miRNA對(duì)甲狀腺癌診治各階段作用的研究進(jìn)展*

苗雅昕 綜述，陳萬(wàn)志 審校

330031 南昌，南昌大學(xué) 江西醫(yī)學(xué)院(苗雅昕)；330006 南昌，南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 甲狀腺外科(陳萬(wàn)志)

甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，2015年全球發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌567 000例，占各部位惡性腫瘤總數(shù)的3.1%，發(fā)病率居第九位，其中女性患病率比男性高3倍，約占女性各部位惡性腫瘤總數(shù)的5.1%，發(fā)病率居第五位[1]。中國(guó)國(guó)家癌癥中心2019年發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，2015年我國(guó)甲狀腺癌女性發(fā)病率達(dá)8.49%，居女性惡性腫瘤發(fā)病率第四位[2]。另?yè)?jù)該機(jī)構(gòu)2015年發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，甲狀腺癌為30歲以下女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤[3]。90%以上的甲狀腺癌為分化型甲狀腺癌，且以甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)為主，另外還有分化型甲狀腺癌中的濾泡樣癌，以及未分化型甲狀腺癌(anaplastic thyroid carcinoma，ATC)以及甲狀腺髓樣癌(medullary thyroid carcinoma，MTC)等類型。盡管流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示，與較高的發(fā)病率相比其死亡率相對(duì)較低，但延遲確診、治療不規(guī)范等因素也會(huì)導(dǎo)致病情的加重、反復(fù)或轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后和生活質(zhì)量。因此，如何合理規(guī)范地改進(jìn)診療及建立個(gè)性化治療過(guò)程中的手段及方案就顯得尤為重要。近年來(lái)，針對(duì)分子標(biāo)記物制作個(gè)性化診療方案日益成為研究熱點(diǎn)，而其中以針對(duì)miRNA的研究較為集中。越來(lái)越多的研究證實(shí)miRNA在各類甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展、輔助診斷、治療以及預(yù)后等各方面都可作為重要的分子標(biāo)記物發(fā)揮作用。

miRNA是一種高度保守的單鏈小分子非編碼RNA，約21～23bp，具有轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因表達(dá)的功能。人類miRNAs雖僅占全基因組的1%，但卻調(diào)控著約30%的人類基因。miRNA通過(guò)與信使RNA(mRNA)的3’非編碼區(qū)(3’-UTR)結(jié)合，致使其降解或翻譯受阻，進(jìn)而對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行負(fù)性調(diào)控。正是miRNA對(duì)靶基因的調(diào)控作用，使之在惡性腫瘤的發(fā)展各階段及診治各步驟發(fā)揮作用。此外，競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA假說(shuō)(ceRNA假說(shuō))的提出將miRNA與具有廣泛的生物學(xué)活性，尤其在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和致瘤性等方面都發(fā)揮著重要作用的長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)聯(lián)系在了一起[4]。近年來(lái)許多研究表明LncRNA在調(diào)節(jié)甲狀腺癌細(xì)胞的各種生化活性，在腫瘤發(fā)生、血管生成、增殖、遷移、凋亡和分化等方面發(fā)揮重要作用[5]。本文將對(duì)miRNA與甲狀腺癌的相關(guān)進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為進(jìn)一步的研究提供理論指導(dǎo)。

