轉(zhuǎn)木糖還原酶基因XYL1釀酒酵母的構(gòu)建及產(chǎn)木糖醇能力研究

王鳳梅，張邦建，岳泰新，馬利兵*

（1.包頭輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院 食品藥品學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014035；2.內(nèi)蒙古科技大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

木糖醇為五碳糖醇，是一種白色結(jié)晶類物質(zhì)，可由木糖經(jīng)氫化作用形成。其甜度與蔗糖相近，卻具有較低的熱值[1]。更為重要的是體內(nèi)木糖醇的利用無需胰島素，因此，可作為糖尿病人飲食中的一種増?zhí)饎?。此外，其抗齲齒、牙菌斑及口腔生物膜形成的功能也被許多研究所證實(shí)[2-3]。

細(xì)菌、藻類及酵母均可被用于生產(chǎn)木糖醇。在發(fā)酵制備木糖醇方面，與細(xì)菌細(xì)胞相比，酵母細(xì)胞是更為理想的微生物，尤其是釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），因其廣泛被用于葡萄酒釀制中，因此，在食品工業(yè)中被認(rèn)為是總體安全（generallyrecognizedassafe，GRAS）的菌種。在酵母菌種中，多形漢遜酵母（Hansenula polymorpha）、菅囊酵母（Pachysolen tannophilus）、樹干畢赤酵母（Pichia stipitis）、假絲酵母屬的多個(gè)菌種（休哈塔假絲酵母（Candidashehatae）、博伊丁假絲酵母（Candida boidinii）、季也蒙假絲酵母（Candida guilliermondii）及熱帶假絲酵母（Candida tropicalis））具有發(fā)酵D-木糖制備木糖醇的能力[4-9]。這些酵母菌種之所以能夠以D-木糖為碳源制備木糖醇，其原因在于這些酵母菌種可編碼木糖還原酶（xylose reductase，xyl），該酶可以以煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）為輔因子，將D-木糖還原為木糖醇[4-9]。然而，釀酒酵母中的xyl活性較低，因此，無法以木糖為碳源高效合成木糖醇。木糖還原酶基因XYL1的導(dǎo)入將賦予釀酒酵母發(fā)酵木糖的能力，同時(shí)，釀酒酵母自身的高乙醇耐受力又會(huì)賦予轉(zhuǎn)基因菌株高的發(fā)酵能力，此外，釀酒酵母GRAS認(rèn)證又使發(fā)酵終產(chǎn)物木糖醇可被安全應(yīng)用于食品工業(yè)中。

表達(dá)載體pYES2攜帶一個(gè)釀酒酵母來源的GAL1啟動(dòng)子，該啟動(dòng)子在半乳糖存在的條件下啟動(dòng)外源基因的高效表達(dá)，而在葡萄糖存在的情況下，該啟動(dòng)子受到抑制，外源基因無法表達(dá)[10]。此外，該載體攜帶一個(gè)URA3基因，在導(dǎo)入U(xiǎn)RA3基因缺陷型的釀酒酵母菌株（如INVSc1菌株）后，可采用營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因釀酒酵母。因此，本研究將人工合成的來源于樹干畢赤酵母（Pichia stipitis）的XYL1基因插入釀酒酵母表達(dá)載體pYES2中。然后，重組質(zhì)粒pYES2-XYL1導(dǎo)入感受態(tài)釀酒酵母INVSc1中，構(gòu)建轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母菌株INVSc1/pYES2-XYL1，采用營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基對(duì)轉(zhuǎn)基因釀酒酵母菌株進(jìn)行篩選和培養(yǎng)，對(duì)轉(zhuǎn)基因菌株發(fā)酵制備木糖醇的能力進(jìn)行檢測(cè)。為采用基因工程釀酒酵母制備食用木糖醇提供了理論及技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）INVSc1、釀酒酵母表達(dá)載體pYES2：美國(guó)英杰Invitrogen公司；大腸桿菌（Escherichia coli）DH5α：本實(shí)驗(yàn)室凍存菌種。

