復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞生長性能、腸道發(fā)育及腸道菌群的影響

■李園園 李海英王俊花 彭 簫 孫蘇皖 段玉青

（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830000）

近年來，隨著現(xiàn)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；图s化的迅速發(fā)展，動物疾病的發(fā)病率逐漸升高，致使腸道條件性致病菌帶來的腸道問題日益突出?？股乜梢暂^快地治療腸道疾病，但由于抗生素的長期使用會導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生耐藥性、藥物殘留、環(huán)境污染等問題[1-4]。因此，尋求綠色、安全的抗生素替代品已成研究的熱點[5]。研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合制劑可以發(fā)揮多菌種的協(xié)同作用，比單一菌劑更有效、更穩(wěn)定[6]。飼用腸道保護(hù)劑有益于畜禽腸道健康，增強(qiáng)畜禽免疫力，改善畜禽生產(chǎn)性能[7]。張彩鳳等[8]研究表明，用乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑可以改善肉雞腸道健康，促進(jìn)肉雞生長。

研究發(fā)現(xiàn)，葡萄糖氧化酶（GOD）能改善動物腸道微生態(tài)平衡、腸道酸性環(huán)境、去除霉菌毒素等作用；多酚類提取物具有抗菌、抗寄生蟲的作用；抗應(yīng)激維生素能增加機(jī)體免疫機(jī)能、提高抗應(yīng)激能力；枯草芽孢桿菌發(fā)酵物具有改善動物腸道菌群、增強(qiáng)免疫力、促進(jìn)生長發(fā)育、提高生產(chǎn)性能等功能[9-13]。本試驗選用的復(fù)合腸道保護(hù)劑含有GOD、多酚類植物提取物、抗應(yīng)激維生素、枯草芽孢桿菌發(fā)酵物等成分，旨在研究飼糧中添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞生長性能、腸道發(fā)育及腸道菌群的影響，為該復(fù)合腸道保護(hù)劑替代抗生素在肉雞養(yǎng)殖生產(chǎn)中的合理應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

復(fù)合腸道保護(hù)劑由北京博仕奧生物技術(shù)有限公司提供，其有效成分為固定化GOD、多酚類植物提取物（類單寧）、抗應(yīng)激類維生素、枯草芽孢桿菌發(fā)酵物?；A(chǔ)飼糧（不含任何抗生素成分）由天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司提供。

1.2 試驗動物與設(shè)計

本試驗選用1日齡的良鳳花肉雞375只，隨機(jī)分成5組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)15只雞。試驗分為陰性對照組，飼喂不添加抗生素的基礎(chǔ)飼糧；陽性對照組，在基礎(chǔ)飼糧中添加0.3 g/kg那西肽和0.25 g/kg硫酸黏桿菌素；試驗Ⅰ組，在基礎(chǔ)飼糧中添加1.5 g/kg復(fù)合腸道保護(hù)劑；試驗Ⅱ組，在基礎(chǔ)飼糧中添加2 g/kg復(fù)合腸道保護(hù)劑；試驗Ⅲ組，在基礎(chǔ)飼糧中添加2.5 g/kg復(fù)合腸道保護(hù)劑，試驗期為70 d，基礎(chǔ)飼糧參照NRC（1994）肉雞營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1，各組試驗飼糧均采用粉狀飼料。

1.3 飼養(yǎng)管理

采用疊層籠養(yǎng)方式飼養(yǎng)，育雛期采用育雛火爐保溫。0～7 d光照23 h（黑暗1 h），8 d后光照16 h，白天進(jìn)行自然光照，晚上再增加2～3 h光照，以方便雞群的采食和飲水，試驗全期自由采食和飲水，試驗前雞舍進(jìn)行充分沖洗和嚴(yán)格消毒，試驗期間每周帶雞消毒2次，免疫依常規(guī)進(jìn)行。記錄每天的飼料消耗量、死亡率、雞舍溫濕度等。時刻監(jiān)控雞群的健康狀況。試驗期間除陽性對照組外不再使用任何抗生素。