1 miRNA與分化型甲狀腺癌

1.1 miRNA與PTC

1.1.1 miRNA與PTC的發(fā)生發(fā)展 MAPK通路改變是甲狀腺癌中最常見(jiàn)的分子生物學(xué)改變，約70%的甲狀腺癌是由激活該通路的突變引起的[6]。在甲狀腺癌中處于激活狀態(tài)的BRAF、RAS和RET-PTC等融合基因的突變可引起MAPK信號(hào)通路激活。因該通路控制著多種重要的細(xì)胞過(guò)程，包括細(xì)胞的增殖、分化、運(yùn)動(dòng)以及凋亡等，故融合基因突變導(dǎo)致的過(guò)度激活可造成細(xì)胞異常分裂、增殖，促進(jìn)腫瘤的形成。現(xiàn)有研究表明miRNA與激活該通路相關(guān)基因的突變具很強(qiáng)的相關(guān)性。Zarkesh等[7]發(fā)現(xiàn)在PTC組織和通過(guò)細(xì)針穿刺活檢(fine needle aspiration,FNA)檢查懷疑的PTC組織中，BRAF表達(dá)產(chǎn)物BRAFV600E的表達(dá)頻率分別為41.1%和36.8%，并檢測(cè)出miR-222、miR-181b、miR-214在PTC組織、B-CAPA細(xì)胞系及FNA活檢組織中均表現(xiàn)為明顯表達(dá)上調(diào)。Titov等[8]的研究發(fā)現(xiàn)，miR-146b、miR-21、miR-221、miR-222、miR-375、miR-199b這6種miRNA的表達(dá)在BRAFV600E表達(dá)陽(yáng)性的PTC組織中與BRAFV600E表達(dá)陰性的組織中明顯不同，且miR-146b、miR-21、miR-221、miR-222在所有實(shí)驗(yàn)PTC樣本中均表現(xiàn)為表達(dá)上調(diào)。還有研究結(jié)果證實(shí)，miR-9[9]、miR-9-5p[10]、miR-150-5p[11]都可通過(guò)調(diào)節(jié)BRAF的表達(dá)來(lái)影響甲狀腺細(xì)胞的增殖和凋亡，從而參與PTC的形成過(guò)程。另外，Liu等[12]發(fā)現(xiàn)miR-4728過(guò)表達(dá)可抑制RAS的正向調(diào)節(jié)因子SOS1的mRNA水平，從而降低MAPK信號(hào)通路活性。Hong等[13]發(fā)現(xiàn)miR-20b可通過(guò)靶向作用于SOS1和ERK2來(lái)抑制MAPK信號(hào)通路活性。Shen等[14]還發(fā)現(xiàn)miR-106a可直接靶向控制RARB而調(diào)控MAPK，進(jìn)一步作用于PTC發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

PI3K-AKT信號(hào)通路是生物體內(nèi)重要的細(xì)胞信號(hào)通路，其在細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育和凋亡都充當(dāng)著重要的角色，同樣也在甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。該通路關(guān)鍵成分有AKT、PI3K、PI3KCA、PTEN及mTOR等，其中PTEN是負(fù)向調(diào)節(jié)AKT基因活性的蛋白激酶，在PI3K-AKT通路中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用，而激活mTOR又可導(dǎo)致PTEN的失活，進(jìn)而激活整個(gè)PI3K-AKT通路。PI3KCA可導(dǎo)致基因突變，但PI3KCA突變作用和PTEN失活狀態(tài)幾乎不存在于PTC中，而在甲狀腺濾泡狀癌(follicular thyroid carcinoma,FTC)和ATC中較為常見(jiàn)。已有研究表明miR-497可通過(guò)調(diào)控AKT3抑制PTC細(xì)胞增殖[15]，miR-21可介導(dǎo)抑制PTEN表達(dá)的AP-1進(jìn)而促進(jìn)PTEN的表達(dá)[16-17]，miR-486也可通過(guò)抑制PTEN的表達(dá)參與增強(qiáng)PI3K-AKT通路的信號(hào)傳導(dǎo)[17-18]。Mardente等[19]發(fā)現(xiàn)miR-221/222可通過(guò)調(diào)節(jié)受AKT途徑調(diào)節(jié)抑制的P27Kip1來(lái)控制PI3K-AKT途徑，從而對(duì)B-CPAP細(xì)胞系的增殖起促進(jìn)作用。此外，Liu等[20]發(fā)現(xiàn)miR-363-3p可直接與編碼PI3KCA的mRNA結(jié)合，降低其mRNA和蛋白產(chǎn)物的表達(dá)，進(jìn)一步抑制了PI3K-AKT信號(hào)通路。Minna等[21]則發(fā)現(xiàn)在PTC中miR-451a可通過(guò)靶向控制AKT/mTOR通路起到對(duì)腫瘤組織的抑制作用。另外，碘和促甲狀腺激素也是甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的重要因素，二者也通過(guò)PI3K-AKT通路對(duì)PTC發(fā)揮作用。

