抗菌肽替代抗生素在斷奶仔豬中的應(yīng)用研究

■宋延飛

（遼東學(xué)院農(nóng)學(xué)院，遼寧丹東118003）

現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)中普遍采用抗生素來防治斷奶仔豬由于斷奶應(yīng)激產(chǎn)生的生長抑制和腹瀉問題。但長期使用抗生素會(huì)產(chǎn)生藥殘留、耐藥性，并且我國農(nóng)業(yè)部已禁止洛美殺星等抗生素使用，刪除了硫酸黏桿菌素的促生長用途，起草了《全國遏制動(dòng)物源細(xì)菌耐藥行動(dòng)計(jì)劃》，這說明在豬飼料中禁用抗生素已是必然趨勢(shì)，因此尋求新型綠色添加劑替代抗生素已成為研究熱點(diǎn)。抗菌肽是一種對(duì)外源病菌具有高效殺滅活性的肽類物質(zhì)[1]，由12～100個(gè)氨基酸組成[2]，是由生物體自身產(chǎn)生的一類抵抗外界病原體感染的陽離子多肽，具備抗菌譜廣、無污染、無毒副作用，不易產(chǎn)生耐藥性，是抗生素的良好替代品[3]，本試驗(yàn)探討了抗菌肽替代抗生素對(duì)斷奶仔豬生長性能及血清免疫指標(biāo)的影響，以期為抗菌肽的進(jìn)一步使用和推廣提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

抗菌肽，由中農(nóng)穎泰生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)方法

選取28日齡斷奶仔豬45頭，預(yù)飼期5 d，試驗(yàn)期為28 d，其中試驗(yàn)期分為1～14 d、15～28 d兩個(gè)階段，采用單因素完全隨機(jī)化設(shè)計(jì)，隨機(jī)分成5組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3頭豬，其中Ⅰ組為對(duì)照組，全期飼喂基礎(chǔ)日糧，Ⅱ組在基礎(chǔ)日糧中添加160 mg/kg金霉素，Ⅲ～Ⅴ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加160、320、480 mg/kg抗菌肽。試驗(yàn)飼糧參照NRC（1998）標(biāo)準(zhǔn)配制，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 生長性能測(cè)定

試驗(yàn)進(jìn)行過程中每日

觀察仔豬精神狀況、排糞情況以及持續(xù)時(shí)間。預(yù)飼期的第5 d，試驗(yàn)期的第14 d及第28 d 20∶00點(diǎn)停止喂料，照常供水，于次日早上對(duì)豬空腹逐個(gè)稱重。試驗(yàn)結(jié)束后，以重復(fù)為單位稱剩料量，記錄耗料量，計(jì)算試驗(yàn)期的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）及腹瀉率。

平均日增重(ADG，g)=增重/(試驗(yàn)天數(shù)×試驗(yàn)豬頭數(shù))

平均日采食量(ADFI，g)=耗料量/(試驗(yàn)天數(shù)×試驗(yàn)豬頭數(shù))

料重比(F/G)=飼料消耗量/增重

腹瀉率（%）=100×試驗(yàn)期腹瀉仔豬總頭數(shù)/（試驗(yàn)仔豬頭數(shù)×試驗(yàn)期天數(shù)）

1.3.2 血清免疫指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)期的第14 d及第28 d 20∶00點(diǎn)停止喂料，照常供水，于次日早上每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1頭空腹仔豬進(jìn)行前腔靜脈采血5 ml，收集于離心管中，不加抗凝劑，室溫靜置20 min后，3 000 r/min離心20 min，吸出上層血清置于-20℃保存。血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定，試劑盒購自南京建成弘大生物科技有限公司。

表1 斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件中的單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用鄧肯法（Duncan's）進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗菌肽替代抗生素對(duì)斷奶仔豬生長性能的影響（見表2）

由表2可見，1～14 d，抗菌肽組ADG、ADFI、F/G顯著優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），抗菌肽Ⅴ組比抗生素組ADG提高了 12.24%(P＜0.05)，F(xiàn)/G 降低了 3.25%(P＜0.05)?？咕蘑?、Ⅴ組分別比抗生素組ADFI提高了5.88%（P＜0.05）、8.62%（P＜0.05）。腹瀉率抗菌肽Ⅳ組和Ⅴ組與抗生素組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

