OST經(jīng)鼻給藥對(duì)AD模型鼠中樞膽堿能神經(jīng)環(huán)路的調(diào)控研究

田春雨，米亞新，李 穎，榮大佑，徐 麗，侯雪芹*

（山東第一醫(yī)科大學(xué)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）藥學(xué)院，山東 泰安 271016）

蛇床子為傘形科植物蛇床Cnidium monnieri（L）Cuss.干燥成熟果實(shí)。用藥歷史悠久，經(jīng)現(xiàn)代藥理藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)具有較強(qiáng)的藥理活性。但由于該藥具有腦內(nèi)濃度低，分布快，消除也快，生物利用度較低等特點(diǎn)，目前鮮有人開展研究。本研究以此為突破，研究新型劑型蛇床子素經(jīng)鼻給藥抗AD功效。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用8月齡昆明種雌性小鼠60只，SPF級(jí)，體重18～22 g，由山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。蛇床子素（Osthole，Ost）純度≥98%，北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司商城分公司[CAS:484-12-81]；3%戊巴比妥鈉（Sigma）；0.9%生理鹽水（辰欣藥業(yè)股份有限公司）；鹽酸多奈哌齊（安理申衛(wèi)材（中國）藥業(yè)有限公司制造批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20050978）等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

東茛菪堿致記憶障礙模型制備：參照葉翠飛等方法略加改進(jìn)，第21天，每天灌胃給藥后30 min，對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射氫溴酸東茛菪堿3 mg/kg正常對(duì)照組以等量生理鹽水替代，造模后30 min進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試。

腦組織和血清樣品采集：Morris水迷宮和明暗箱實(shí)驗(yàn)完畢后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食12 h，配制4%水合氯醛，以400 mg/kg劑量腹腔注射麻醉小鼠，眼球取血，靜置2 h，4℃、1000 rpm離心20 min，分離血清。斷頭取腦組織。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

蛇床子素對(duì)AD小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響：逃避潛伏期（Escape latency）經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，球形檢驗(yàn)（Mauchly's Test of Sphericity）結(jié)果Mauchly's W=0.453，P=0.000，滿足球形檢驗(yàn)，可以不用校正而直接進(jìn)行重復(fù)測(cè)量的單變量方差分析。組內(nèi)變異結(jié)果（Tests of Within-Subjects Effects）顯示訓(xùn)練天數(shù)效應(yīng)F=63.336，P=0.000，提示實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的逃避潛伏期隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加而有變化趨勢(shì)；訓(xùn)練天數(shù)與分組的交互效應(yīng)（F=0.923，P=0.55）提示訓(xùn)練天數(shù)的作用不隨分組的不同而有差異。進(jìn)一步選用LSD法對(duì)5天逃避潛伏期進(jìn)行組間的兩兩比較，結(jié)果顯示各組逃避潛伏期隨訓(xùn)練時(shí)間增加呈現(xiàn)縮短趨勢(shì)。模型組第1-5天逃避潛伏期比正常組延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（第2、5天：P＜0.05）；給藥組與模型組相比，蛇床子素組第5天逃避潛伏期均明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

蛇床子素對(duì)AD小鼠腦膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)的影響：蛇床子素各劑量組對(duì)AD小鼠腦內(nèi)Ach濃度檢測(cè)。單因素方差分析結(jié)果顯示各組Ach濃度（F=5.371，P=0.002）。組間兩兩比較顯示，模型組皮質(zhì)Ach濃度、較正常。組明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比，蛇床子素給藥組皮質(zhì)區(qū)Ach濃度增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 結(jié) 論

蛇床子素具有改善中樞膽堿能損傷，提高小鼠學(xué)習(xí)記憶的作用，東莨菪堿誘導(dǎo)小鼠建癡呆模型可以引起小鼠認(rèn)知功能的障礙，同時(shí)降低癡呆小鼠中樞膽堿能神經(jīng)環(huán)路中乙酰膽堿和膽堿乙酰基轉(zhuǎn)移酶的含量。蛇床子素可以改善癡呆模型小鼠認(rèn)知功能障礙，增加癡呆小鼠中樞膽堿能神經(jīng)環(huán)路中乙酰膽堿（ACH）的含量，提高乙酰膽堿酯酶（AchE）活性。