NF-kB信號(hào)通路在生物體內(nèi)作用廣泛，也在腫瘤形成過(guò)程中起重要且復(fù)雜的作用。其可促進(jìn)細(xì)胞因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子等產(chǎn)生共同構(gòu)造腫瘤微環(huán)境，還可增加抗凋亡基因的表達(dá)[22]。它與許多參與MAPK信號(hào)通路的蛋白表達(dá)水平的上調(diào)相關(guān)，如MAPK、BRAFV600E、RAS、RET-PTC等，這些蛋白的異常表達(dá)同樣會(huì)異常激活NF-kB信號(hào)通路，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[23]，故上文中提到的可調(diào)控MAPK信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的miRNA也同樣會(huì)對(duì)NF-kB通路產(chǎn)生作用，如miR-146、miR-221、miR-222等。此外，PTEN可抑制NF-kB通路的異常激活，因此PI3K-AKT信號(hào)通路的相關(guān)改變可抑制PTEN表達(dá)的miRNA異常表達(dá)，也可激活NF-kB信號(hào)通路，為甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展提供有利環(huán)境[24]。與NF-kB通路調(diào)節(jié)情況相似的還有RASSF1-MST1-FOXO3信號(hào)通路，它既受到BRAFV600E的直接調(diào)節(jié)[24]，其中的FOXO3又可受PI3K突變介導(dǎo)，此通路已被證實(shí)是介導(dǎo)甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展的重要通路之一[25-26]。

miRNA除通過(guò)上述常見(jiàn)相關(guān)信號(hào)通路參與調(diào)控PTC的發(fā)生發(fā)展外，還可通過(guò)調(diào)控其他信號(hào)通路或直接調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)對(duì)PTC的發(fā)生發(fā)展起調(diào)控作用。Song等[27]發(fā)現(xiàn)miR-96可能在PTC中通過(guò)抑制FOXO1和調(diào)節(jié)AKT/FOXO1/Bim通路發(fā)揮致癌作用；另有研究結(jié)果顯示miR-23b和miR-29b通過(guò)調(diào)控SMAD3[28]、miR-146b通過(guò)調(diào)控SMAD4[29]及miR-663[30]通過(guò)調(diào)節(jié)TGFβ通路對(duì)PTC發(fā)生發(fā)展過(guò)程起調(diào)節(jié)作用。Xue等[31]和Qiu等[32]分別發(fā)現(xiàn)miR-557和miR-613可通過(guò)靶向作用于SphK2抑制PTC的增殖過(guò)程，Wen等[33]發(fā)現(xiàn)PTC細(xì)胞中的miR-126的上調(diào)可通過(guò)靶向LRP6抑制細(xì)胞增殖，Yi等[34]發(fā)現(xiàn)miR-1270可能通過(guò)自身表達(dá)的下調(diào)調(diào)控SCAI抑制PTC細(xì)胞的體內(nèi)和體外發(fā)育，Sun等[35]發(fā)現(xiàn)miR-144可通過(guò)調(diào)控E2F8在體內(nèi)外調(diào)節(jié)PTC細(xì)胞的增殖。Wang等[36]發(fā)現(xiàn)LncRNA PTCSC3可吸收miR-574-5p，與之控制的靶基因形成PTCSC3-miR-574-5p-Wnt/β-catenin信號(hào)調(diào)節(jié)通路介導(dǎo)PTC-1細(xì)胞的增殖和遷移，表明Lnc RNA也會(huì)通過(guò)調(diào)節(jié)miRNA表達(dá)對(duì)PTC的發(fā)生發(fā)展起到作用。

