+、CD45-的細(xì)胞被界定為CTCs。CellSearch系統(tǒng)自動(dòng)化程度較高、可同時(shí)處理多個(gè)樣本，并且將免疫熒光標(biāo)記與免疫磁珠分選富集技術(shù)結(jié)合在一起，有較高的敏感性、可重復(fù)性及特異性[15-16]。2004年，此系統(tǒng)被美國(guó)食品和藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)用于臨床，是一種標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)方法。該方法已開(kāi)始用于檢測(cè)轉(zhuǎn)移性乳腺癌、結(jié)直腸癌及前列腺癌患者的CTCs[14]。已有CellSearch系統(tǒng)應(yīng)用于頭頸癌相關(guān)研究的報(bào)道，EpCAM在口咽癌和喉癌中的表達(dá)率為22%～75%，在唾液腺癌中的表達(dá)率為83%～100%。CellSearch系統(tǒng)能夠以EpCAM陽(yáng)性細(xì)胞的免疫磁性富集為基礎(chǔ)從血液中分離頭頸癌細(xì)胞[15-16]。

Morgan等[17]采用了一種新方法，使用表面增強(qiáng)拉曼光譜散射(surface-enhanced Raman scattering，SERS)納米技術(shù)在白細(xì)胞存在的情況下檢測(cè)目標(biāo)CTCs。其原理是使用帶有表皮生長(zhǎng)因子肽的SERS納米粒子作為靶向配體，來(lái)檢測(cè)在幾乎所有的HNSCC中都有表達(dá)的表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)，這使檢測(cè)的成功率大大提高。SERS技術(shù)獨(dú)特的檢測(cè)模式，使我們省去了繁瑣的分離純化過(guò)程，實(shí)現(xiàn)了精準(zhǔn)檢測(cè)。

2.2 CTCs在HNSCC診療中的應(yīng)用 Morgan等[17]采用SERS納米粒子檢測(cè)HNSCC患者外周血中的CTCs，發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移性疾病進(jìn)展的最佳臨界點(diǎn)是675CTCs/7.5 mL外周血。CTCs數(shù)量≤675時(shí)，5年無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存為89%；而CTCs數(shù)量>675時(shí)，5年無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存為71.4%。Jatana等[18]對(duì)48例HNSCC患者研究發(fā)現(xiàn)，未檢測(cè)到CTCs的患者的無(wú)病生存期顯著高于對(duì)照組(P=0.01)；所檢出的CTCs越多，無(wú)病生存期越差(P=0.04)。然而，Buglione等[19]在一些癌癥中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)CTCs的診斷與患者的生存或腫瘤復(fù)發(fā)之間的相關(guān)性。Van de Stolpe等[20]發(fā)現(xiàn)CTCs實(shí)際上是高度異質(zhì)性的，僅用CTCs計(jì)數(shù)來(lái)評(píng)估疾病的預(yù)后是不準(zhǔn)確的。而研究具有侵襲性特征的CTCs亞群則具有重要的臨床意義。

環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、血管新生和侵襲能力，抑制細(xì)胞凋亡等方面發(fā)揮著重要作用[21]。研究表明，鼻咽癌患者治療后CTCs中COX-2的表達(dá)與治療不良反應(yīng)、更高的腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。如果患者治療后檢測(cè)出CTCs中表達(dá)COX-2，則為預(yù)后總生存期(overall survival，OS)和無(wú)進(jìn)展生存期(progression-free survival，PFS)較低。根據(jù)COX-2的表達(dá)情況來(lái)積極調(diào)整臨床治療方案，從而提高鼻咽癌患者生存率[22]。

平足蛋白(podoplanin，PDPN)與EpCAM在CTCs中的表達(dá)是HNSCC的預(yù)后因素之一。Hsieh等[23]隨訪HNSCC患者6.6～18.5個(gè)月后發(fā)現(xiàn)，若PDPN+/EpCAM+-CTCs>20%是HNSCC患者在6個(gè)月內(nèi)死亡的重要預(yù)后因素(P=0.011)，與不良PFS(P=0.016)和OS(P=0.015)相關(guān)。PDPN+/EpCAM+-CTCs比率，在臨床上有一定的參考價(jià)值。

Strati等[24]研究發(fā)現(xiàn)，HNSCC患者在放化療治療結(jié)束時(shí)，CTCs過(guò)度表達(dá)程序性細(xì)胞死亡蛋白配體-1(programmed death-ligand 1，PD-L1)的患者PFS(P=0.001)和OS較低(P<0.001)。多變量分析顯示，治療結(jié)束時(shí)PD-L1過(guò)度表達(dá)是PFS和OS的獨(dú)立預(yù)后因素。