1.4 測定指標(biāo)及方法

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4.1 生產(chǎn)性能

在試驗第14、28、42、56、70 d早晨8∶00對肉雞空腹稱重，以重復(fù)為單位。每天記錄采食量，若雞中途死亡，對增重和飼料消耗進(jìn)行校正。統(tǒng)計試驗期內(nèi)每組雞不同日齡的平均體重、平均日采食量、平均日增重、平均料重比。

1.4.2 腸道指標(biāo)

在試驗第56 d，以組為單位，每個組隨機(jī)選取7只體重相近，健康狀況良好的肉雞，頸靜脈放血屠宰后，依次剝離十二指腸、空腸、回腸、盲腸、直腸，測量各腸段長度后，剝離腸系膜和結(jié)締組織，用氯化鈉注射液沖洗腸段，用濾紙將液體吸干，稱各腸段重量，計算各腸段的相對長度和相對重量。

腸道相對長度(cm/kg)=腸段長度(cm)/肉雞活體重(kg)

腸道相對重量(g/kg)=腸段重量(g)/肉雞活體重(kg)

1.4.3 腸道形態(tài)

試驗第56 d，以組為單位，每組隨機(jī)選取7只體重相近，健康狀況良好的肉雞，頸靜脈放血屠宰后，依次剝離十二指腸、空腸、回腸，各自截取中段約1 cm的腸道組織，用生理鹽水緩緩沖洗干凈，浸入配制好的Bouin氏液固定液中固定，固定后制作石蠟切片，經(jīng)蘇木素-伊紅美藍(lán)（HE）染色后，用中性樹膠封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察，拍照保存，用圖像分析軟件（Image）進(jìn)行統(tǒng)計，每個切片選取5個非連續(xù)性視野，每個視野統(tǒng)計2組數(shù)據(jù)，絨毛高度是指從絨毛頂端至隱窩開口處的垂直距離，隱窩深度是指隱窩開口處至隱窩，測量絨毛高度、隱窩深度，計算絨毛高度/隱窩深度（V/C）值。

1.4.4 腸道微生物菌群的測定

①腸道內(nèi)容物的采集：試驗第56 d，以組為單位，每組隨機(jī)選取3只體重相近，健康狀況良好的肉雞，頸靜脈放血屠宰后，取盲腸段食糜1 g左右，倍比稀釋到10-6。

②菌群的培養(yǎng)：將上述腸道內(nèi)容物10-4、10-5、10-6濃度的稀釋液分別接種于麥康凱培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基、雙歧桿菌BS培養(yǎng)基、亞硫酸鉍培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)，乳酸桿菌和雙歧桿菌培養(yǎng)48 h，大腸桿菌和沙門氏菌培養(yǎng)24 h，其中乳酸桿菌和雙歧桿菌厭氧培養(yǎng)，每克肓腸內(nèi)容物的菌落數(shù)以lgCFU/g表示，試算公式如下：

每克內(nèi)容物中菌落總數(shù)=lg[（菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×每次稀釋取樣體積）/（接種用樣品體積×樣品質(zhì)量）]。

1.5 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)用Excel 2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Dun?can's法進(jìn)行各組之間的多重比較。試驗結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞生產(chǎn)性能的影響(見表2)

表2 飼糧中添加復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，在飼糧中添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞平均體重、平均日增重均無顯著影響（P＞0.05）；在平均日采食量方面，1～14 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著降低4.71%（P＜0.01）、5.64%（P＜0.01）和 4.51%（P＜0.01），與陽性對照組相比差異均不顯著（P＞0.05）；15～28 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別顯著降低1.06%（P＜0.05）、1.10%（P＜0.05）和 1.02%（P＜0.05），與陽性對組相比，分別極顯著提高2.63%（P＜0.01）、2.59%（P＜0.01）和2.68%（P＜0.01）；29～42 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著降低7.03%（P＜0.01）、3.63%（P＜0.01）和6.17%（P＜0.01），與陽性對照組相比，分別降低 3.90%（P＜0.01）、0.39%（P＞0.05）和3.01%（P＜0.05），試驗Ⅰ組與試驗Ⅱ組相比，極顯著降低3.53%（P＜0.01）；1～70 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著降低2.48%（P＜0.01）、1.94%（P＜0.01）和2.66%（P＜0.01），與陽性對照組相比，分別降低1.32%（P＜0.01）、0.78%（P＜0.05）和1.51%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與試驗Ⅱ組相比顯著降低0.74%（P＜0.05）。