1.1.2 miRNA與PTC的臨床病理特點(diǎn) 許多學(xué)者通過(guò)微序列分析和熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈鎖反應(yīng)(quantitative reverse transcription polymerasc chain reaction,RT-qPCR)等方法對(duì)不同PTC患者血清中的miRNA水平進(jìn)行分析后，發(fā)現(xiàn)血清內(nèi)不同miRNA的表達(dá)量可導(dǎo)致患者的臨床病理表型出現(xiàn)差異，如淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤直徑及有無(wú)局部侵犯等。雖然PTC分化程度較好，10年生存率可達(dá)90%以上，但早期侵襲性臨床病理特征仍可對(duì)患者的生活質(zhì)量造成一定影響。2015年，Lee等[37]研究了良性甲狀腺病變(n=19)，乳頭狀甲狀腺患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(n=45)和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(n=25)的韓國(guó)人血漿樣本中的miRNA譜，發(fā)現(xiàn)與良性組相比，PTC患者miR-146b和miR-155的表達(dá)顯著增加，miR-221/222表達(dá)也較高但差異并不顯著，并且其還發(fā)現(xiàn)miR-146b、miR-155和miR-222的過(guò)度表達(dá)與腫瘤的大小相關(guān)。Sun等[38]發(fā)現(xiàn)，miR-146a也與PTC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、局部侵犯和多灶性密切相關(guān)。Liu等[39]發(fā)現(xiàn)miR-214在PTC組織中表達(dá)下調(diào)，而與對(duì)照組相比，模擬miR-214高表達(dá)的組織遷移能力下降，而敲低組則顯著增加，表明miR-124可降低PTC細(xì)胞遷移和侵襲，抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。Todorovic等[40]對(duì)比PTC與非腫瘤組織，發(fā)現(xiàn)25%的miR-92a過(guò)表達(dá)，75%表達(dá)降低，且其表達(dá)水平下降具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，miR-92a表達(dá)與VHL的表達(dá)水平相關(guān)，可能與PTC的侵襲性相關(guān)。Peng等[41]對(duì)比了PTC與甲狀腺良性結(jié)節(jié)的miRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)與惡性樣本相比，miR-30a-3p在良性樣本中表達(dá)下降，而miR-146b-5P和miR-199b-5p過(guò)表達(dá)；在腫瘤直徑小于1cm的樣品中miR-30a-3p、miR-199b-5p下調(diào)，miR-146b-5P上調(diào)，在大于1cm的樣品中也表現(xiàn)出相同的趨勢(shì)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者miR-199b-5P表達(dá)上調(diào)，故miR-199b-5p或可用于預(yù)測(cè)PTC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

Hu等[42]對(duì)比了266例PTC患者、280例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和300例健康組織的miRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，PTC組織中miR-940、miR-15a和miR-16的表達(dá)量明顯低于另兩組納入統(tǒng)計(jì)的組織，且雙側(cè)腫瘤PTC組織中miR-940、miR-15a表達(dá)水平低于單側(cè)腫瘤，多中心PTC組織中miR-15a、miR-16表達(dá)水平低于單中心腫瘤，錐體外侵襲、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的PTC組織中三者表達(dá)水平與陰性組相比均降低；IL-23表達(dá)水平上升，且在雙側(cè)腫瘤組織、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的組織中表達(dá)量更高，揭示了這三種miRNA與PTC臨床病理特點(diǎn)之間的關(guān)系。

已有大量研究結(jié)果表明miRNA與PTC的各種臨床病理特點(diǎn)有關(guān)，但僅有部分miRNA已被證實(shí)直接參與一些病理特點(diǎn)的形成且已有研究較為詳細(xì)的機(jī)制及相關(guān)通路關(guān)系，目前臨床上還需miRNA檢查與其他檢查方式配合才能確切的檢測(cè)其臨床病理情況，并針對(duì)其情況給出合適的治療方案及預(yù)后監(jiān)測(cè)方案。

1.1.3 miRNA與PTC的診斷和預(yù)后 流行病學(xué)研究表明，居住在碘充足地區(qū)約5%的女性和1%的男性有可觸及甲狀腺結(jié)節(jié)，然而到60歲時(shí)，一般人群中估計(jì)約50%至少有1個(gè)甲狀腺結(jié)節(jié)[43]，而其中僅有5%～15%的結(jié)節(jié)為惡性[44]。在診斷工作中，首先要進(jìn)行的是測(cè)量血清中的促甲狀腺激素濃度，以區(qū)分出很少為惡性的功能性甲狀腺結(jié)節(jié)。當(dāng)懷疑為非功能性結(jié)節(jié)時(shí)，一般會(huì)行超聲引導(dǎo)下的FNA。然而FNA檢查的準(zhǔn)確性及應(yīng)用范圍有限，且易造成過(guò)度醫(yī)療。PTC患者50%以上均有淋巴結(jié)受累情況，而術(shù)前頸部超聲一般僅能檢查出手術(shù)中發(fā)現(xiàn)的受累淋巴結(jié)的一般數(shù)量。雖然目前FNA仍為臨床上確診甲狀腺癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但在精準(zhǔn)醫(yī)療發(fā)展速度日益加快的今天，尋找更加有效的PTC診斷及術(shù)前檢查的方法顯得尤為重要。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA可作為分子標(biāo)志物參與以胞外囊泡為檢查對(duì)象的液體活檢等新興的臨床診斷方法[45]。