3 ctDNA與HNSCC

腫瘤細(xì)胞凋亡或壞死后將ctDNA釋放到血液中[25]。ctDNA主要來(lái)源于原發(fā)性腫瘤、CTCs、微轉(zhuǎn)移灶及轉(zhuǎn)移灶。ctDNA通過(guò)肝臟、腎臟等快速清除，半衰期從16 min到數(shù)小時(shí)，雖然這帶來(lái)檢測(cè)上的挑戰(zhàn)，但是能夠反映腫瘤的實(shí)時(shí)變化狀態(tài)。一些ctDNA通過(guò)與蛋白結(jié)合的形式存在，從而減少了血漿核酸酶對(duì)ctDNA的作用，使其避免被快速降解。ctDNA包含與其同源腫瘤細(xì)胞相同的基因缺陷，例如點(diǎn)突變、基因重組甚至基因拷貝數(shù)的變異等[26]。ctDNA的研究主要是其作為非侵襲性標(biāo)志物的可能性，以及其表達(dá)水平與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[27]。ctDNA水平與腫瘤負(fù)荷程度呈正相關(guān)，這在腫瘤檢測(cè)中得到了很好的應(yīng)用[28]。

3.1 ctDNA及其檢測(cè) 由于ctDNA濃度低而且高度碎片化，因此，要盡量提高分離和富集效率。從血漿中分離和富集ctDNA的方法有吸附柱法和磁珠法。ctDNA檢測(cè)主要利用ctDNA突變基因和ctDNA的甲基化[29]。隨著二代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，ctDNA檢測(cè)和分析方法發(fā)生了巨大變化。用于分析ctDNA的主要方法是通過(guò)PCR擴(kuò)增ctDNA基因靶標(biāo)，然后進(jìn)行下游分析。此外有多種方法用于點(diǎn)突變的靈敏檢測(cè)，包括實(shí)時(shí)定量PCR，數(shù)字液滴PCR和Sanger測(cè)序等。ctDNA的甲基化檢測(cè)方法較多，包括高效液相色譜法、甲基化特異性PCR、甲基化間位點(diǎn)擴(kuò)增等[30]。

Wang等[31]對(duì)47例HNSCC患者的研究，發(fā)現(xiàn)87%的患者能夠檢測(cè)到具有腫瘤特異性點(diǎn)突變的血漿ctDNA。血漿ctDNA檢出率在不同部位腫瘤之間無(wú)顯著性差異(口腔80%、口咽91%、喉86%和下咽100%)。而唾液ctDNA檢出率，口腔腫瘤患者(100%)與其他部位腫瘤患者(47%～70%)差異顯著。唾液優(yōu)先富集來(lái)自口腔腫瘤的ctDNA，而血漿則富集來(lái)自各個(gè)部位的ctDNA。當(dāng)結(jié)合血漿和唾液中脫落的DNA片段檢測(cè)結(jié)果時(shí)，診斷靈敏度提高到96%。將血漿和唾液ctDNA檢測(cè)結(jié)合起來(lái)是提高檢測(cè)靈敏度的有效策略。

3.2 ctDNA在HNSCC診療中的應(yīng)用 目前已發(fā)現(xiàn)一些HNSCC唾液和血漿ctDNA的生物標(biāo)志物，如TP53、PIK3CA、FBXW7、CDKN2A等[32]。Mazurek等[33]發(fā)現(xiàn)ctDNA濃度、淋巴結(jié)狀態(tài)(N0-1對(duì)N2-3)、分期(Ⅰ-Ⅲ對(duì)Ⅳ)和年齡(<63和>63)之間存在顯著相關(guān)性。

ctDNA檢測(cè)可發(fā)現(xiàn)患者攜帶的腫瘤相關(guān)單核苷酸變異、拷貝數(shù)改變及結(jié)構(gòu)變異等遺傳學(xué)改變。Mydlarz等[34]評(píng)估了來(lái)自100名HNSCC患者和50名健康體檢者血清DNA甲基化的水平。在10%HNSCC患者的血清中鑒定出內(nèi)皮素受體B基因高甲基化。血清內(nèi)皮素受體B基因高甲基化是高度特異性但不敏感的HNSCC血清生物標(biāo)志物。Schr?ck等[35]通過(guò)對(duì)141名HNSCC患者血漿中的SHOX2和SEPTIN9 DNA甲基化情況進(jìn)行量化監(jiān)控，發(fā)現(xiàn)來(lái)自血漿的ctDNA中SHOX2和SEPTIN9 DNA甲基化水平是臨床上有價(jià)值的生物標(biāo)志物，敏感性52%、特異性95%。