圖1 人工合成的XYL1基因Fig.1 Artificially synthesizedXYL1gene

人工合成的XYL1片段經(jīng)HindIII及BamHI雙酶切后插入pUC57克隆載體的多克隆位點(diǎn)處。重組的pUC57-XYL1克隆載體導(dǎo)入E.coliDH5α感受態(tài)細(xì)胞中，得到E.coliDH5α/pUC57-XYL1。

1.1.2 培養(yǎng)基

LB固體培養(yǎng)基：1%胰蛋白胨、0.5%酵母提取物、1%NaCl、1.5%瓊脂粉。121℃高壓滅菌20 min。液體LB培養(yǎng)基中不添加瓊脂粉。

酵母浸出粉胨葡萄糖（yeast extract peptone dextrose，YPD）培養(yǎng)基：1%酵母膏、2%蛋白胨、2%葡萄糖、2%瓊脂粉，pH 5.0。121℃高壓滅菌20 min。液體YPD培養(yǎng)基中不添加瓊脂粉。

酵母尿嘧啶缺陷型合成瓊脂培養(yǎng)基（yeast synthetic drop-out agar medium without uracil，SC-URA）：6.8 g/L氮 源基礎(chǔ)、20 g/L葡萄糖、1.92 g/L不含尿嘧啶的酵母人工合成培養(yǎng)基添加物、20 g/L瓊脂粉。121℃高壓滅菌15 min。液體篩選培養(yǎng)基中不添加瓊脂粉。

1.1.3 試劑

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取藥材樣品（編號(hào)：S19）適量，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，以丹皮酚峰的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，29個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0～0.62%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD為1.47%～4.97%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

質(zhì)粒小提試劑盒、T4脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）連接酶、質(zhì)粒小提中量試劑盒、酵母細(xì)胞質(zhì)粒小提試劑盒：天根生化科技（北京）有限公司；核酸內(nèi)切酶SacI（10 U/mL）、HindIII（15 U/mL）、BamHI（15 U/mL）、EcoRI（15 U/mL）、凝膠回收試劑盒：日本TAKARA公司；山梨醇/木糖醇檢測(cè)試劑盒：愛爾蘭Megazyme公司；三羥甲基氨基甲烷（Tris）（分析純）、乙二胺四乙酸二鈉（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）（分析純）：蘇州亞科科技股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

DHP-9272型電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司；5430臺(tái)式高速離心機(jī)：德國(guó)艾本德公司；SHA-C水浴恒溫振蕩器：常州國(guó)華電器有限公司；UV-1800PC紫外可見分光光度計(jì)：上海美譜達(dá)儀器有限公司；NanoDrop 2000 Thermo核酸定量?jī)x：美國(guó)賽默飛世爾公司。

1.3 方法

1.3.1 重組載體pYES2-XYL1的構(gòu)建

工程菌E.coliDH5α/pUC57-XYL1的構(gòu)建：參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》[11]制備感受態(tài)細(xì)胞E.coliDH5α，將攜帶XYL1基因的pUC57克隆載體pUC57-XYL1導(dǎo)入其中。將轉(zhuǎn)化后的E.coliDH5α/pUC57-XYL1涂布于含2%X-gal、20%異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG）及100 μg/mL氨芐青霉素鈉的LB固體培養(yǎng)基上，于37℃條件下培養(yǎng)12～16 h。

重組質(zhì)粒pUC57-XYL1的提?。禾羧“咨珕尉浣臃N于LB液體培養(yǎng)基中，于37℃、150r/min條件下培養(yǎng)過夜。采用質(zhì)粒小提試劑盒提取重組質(zhì)粒pUC57-XYL1，采用核酸定量?jī)x定量。

重組質(zhì)粒pUC57-XYL1的酶切：重組質(zhì)粒pUC57-XYL1經(jīng)核酸內(nèi)切酶SacI單酶切（或HindIII及BamHI雙酶切），酶切體系為1 μLSacI（或1 μLHindIII及1 μLBamHI）、2 μL 10×L Buffer（或2 μL 10×M Buffer）、5 μL質(zhì)粒溶液、12 μL（或11 μL）超純水，于37℃水浴鍋中酶切1 h后，采用0.9%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切效果，采用凝膠回收試劑盒回收XYL1基因片段，置于4℃?zhèn)溆谩?/p>

pYES2的酶切：pYES2經(jīng)核酸內(nèi)切酶HindIII及BamHI雙酶切，酶切體系為1 μLHindIII、1 μLBamHI、2 μL 10×M Buffer、2 μL質(zhì)粒溶液、14 μL超純水，酶切條件同上。采用0.9%凝膠電泳、凝膠回收試劑盒檢測(cè)及回收載體片段。