早在2008年，Nikiforova等[46]就對(duì)多種甲狀腺癌進(jìn)行了miRNA分析，提出miR-146b、miR-155、miR-187、miR-197、miR-221、miR-222及miR-224可作為分析癌組織樣本類型的潛在區(qū)別的標(biāo)志物，并對(duì)其研究的62例FNA標(biāo)本進(jìn)行量化分析后得出結(jié)論：當(dāng)至少1種miRNA過(guò)表達(dá)超過(guò)2倍時(shí)，癌癥檢測(cè)的敏感性為100%，特異性為94%，準(zhǔn)確性為95%。Agretti等[47]在141份FNA標(biāo)本中評(píng)價(jià)同一種miRNA的臨床效應(yīng)時(shí)發(fā)現(xiàn)，基于miR-146b、miR-155和miR-221表達(dá)的決策模型檢測(cè)正確性為97.7%(在未確定細(xì)胞學(xué)特征的結(jié)節(jié)中為59%)，可靠性為78.4%。還有研究發(fā)現(xiàn)miR-146b-5p在89%的PTC中高表達(dá)，與之對(duì)照的是其在大多數(shù)FTC、ATC及低分化型甲狀腺癌癥中均未檢測(cè)到這一現(xiàn)象[48]。Qiu等[49]對(duì)比了73例PTC患者的癌組織標(biāo)本與癌旁組織，運(yùn)用半定量RT-PCR檢測(cè)了miR-146a和miR-146b的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)兩者在癌組織中有明顯高表達(dá)，且其表達(dá)水平可能與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示其可能運(yùn)用于PTC的診斷及術(shù)前檢查。

miRNA對(duì)預(yù)后的影響已在多種不同的甲狀腺癌如PTC、甲狀腺低分化癌(poorly differentiated thyroid cancer,PDTC)等中得到研究。如在PDTC中，miR-23b的表達(dá)降低可反映無(wú)復(fù)發(fā)生存率降低，miR-181轉(zhuǎn)錄水平的升高可使濾泡型甲狀腺乳頭狀癌的10年無(wú)復(fù)發(fā)生存率由75%降低至18%。盡管相關(guān)研究都強(qiáng)調(diào)miRNA表達(dá)譜所提示的預(yù)后情況可能比相關(guān)臨床病理特征更加準(zhǔn)確，特別是在不良預(yù)后方面，但相關(guān)研究數(shù)量較少，還需進(jìn)一步研究來(lái)證明其潛在臨床預(yù)后價(jià)值。