在料重比方面，1～14 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著降低4.35%（P＜0.01）、7.07%（P＜0.01）和7.07%（P＜0.01），與陽性對照組相比，均差異不顯著（P＞0.05）；15～28 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，均差異不顯著（P＞0.05），試驗Ⅲ組與陽性對照組相比，顯著提高2.58%（P＜0.05）；29～42 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著下降9.66%（P＜0.01）、8.21%（P＜0.01）和10.63%（P＜0.01）；1～70 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別降低3.31%（P＜0.05）、3.72%（P＜0.05）和4.55%（P＜0.01），與陽性對照組相比，均差異不顯著（P＞0.05）；其余各日齡段，各組之間均差異不顯著（P＞0.05）；在死亡率方面，試驗全期陰性對照組死淘率為6.67%，陽性對照組、試驗Ⅰ、Ⅱ組死淘率均為1.33%，試驗Ⅲ組未出現(xiàn)死亡。

2.2 添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞腸道發(fā)育的影響(見表3)

表3 飼糧中添加復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞腸道發(fā)育的影響

由表3可知，添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑在腸道發(fā)育方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組、陽性對照組相比，十二指腸、空腸、回腸、盲腸、直腸的相對長度和相對重量差異均不顯著（P＞0.05），各試驗組之間小腸各段相對長度、相對重量差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 飼糧中添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞腸道形態(tài)的影響(見表4)

表4 飼糧中添加復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞腸道形態(tài)的影響

由表4可知，在十二指腸形態(tài)方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，V/C值分別提高6.28%（P＜0.05）、10.68%（P＜0.01）和13.33%（P＜0.01）；試驗Ⅲ組與陽性對照組、試驗Ⅰ組相比，V/C值分別提高8.43%（P＜0.01）和6.63%（P＜0.05），其余各組之間均無顯著差異（P＞0.05）。在空腸形態(tài)方面，試驗Ⅱ組與陰性、陽性對照組相比，V/C值分別顯著提高11.51%（P＜0.05）和12.03%（P＜0.05）；其余各組之間均無顯著差異（P＞0.05）。在回腸形態(tài)方面，試驗Ⅲ組與陰性、陽性對照組相比，V/C值分別極顯著提高27.39%（P＜0.01）和26.71%（P＜0.01）；試驗Ⅲ組與試驗Ⅰ、Ⅱ組相比，V/C值分別顯著提高19.77%（P＜0.05）和18.59%（P＜0.05）。各組之間腸道絨毛高度、隱窩深度均無顯著影響（P＞0.05），各試驗組絨毛高度均有增加趨勢，隱窩深度有降低趨勢。圖1為56 d十二指腸切片圖譜，由圖1可觀察到，陰性、陽性對照組十二指腸絨毛不均勻并且有斷裂現(xiàn)象，絨毛間界限及隱窩模糊不清；試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組絨毛結(jié)構(gòu)較完整，絨毛間界限及隱窩清晰可見。

2.4 飼糧中添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞腸道菌群的影響（見表5）

圖1 56 d十二指腸切片圖

表5 飼糧中添加復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞腸道菌群的影響(lgCFU/g)

由表5可知，添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑，在大腸桿菌方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，大腸桿菌數(shù)分別極顯著降低3.83%（P＜0.01）、5.23%（P＜0.01）和8.80%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與陽性對照組相比，大腸桿菌數(shù)極顯著降低3.25%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與試驗Ⅰ、Ⅱ組相比，大腸桿菌數(shù)分別極顯著降低5.17%（P＜0.01）和3.77%（P＜0.01）。