15～28 d，各抗菌肽組ADG、ADFI顯著優(yōu)于對(duì)照組和抗生素組(P＜0.05)，抗菌肽Ⅴ組F/G相比對(duì)照組降低了 9.71%(P＜0.05)，比抗生素組降低了 8.67%(P＜0.05)?？咕慕M腹瀉率除Ⅲ組外均顯著低于對(duì)照組和抗生素組(P＜0.05)。抗生素組各項(xiàng)指標(biāo)均與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。

表2 抗菌肽替代抗生素對(duì)斷奶仔豬生長性能的影響

1～28 d，各抗菌肽組ADG、ADFI顯著優(yōu)于對(duì)照組和抗生素組(P＜0.05)，抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組F/G相比對(duì)照組分別降低了5.26%、9.36%(P＜0.05)，比抗生素組分別降低了1.82%(P＞0.05)、6.06%(P＜0.05)。抗菌肽Ⅴ組腹瀉率顯著低于對(duì)照組和抗生素組(P＜0.05)。抗生素組ADG顯著優(yōu)于對(duì)照組(P＜0.05)，但ADFI、F/G均與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。其中以480 mg/kg抗菌肽組飼喂效果最好，ADG、ADFI、F/G均顯著優(yōu)于其他各組(P＜0.05)。

2.2 抗菌肽替代抗生素對(duì)奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響（見表3）

表3 抗菌肽替代抗生素對(duì)斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響（mg/ml）

由表3可見，14 d，各抗菌肽組IgA、IgG、IgM均顯著優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），各抗菌肽組IgG顯著優(yōu)于抗生素組（P＜0.05）?？咕蘑簟ⅱ踅MIgA比抗生素組分別提升了25.74%（P＜0.05）、30.69%（P＜0.05），IgM比抗生素組提升了21.69%（P＜0.05）、29.32%（P＜0.05）?？股亟MIgM顯著優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），但I(xiàn)gA和IgG與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。

28 d，抗生素組與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05），各抗菌肽組IgA、IgG、IgM均顯著優(yōu)于對(duì)照組和抗生素組（P＜0.05），其中以480 mg/kg抗菌肽組飼喂效果最好，IgA、IgG、IgM均顯著優(yōu)于其他各組。

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)各階段抗菌肽組ADG隨添加量的提高呈線性升高趨勢(shì)，1～28 d全期各抗菌肽組ADG均顯著優(yōu)于對(duì)照組及抗生素組（P＜0.05）?？咕闹阅軌虼龠M(jìn)仔豬生長，原因可能在于抗菌肽可從多方面改善了斷奶仔豬的吸收消化機(jī)能和腸道內(nèi)環(huán)境。陳曉生等[4]研究顯示，在飼料中添加2.3 L/t的抗菌肽制劑，血清胰島素生長因子IGF-1顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），而 IGF-1可以參與生長激素GH的調(diào)節(jié)，從而促進(jìn)機(jī)體的生長和器官發(fā)育。鄧柏林等[5]用消化試驗(yàn)估測(cè)糞排放量和氮排放量的方法來計(jì)算營養(yǎng)物質(zhì)消化率，研究顯示，抗菌肽組糞便氮的排放量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），因此可提高育肥豬的營養(yǎng)物質(zhì)消化率。H.Bao等[6]將豬源抗菌肽添加到肉雞基礎(chǔ)飼糧中，發(fā)現(xiàn)抗菌肽能顯著提高生長性能，增加腸道對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，提高腸道免疫力。本試驗(yàn)抗菌肽各階段對(duì)斷奶仔豬平均日采食量都有促進(jìn)作用，顯著高于對(duì)照組及抗生素組（P＜0.05）。這可能是由于抗菌肽對(duì)體內(nèi)激素水平起到了調(diào)節(jié)作用。都海明等[7]研究結(jié)果顯示在飼糧中添加抗菌脂肽可以顯著提升斷奶仔豬的胰島素水平。而胰島素能夠加強(qiáng)葡萄糖利用和生脂作用，可促進(jìn)單胃動(dòng)物采食量增加[8]。斷奶應(yīng)激往往造成腸道菌群紊亂，大腸肝菌數(shù)量增多，這是斷奶仔豬腹瀉的重要原因。陳曉生等[9]研究表明，抗菌肽對(duì)大腸桿菌等腸道有害菌的抑殺能力要顯著大于金霉素（P＜0.05），有利于調(diào)節(jié)體內(nèi)微生態(tài)朝有益方發(fā)展。張熠等[10]報(bào)道在飼糧中添加外源性抗菌肽能抑制病原菌，而對(duì)腸道正常菌群和機(jī)體細(xì)胞則無殺傷作用。王靜[11]在肉雞飼糧中添加不同水平抗菌肽能夠降低21、35日齡肉雞腸道大腸桿菌數(shù)量，300 mg/kg添加水平能提高肉雞35日齡腸道乳酸桿菌群數(shù)量，效果優(yōu)于抗生素組。本試驗(yàn)1～28 d抗菌肽Ⅴ組腹瀉率要顯著低于對(duì)照組和抗生素組，與上述結(jié)果一致。