1.2 miRNA與甲狀腺濾泡狀癌

FTC發(fā)病率約占分化型甲狀腺癌的12%[44]，但專門(mén)研究miRNA與FTC相關(guān)發(fā)生發(fā)展過(guò)程及病理診斷等各方面的研究仍較少且并未研究足夠深入。2014年，Wojtas等[50]就通過(guò)運(yùn)用芯片對(duì)比了11例FTC及其對(duì)應(yīng)的正常組織中的miR-146b、miR-183、miR-199b的表達(dá)水平并運(yùn)用RT-qPCR進(jìn)行了驗(yàn)證，同時(shí)還運(yùn)用RT-qPCR對(duì)比了miR-221的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)miR-146b、miR-183和miR-221的表達(dá)水平上調(diào)，miR-199b則下調(diào)且均具顯著差異。他們還發(fā)現(xiàn)miR-146b和miR-183是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞遷徙和抑制細(xì)胞凋亡參與FTC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。Hu等[51]則通過(guò)基因芯片技術(shù)廣泛識(shí)別了FTC相關(guān)的miRNA，發(fā)現(xiàn)miR-7-2-3p、miR-7-5p、miR-130b-5p，miR-144-5p、miR-1179和miR-328-3p這6種miRNA表達(dá)上調(diào)，miR-767-5p、miR-663b和miR-137則下調(diào)，并預(yù)測(cè)了這些miRNA的相關(guān)靶基因。Chi等[52]通過(guò)miRNA-mRNA網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)，miR-296-5p、miR-10a、miR-139-5p、miR-452、miR-493、miR-7、miR-137、miR-144和miR-145與相應(yīng)的靶向mRNA之間存在共調(diào)節(jié)關(guān)系，包括TNF受體超家族11b、苯并二氮雜卓受體外周相關(guān)蛋白1、TGF-β受體等，表明miRNA在FTC的發(fā)病機(jī)制、診斷和治療中能發(fā)揮重要作用。Sun等[53]通過(guò)采用RT-qPCR檢測(cè)了42例FTC患者組織，并在轉(zhuǎn)染結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue grouth factor,CTGF)siRNA和miR-199a模擬物或抑制劑的FTC-133細(xì)胞中檢測(cè)其活力及細(xì)胞周期狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)miR-199a-5p在FTC組織中低表達(dá)，且CTGF的mRNA及蛋白表達(dá)量明顯高于正常組織，miR-199a-5p模擬物及CTGFsiRNA也下調(diào)了CTGF在FTC-133細(xì)胞中的表達(dá)，通過(guò)在G0期阻斷細(xì)胞周期降低了其生存水平。而轉(zhuǎn)染miR-199a-5p抑制劑后，G2/M期和S期細(xì)胞比例增加，CTGF的表達(dá)水平增加，細(xì)胞活力增強(qiáng)，表明CTGF是miR-199a-5p的靶基因且與FTC的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。Calabrese等[54]在基礎(chǔ)和過(guò)表達(dá)的條件下對(duì)FTC-133細(xì)胞中的RNA進(jìn)行了RT-PCR分析，發(fā)現(xiàn)miR-19a的表達(dá)顯著降低，且其在過(guò)表達(dá)條件下可誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)學(xué)表型改變，促進(jìn)細(xì)胞增殖和存活，減少凋亡，且還改變了甲狀腺分化和預(yù)后不良的相關(guān)基因的表達(dá)，包括TSHr、Tg、TTF1和Pax8都顯著減少，其中TSHr、Tg、Pax8表現(xiàn)出了時(shí)間差異性。Miao等[55]則通過(guò)RT-PCR對(duì)比了FTC組織及FTC-133細(xì)胞系內(nèi)的miRNA及相關(guān)基因之間的關(guān)系，揭示了miR-4299通過(guò)靶向ST6GAL-NAC4調(diào)控人FTC的侵襲性，且可能還有其他影響，但其分子機(jī)制仍有待研究。Stokowy等[56]還發(fā)現(xiàn),與FNA相比，僅有miR-3529-3p、miR-7-5p在FTC中表達(dá)下調(diào)近3倍，僅有miR-3607-3p和miR-411-5p在FTC中表達(dá)上調(diào)略高于FNA，可用于FTC的鑒別診斷。