在沙門氏菌方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，沙門氏菌數(shù)分別降低2.28%（P＞0.05）、4.16%（P＜0.05）和8.58%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與陽性對照組相比，沙門氏菌數(shù)極顯著降低5.15%（P＜0.01），試驗Ⅰ、Ⅱ組與陽性對照組相比，差異均不顯著（P＞0.05），試驗Ⅲ組與試驗Ⅰ、Ⅱ組相比，沙門氏菌數(shù)均極顯著降低6.45%（P＜0.01）和4.62%（P＜0.01）。

在乳酸桿菌方面，試驗Ⅲ組與陰性對照組相比，乳酸桿菌數(shù)顯著提高3.36%（P＜0.05），試驗Ⅰ、Ⅱ組與陰性對照組相比，均無顯著性差異（P＞0.05），試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陽性對照組相比，乳酸桿菌數(shù)分別提高了3.48%（P＜0.05）、3.61%（P＜0.05）和7.23%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與試驗Ⅰ、Ⅱ組相比，乳酸桿菌數(shù)顯著提高了3.62%（P＜0.05）和3.49%（P＜0.05）。

在雙歧桿菌方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陽性對照組相比，雙歧桿菌數(shù)分別提高了2.89%（P＜0.05）、4.20%（P＜0.01）和5.65%（P＜0.01）。試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，均差異不顯著（P＞0.05），各試驗組之間差異均不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 飼糧中添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞生產(chǎn)性能的影響

平均體重、平均日增重、平均日采食量和料重比是評價肉雞生產(chǎn)性能的重要指標(biāo)，研究發(fā)現(xiàn)，GOD、多酚類植物提取物、抗應(yīng)激維生素、枯草芽孢桿菌等添加劑具有促進(jìn)動物生長發(fā)育，提高生產(chǎn)性能、提高飼料利用率的作用[14-17]。

湯海鷗等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞飼糧中添加不同劑量GOD，能顯著降低料肉比，提高平均日增重；肖傳明等[15]在肉雞飼糧中添加200 g/t植物提取物，結(jié)果顯示日增重提高、料重比降低、死亡率顯著降低。張敏等[18]研究顯示在肉雞基礎(chǔ)飼糧中添加維生素E，可降低肉雞料重比、提高生產(chǎn)性能。賈久滿等[19]指出在飼糧中添加枯草芽孢桿菌與復(fù)合酶制劑，可顯著提高產(chǎn)蛋率和蛋殼厚度，提高蛋雞生產(chǎn)性能。本試驗研究表明，在肉雞飼糧中添加復(fù)合腸道保護(hù)劑可顯著或極顯著降低全期料重比、平均日采食量，使平均體重、平均日增重均有上升趨勢，死淘率有所下降。由此可知，添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑可以提高肉雞生產(chǎn)性能，促進(jìn)生長發(fā)育。

3.2 添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞腸道發(fā)育及形態(tài)的影響

禽類的腸道包括小腸和大腸兩個部分，營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收主要在小腸中進(jìn)行，因此，家禽的小腸發(fā)育將直接影響到腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和代謝，進(jìn)而影響家禽的生產(chǎn)性能。小腸絨毛高度、隱窩深度、V/C值是反映小腸消化吸收的重要指標(biāo)，當(dāng)絨毛高度增加時，會增強(qiáng)小腸消化吸收的功能，隱窩深度與小腸上皮細(xì)胞更新?lián)Q代速度有關(guān)，隱窩深度降低表明細(xì)胞成熟率升高，更新?lián)Q代速度快，V/C值綜合反映小腸的吸收功能，V/C值越大，吸收能力越強(qiáng)[20-22]。宋海彬等[23]在飼糧中添加GOD，結(jié)果顯示GOD可提高肉雞十二指腸和空腸絨毛高度、降低隱窩深度、增加V/C值。Mahmoud等[24]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可改善肉雞空腸形態(tài)。李茜等[25]報道，肉雞飼糧中添加水解單寧酸，可以使空腸絨毛高度升高，隱窩深度降低，V/C值升高，十二指腸V/C值升高。