ctDNA檢測(cè)可用于疾病的早期診斷和疾病復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)。在一項(xiàng)對(duì)47名HNSCC患者的研究中，Wang等[31]發(fā)現(xiàn)可檢測(cè)到口腔癌患者腫瘤產(chǎn)生的ctDNA，并且75%的口腔癌患者處于癌癥的早期階段(Ⅰ或Ⅱ)；腫瘤的盡早診斷可以為臨床決策提供依據(jù)，提高患者的生存率；收集了9例HNSCC患者的術(shù)后治療樣本，5例ctDNA陰性患者平均隨訪12個(gè)月均無(wú)復(fù)發(fā)，3例ctDNA陽(yáng)性患者發(fā)生了疾病復(fù)發(fā)；與臨床放射學(xué)檢查相比，血漿ctDNA檢測(cè)能夠幫助醫(yī)生更早發(fā)現(xiàn)疾病復(fù)發(fā)。

4 外泌體與HNSCC

外泌體發(fā)現(xiàn)并命名于1986年[36]。外泌體是直徑30～100 nm的囊泡，與質(zhì)膜融合后釋放到細(xì)胞外環(huán)境中。外泌體包含多種蛋白質(zhì)、mRNAs和miRNAs。外泌體被認(rèn)為具有多種功能，能夠與細(xì)胞微環(huán)境相互作用，參與了信號(hào)傳遞、細(xì)胞募集、免疫應(yīng)答和遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)移等多種生理過(guò)程，是一種重要的細(xì)胞間物質(zhì)和信息交流工具[37]。外泌體可由機(jī)體中的多種細(xì)胞分泌，并廣泛分布于唾液、血漿和乳汁等體液中[38-39]。腫瘤細(xì)胞分泌大量外泌體，來(lái)與周?chē)|(zhì)組織溝通，激活增殖和血管生成途徑，參與轉(zhuǎn)移前部位的形成，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。因此，外泌體是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，目前被認(rèn)為是促進(jìn)腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移的主要因素之一[37]。

4.1 外泌體分離及其檢測(cè) 從細(xì)胞培養(yǎng)上清液和不同體液中分離并富集外泌體有多種方法[40]。首先，從體液或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中通過(guò)2 000 r/min離心去除死細(xì)胞；然后，在10 000 r/min離心時(shí)去除細(xì)胞碎片；接著，用含有外泌體的上清液通過(guò)200 nm的過(guò)濾器將所有尺寸在200 nm以上的較大粒子分離開(kāi)來(lái)；最后，進(jìn)一步分離純化外泌體，如：超速離心、等密度離心、免疫親和分離、尺寸排阻色譜等[41]。超速離心法以沉降系數(shù)為基礎(chǔ)，轉(zhuǎn)速大于100 000 r/min，分離出外泌體，適用于低成本大量樣品的分離[42]。密度梯度離心采用蔗糖等梯度介質(zhì)分離外泌體，為蛋白質(zhì)組學(xué)等分析提供了優(yōu)質(zhì)材料[41]。

分離后的外泌體可以采用多種分析方法，如：透射電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、Western Blot等進(jìn)行完整性、大小、密度、已知陽(yáng)性標(biāo)記等方面的檢測(cè)[43]。Sharma等[44]利用一種新的、超靈敏的原子力顯微鏡對(duì)人唾液外泌體進(jìn)行了結(jié)構(gòu)力學(xué)和生化表征研究。

4.2 外泌體在HNSCC診療中的應(yīng)用 外泌體在免疫抑制和檢測(cè)癌癥進(jìn)程中發(fā)揮著重要的作用。Theodoraki等[45]從HNSCC患者血漿中分離出了攜帶PD-L1的并可以抑制T細(xì)胞功能的外泌體。與疾病早期患者相比，疾病晚期患者血漿中有較高的PD-L1+外泌體水平，并且抑制CD8+T細(xì)胞活化的能力更強(qiáng)。外泌體攜帶的PD-L1水平與HNSCC患者的疾病進(jìn)程、分期及淋巴結(jié)狀況有關(guān)，是反映HNSCC患者疾病和免疫活動(dòng)的重要指標(biāo)。