2 miRNA與MTC

MTC是一種少見(jiàn)的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，由甲狀腺的C細(xì)胞引起，約占甲狀腺癌的5%，其侵蝕性較強(qiáng)，大部分都表現(xiàn)出淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。該病多發(fā)于50歲以上中老年人且女性居多，散發(fā)性與遺傳性的MTC在miRNA表達(dá)方面存在區(qū)別。雖然miRNA是甲狀腺癌預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)之一，且miRNA已被證實(shí)與MTC的病理過(guò)程相關(guān)，但揭示其在MTC中的作用的文獻(xiàn)仍較為少見(jiàn)。Galuppini等[57]隨訪了130例MTC患者的miR-375表達(dá)水平(104例散發(fā)性和26例家族性)，持續(xù)39個(gè)月，發(fā)現(xiàn)與正常甲狀腺組織相比，所有MTC中miR-375的水平均顯著上調(diào)，且其表達(dá)與腫瘤大小、甲狀腺囊內(nèi)浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)及腫瘤分期密切相關(guān);在隨訪結(jié)束時(shí)僅有10%(13/130)顯示出腫瘤進(jìn)展相關(guān)；此外，他們還發(fā)現(xiàn)miR-375高表達(dá)與預(yù)后最差的患者的結(jié)果密切相關(guān)，表明miR-375在MTC進(jìn)展中起著重要作用。Chen等[58]發(fā)現(xiàn)miR-9-3p在人MTC組織及TT細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)且經(jīng)RT-PCR驗(yàn)證，且miR-9-3p抑制劑明顯抑制了TT細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)展，而其模擬物則抑制了TT細(xì)胞的凋亡，還通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和熒光素酶報(bào)告分析確定膀胱癌相關(guān)蛋白(bladder cancer associated protein,BLCAP)是miR-9-3p的靶點(diǎn)，在TT細(xì)胞中，BLCAP的沉默顯著降低細(xì)胞凋亡水平，且不受miR-9-3p的進(jìn)一步影響，揭示了上調(diào)miR-9-3p通過(guò)靶向作用于BLCAP調(diào)控癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡，在MTC進(jìn)展中發(fā)揮積極作用。Shabani等[59]通過(guò)實(shí)時(shí)PCR技術(shù)分析了30個(gè)MTC樣品的miRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)所有樣品中miR-144和miR-34a表達(dá)均上調(diào)，接受者操作特性曲線分析表明二者在患者體內(nèi)表達(dá)增加具有顯著的預(yù)測(cè)價(jià)值，揭示了miR-144和miR-34a的高表達(dá)可以被認(rèn)為是MTC的生物標(biāo)志物，但未發(fā)現(xiàn)二者和靶基因表達(dá)之間的關(guān)系有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而后該團(tuán)隊(duì)又發(fā)現(xiàn)RET陽(yáng)性MTC患者的miR-144和miR-34a表達(dá)較RET陰性患者顯著增加[60]。Joo等[61]發(fā)現(xiàn)miR-153-3p可特異性調(diào)節(jié)RET表達(dá)，從而阻礙了異種移植MTC的腫瘤生長(zhǎng)，且miR-153-3p與卡博替尼的聯(lián)合治療可引起更大的生長(zhǎng)抑制并可能逆轉(zhuǎn)錄卡博替尼的抗性。另外，Chu等[62]通過(guò)原位雜交發(fā)現(xiàn)其研究的樣本中17個(gè)(44%)的原代MTC中miR-21表現(xiàn)出強(qiáng)表達(dá)，37個(gè)(95%)原代MTC中有LncRNA MALAT1表現(xiàn)為強(qiáng)表達(dá)。原代中miR-21和MALAT1的實(shí)時(shí)PCR表達(dá)顯著高于正常甲狀腺組織，驗(yàn)證了原位雜交中的發(fā)現(xiàn)。SiRNAs實(shí)驗(yàn)顯示MTC衍生細(xì)胞系中miR-21和MALAT1表達(dá)的抑制導(dǎo)致了細(xì)胞增殖和侵襲能力的顯著降低，可調(diào)節(jié)MTC進(jìn)展，揭示了LncRNA參與MTC發(fā)生發(fā)展調(diào)節(jié)的方式。

Mian等[63]對(duì)34例散發(fā)性MTC、6例家族性MTC和2例C細(xì)胞增生癥患者的9種miRNA進(jìn)行RT-qPCR分析和miR-21基因靶點(diǎn)PDCD4的免疫組化表達(dá)，發(fā)現(xiàn)miR-21、miR-127、miR-154、miR-224、miR-323、miR-370、miR-9 、miR-183和miR-375顯著過(guò)表達(dá)，且在散發(fā)性MTC和家族性MTC中，miR-224表達(dá)上調(diào)與淋巴結(jié)陰性、早期診斷等過(guò)程相關(guān)，揭示了miRNA表達(dá)失調(diào)可能是甲狀腺C細(xì)胞癌變的早期表現(xiàn)，miR-224是評(píng)估MTC預(yù)后的可靠生物標(biāo)志物。