本試驗條件下，添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑可顯著或極顯著提高十二指腸、空腸和回腸V/C值，其中添加2.5 g/kg的復(fù)合腸道保護(hù)劑可極顯著提高十二指腸和回腸V/C值，絨毛高度均有提高趨勢、隱窩深度有降低趨勢，但腸道相對長度無顯著變化。分析可能的原因是：復(fù)合腸道保護(hù)劑可抑制腸道細(xì)菌產(chǎn)生抗生長毒素，減少消化道問題，促進(jìn)腸道絨毛高度增加、隱窩深度降低、V/C值升高，進(jìn)而提高腸絨毛對營養(yǎng)物質(zhì)的接觸表面積，減輕食物對腸道的刺激，促進(jìn)肉雞腸道消化、吸收，提高生產(chǎn)性能，但對其發(fā)揮的作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

3.3 飼糧中添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑對良鳳花肉雞腸道菌群的影響

家禽腸道中寄居著500多種微生物且大多數(shù)是有益的，有益微生物對動物腸道菌群健康、殺滅外來有害物質(zhì)起著重要作用[27]。腸道內(nèi)的有益菌和有害菌處于相對平衡的狀態(tài)，當(dāng)有益菌處于優(yōu)勢菌群狀態(tài)時，有益菌可利用寡糖發(fā)酵產(chǎn)生短鏈脂肪酸，降低腸道內(nèi)pH值，從而抑制大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌的增殖，保護(hù)腸道內(nèi)環(huán)境的健康，維持畜禽機(jī)體健康生長；當(dāng)有害菌占主導(dǎo)時，畜禽的機(jī)體生長會受到抑制，表現(xiàn)出疾病狀態(tài)[28-29]。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加GOD、枯草芽孢桿菌、植物提取物等有益物質(zhì)可以提高機(jī)體有益菌的數(shù)量，促進(jìn)乳酸菌、雙歧桿菌等有益菌的繁殖，抑制大腸桿菌、沙門氏菌等病原菌增殖，進(jìn)而改善腸道微生態(tài)平衡[30-32]。Sen等[33]研究指出，飼糧中添加枯草芽孢桿菌，可以減少肉雞腸道內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量，提高雙歧桿菌的數(shù)量。李茜等[34]在肉雞飼糧中添加水解單寧酸，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組大腸桿菌數(shù)顯著低于對照組（P＜0.05），試驗Ⅱ、Ⅲ組乳酸桿菌數(shù)、雙歧桿菌數(shù)顯著高于對照組（P＜0.05）。呂遠(yuǎn)蓉等[35]用復(fù)合微生態(tài)制劑飼喂肉雞，結(jié)果顯示其能夠顯著提高肉雞腸道內(nèi)乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量，降低大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量。

本試驗結(jié)果顯示，在肉雞飼糧中添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑，可有效增加有益菌數(shù)量（乳酸桿菌、雙歧桿菌），減少有害菌數(shù)量（大腸桿菌、沙門氏菌），其中2.5 g/kg復(fù)合腸道保護(hù)劑可顯著增加肉雞盲腸內(nèi)容物中乳酸桿菌數(shù)量，極顯著減少大腸桿菌數(shù)和沙門氏菌數(shù)量，表明肉雞飼糧中添加復(fù)合腸道保護(hù)劑，在調(diào)節(jié)腸道微生物菌群方面起到促進(jìn)作用，提高乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量的同時，降低了大腸桿菌、沙門氏菌的數(shù)量，規(guī)避了抗生素在殺滅腸道有害菌的同時也殺滅了有益菌，使腸道優(yōu)勢菌群被破壞，畜禽腸道微生物菌群環(huán)境紊亂[36]。

4 結(jié)論

本試驗條件下，在肉雞基礎(chǔ)飼糧中添加不同水平復(fù)合腸道保護(hù)劑，可調(diào)節(jié)腸道菌群，改善腸道微生物環(huán)境，提高腸道絨毛V/C值，進(jìn)而降低良鳳花肉雞平均日采食量、料重比，提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低死淘率，綜合考慮，復(fù)合腸道保護(hù)劑可有效避免抗生素弊端，替代抗生素，以添加2.5 g/kg復(fù)合腸道保護(hù)劑為最佳劑量。