外泌體所攜帶的miRNA也被用于HNSCC的診斷中。Manikandan等[46]比較不同疾病分期的口腔鱗癌患者和口腔良性腫瘤患者血漿中5種外泌體miRNA表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)早期、晚期口腔鱗癌患者外泌體中miR-29b、miR-142-3p、miR-144、miR-203及miR-223表達(dá)水平之間有顯著差異，表明外泌體miRNA的表達(dá)水平與口腔鱗癌分期有關(guān)。

外泌體miRNAs可成為HNSCC預(yù)后的生物標(biāo)志物。Ye等[47]研究發(fā)現(xiàn)外泌體miR-24-3p通過(guò)靶向成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子11阻礙T細(xì)胞功能，并且可以作為鼻咽癌的潛在預(yù)后生物標(biāo)志物。這些研究證明外泌體miRNAs在未來(lái)可作為癌癥診治的一種有價(jià)值的工具。

Sanada等[48]分析了36例HNSCC患者和7名正常人的血清樣本中外泌體LOXL2蛋白的水平，與健康對(duì)照相比，HNSCC患者的平均LOXL2水平高出9倍，統(tǒng)計(jì)分析顯示血清外泌體LOXL2水平升高與HNSCC之間存在相關(guān)性，表明LOXL2有可能成為HNSCC的潛在的治療靶標(biāo)。

此外，腫瘤微環(huán)境中外泌體能夠誘導(dǎo)周?chē)[瘤細(xì)胞增強(qiáng)耐藥能力。例如，耐受順鉑的口腔鱗癌細(xì)胞OSC-19-R能產(chǎn)生大量攜帶P糖蛋白的外泌體。而P糖蛋白是腫瘤細(xì)胞耐藥基因MDR1的表達(dá)產(chǎn)物，可與抗癌藥物結(jié)合，并將藥物從細(xì)胞內(nèi)泵出細(xì)胞外，從而降低腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥[49]。

5 結(jié)語(yǔ)

隨著經(jīng)濟(jì)和醫(yī)療水平不斷發(fā)展，人們對(duì)疾病的診斷和治療提出了更高的要求。傳統(tǒng)腫瘤組織活檢標(biāo)本檢測(cè)為侵入性操作，具有操作復(fù)雜、患者痛苦、價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)。而液體活檢與傳統(tǒng)檢查方法相比，創(chuàng)傷小、易被患者接受，在腫瘤早期診斷、治療監(jiān)測(cè)、復(fù)發(fā)預(yù)后等方面有著不可替代的優(yōu)勢(shì)。

但液體活檢仍然存在一些局限性。例如，CTCs豐度低，需要進(jìn)一步提高檢測(cè)的靈敏度；ctDNA僅含有腫瘤基因組的信息；外泌體檢測(cè)時(shí)容易受到其他囊泡的干擾，需要完善分離鑒定技術(shù)；液體活檢缺乏統(tǒng)一的分離檢測(cè)和分析標(biāo)準(zhǔn)等[50]。液體活檢技術(shù)雖然應(yīng)用前景廣泛，但目前尚不能很好地應(yīng)用于HNSCC的臨床實(shí)踐當(dāng)中[51]。因此，要將液體活檢與臨床實(shí)踐緊密結(jié)合，通過(guò)大規(guī)模臨床研究來(lái)驗(yàn)證其用于臨床常規(guī)篩查的實(shí)用性，并建立癌癥患者的新型標(biāo)志物樣本數(shù)據(jù)庫(kù)[52]。隨著檢測(cè)技術(shù)的成熟和診斷標(biāo)準(zhǔn)的建立，液體活檢有望應(yīng)用于更多種類(lèi)疾病的全面檢測(cè)。例如，分離出來(lái)的血漿可以進(jìn)行ctDNA或RNA的檢測(cè)，分離出來(lái)的病原細(xì)胞或白細(xì)胞可以進(jìn)行細(xì)胞類(lèi)型的鑒定以及細(xì)胞所攜帶的各種生物組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等信息的檢測(cè)。通過(guò)對(duì)多種檢測(cè)結(jié)果的綜合分析，描繪出一個(gè)完整的疾病信息圖譜。隨著技術(shù)的成熟和診斷標(biāo)準(zhǔn)的建立和優(yōu)化，液體活檢在HNSCC診治中將具有更廣泛的應(yīng)用前景。