3 miRNA與ATC

ATC又稱間變性甲狀腺癌，是甲狀腺癌中惡性程度最高的一種，盡管其發(fā)病率較低，僅占所有甲狀腺癌的5%左右，但其死亡率卻占全部甲狀腺癌死亡率的14%～50%，中位生存期僅為3～5個(gè)月，其中癌癥干細(xì)胞(cancer stem cell, CSC)的存在是ATC復(fù)發(fā)率高的原因之一[64]。近年研究結(jié)果顯示，miRNA在ATC的病理過(guò)程中也起到重要作用。Hebrant等[65]分析了11例ATC患者的mRNA表達(dá)譜，并與miRNA表達(dá)譜進(jìn)行整合，發(fā)現(xiàn)其中4例(36.4%)存在p53突變，2例(18%)存在BRAF突變，1例(10%)存在PIK3CA突變，其中有一個(gè)樣本同時(shí)顯示BRAF和p53突變，且發(fā)現(xiàn)ATC中表現(xiàn)出18種miRNA表達(dá)變化，其中17種下調(diào)，1種上調(diào)，除miR-144外都未在其他腫瘤組織中表現(xiàn)出下調(diào)。Sheng等[64]鑒定了原代ATC細(xì)胞與ATC-CSC之間差異表達(dá)的17種miRNA，發(fā)現(xiàn)其中miR-148a在ATC-CSC中顯著下調(diào)，其過(guò)表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和干細(xì)胞特性喪失，并鑒定INO80為其靶基因。Shao等[66]通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-4295在蛋白水平抑制CDKN1A的表達(dá)，從而促進(jìn)了ATC細(xì)胞的遷移和侵襲，可作為干預(yù)ATC病理過(guò)程的潛在靶點(diǎn)。Aherne等[67]通過(guò)實(shí)時(shí)PCR和Western blot分析了miR-25和miR-222對(duì)甲狀腺良惡性細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)miR-25和miR-222表達(dá)分別在8505C(間變性甲狀腺細(xì)胞系)和Nthyori細(xì)胞中上調(diào)，且發(fā)現(xiàn)二者可直接或間接靶向近100個(gè)功能各異的mRNA，miR-25基因靶點(diǎn)對(duì)參與細(xì)胞黏附的基因有明顯的富集作用。Vosgha等[68]通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)成功轉(zhuǎn)染miR-205載體和空載體的細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)ATC中的miR-205均有顯著的過(guò)表達(dá)，且認(rèn)為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)和ZEB1為其靶點(diǎn)，表明miR-205可以作為靶向VEGF-A的抗血管生成劑，從而影響基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2和MMP9，還可嚴(yán)重抑制VEGF-A的分泌和內(nèi)皮形成能力，miR-205還可降低癌細(xì)胞遷移能力，抑制癌細(xì)胞的侵襲性。還有miR-483-3p、miR-27b-3p、miR-650等許多miRNA通過(guò)靶向相對(duì)應(yīng)的基因或其mRNA來(lái)參與ATC的發(fā)生發(fā)展、病理特征、預(yù)后和耐藥性等各類病理過(guò)程。Wang等[69]發(fā)現(xiàn)LncRNA UCA1可通過(guò)與miR-135a的靶向基因c-myc競(jìng)爭(zhēng)miR-135a的結(jié)合，促進(jìn)ATC細(xì)胞的增殖，可能作為人類ATC治療的潛在靶點(diǎn)。

4 總結(jié)與展望

近年來(lái)針對(duì)miRNA與各類甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展、臨床病理特征、診斷預(yù)后等各個(gè)方面的關(guān)系的研究日漸增加，且已開(kāi)始通過(guò)研究其作用原理聯(lián)系臨床從而開(kāi)發(fā)出miRNA在臨床上的各類應(yīng)用，包括鑒別診斷、治療及預(yù)后監(jiān)控等各個(gè)過(guò)程。但目前此類研究較多都圍繞分化型甲狀腺癌，尤其是PTC的相關(guān)研究已相當(dāng)全面，其他腫瘤相對(duì)較少，希望未來(lái)可以有更多針對(duì)于甲狀腺癌更廣泛種類進(jìn)行研究，以增進(jìn)對(duì)甲狀腺癌的認(rèn)識(shí)，及更全面地運(yùn)用miRNA等生物標(biāo)志物在臨床上造?；颊?，提升其生存率和生活質(zhì)量。

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