IgA、IgG、IgM是由骨髓來源的B淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的免疫球蛋白，可介導(dǎo)機(jī)體的體液免疫，其在血清中含量的高低可反映機(jī)體體液免疫強(qiáng)弱[12]。IgA除了具有抗菌、抗病毒、抗毒素作用外，對(duì)機(jī)體呼吸道、消化道等局部黏膜免疫起著相當(dāng)重要的作用，IgG有抗菌、抗病毒作用，且能中和毒素使其失去毒性，調(diào)理、凝聚和沉淀抗原，IgM是機(jī)體初次接觸抗原物質(zhì)最早產(chǎn)生的抗體，也有抗菌、抗病毒和中和毒素的功能，在機(jī)體受到病原感染后與補(bǔ)體結(jié)合，溶解病原體。研究顯示，抗菌肽對(duì)腸道健康具有明顯促進(jìn)作用，改善腸道結(jié)構(gòu)，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收；提高腸道屏障功能、改變腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)，從而提高機(jī)體免疫力[13]。劉莉如等[14]研究顯示，飼糧中添加不同水平抗菌肽可提高蛋用仔雞血液中IgA、IgG、溶菌酶和C3含量，并且隨添加量增加。各血液指標(biāo)表達(dá)水平有上升趨勢(shì)。呂尊周等[15]在日糧中添加枯草芽孢桿菌抗菌肽可提升蛋雞血清中IgA、IgG、IgM和C3含量，其中添加量為400 mg/kg可顯著提高IgA和IgG含量（P＜0.05）。本試驗(yàn)抗菌肽組IgA、IgG、IgM均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），后期28 d抗菌肽組相比抗生素組體現(xiàn)顯著優(yōu)勢(shì)（P＜0.05），說明抗菌肽能夠提升斷奶仔豬免疫性能。這也是本試驗(yàn)抗菌肽能夠提升斷奶仔豬生長性能降低腹瀉率的原因之一。

本試驗(yàn)后期抗生素組豬出現(xiàn)被毛粗糙，精神不振的現(xiàn)像，并且ADG、ADFI、F/G相比對(duì)照組差異不顯著，腹瀉率有所上升，對(duì)IgA、IgG、IgM沒有顯著促進(jìn)作用，并且在后期28 d，IgA、IgG、IgM反而要低于對(duì)照組，這可能是由于長期使用抗生素對(duì)斷奶仔豬自身臟腑功能造成了影響，導(dǎo)致生長和免疫性能下降。

4 結(jié)論

①在飼糧中添加抗菌肽能夠提高斷奶仔豬生長性能，降低腹瀉率，其中添加480 mg/kg抗菌肽顯著優(yōu)于對(duì)照組和抗生素組。

②在飼糧中添加抗菌肽能夠提升斷奶仔豬IgA、IgG、IgM含量從而提高免疫力，其中添加480 mg/kg抗菌肽顯著優(yōu)于對(duì)照組和抗生素組。

③綜合本試驗(yàn)結(jié)果，抗菌肽可替代抗生素應(yīng)用于斷奶仔豬飼糧中，且添加量為480 mg/kg時(shí)效果最好。