連接、轉(zhuǎn)化：采用T4 DNA連接酶連接XYL1基因及pYES2載體酶切片段，連接體系為2μLXYL1基因片段、2μL pYES2載體酶切片段、1μLT4DNA連接酶、1μL10×Buffer、4μL超純水，16℃條件下連接過夜。取3μL連接液至100μL E.coliDH5α感受態(tài)細(xì)胞中，輕搖混勻，冰浴30 min后，42℃熱激90 s，加入400 μL LB液體培養(yǎng)基，37 ℃ 120 r/min振蕩培養(yǎng)45min，然后將細(xì)胞涂布于含100 μg/mL氨芐青霉素鈉的LB固體培養(yǎng)基上，于37℃條件下培養(yǎng)12～16 h，隨機(jī)挑取10個(gè)單菌落，接種于含100 μg/mL氨芐青霉素鈉的LB液體培養(yǎng)基中，于37℃、150 r/min條件下培養(yǎng)過夜，采用無內(nèi)毒素質(zhì)粒小提中量試劑盒提取重組質(zhì)粒pYES2-XYL1。

工程菌E.coliDH5α/pYES2-XYL1的驗(yàn)證：采用EcoRI單酶切（或HindIII及BamHI雙酶切）重組質(zhì)粒pYES2-XYL1，酶切體系為1 μLEcoRI（或1 μLHindIII及1 μLBamHI）、2 μL 10×H Buffer（或2 μL 10×M Buffer）、5 μL質(zhì)粒溶液及12 μL（或11 μL）超純水，于37 ℃水浴鍋中酶切1 h后，采用0.9%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切產(chǎn)物，確定含單拷貝XYL1基因的重組質(zhì)粒pYES2-XYL1及正確的工程菌E.coli DH5α/pYES2-XYL1。大量提取單拷貝基因重組質(zhì)粒pYES2-XYL1，經(jīng)進(jìn)一步酶切、電泳鑒定，采用核酸定量?jī)x對(duì)重組質(zhì)粒pYES2-XYL1的濃度及純度進(jìn)行檢測(cè)，采用質(zhì)粒提取試劑盒中的三羥甲基氨基甲烷-硼酸（Tris-boric acid，TB）洗脫緩沖液將重組質(zhì)粒濃度調(diào)整到0.1 μg/μL，置于4℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母INVSc1/pYES2-XYL1的構(gòu)建

將釀酒酵母菌株INVSc1劃線接種于YPD固體培養(yǎng)基，于30℃條件下培養(yǎng)24～48 h。挑取少量酵母細(xì)胞接種于10 mL YPD液體培養(yǎng)基中，于30℃、72 r/min條件下培養(yǎng)24 h，2 500 r/min離心10 min，棄上清液，細(xì)胞沉淀經(jīng)1×三羥甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸二鈉（Tris-EDTA，TE）緩沖溶液（10 mmol/L Tris、1 mmol/L EDTA，pH 7.5）洗滌1次后，細(xì)胞懸浮于2 mL 1×LiAc/0.5×TE緩沖溶液（100 mmol/L LiAc、5 mmol/L Tris、0.5 mmol/L EDTA，pH 7.5）中。

取100 μL酵母細(xì)胞懸液，加入10 μL重組質(zhì)粒pYES2-XYL1（0.1 μg/μL）、10 μL單鏈DNA（10 μg/μL）及700 μL 1×LiAc/1×TE/40%聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）-3350，混合均勻，于30℃水浴中孵育30 min。隨后，向上述轉(zhuǎn)化液中加入88 μL二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO），混合均勻，于42℃水浴中熱激7 min，6 000 r/min離心1 min，收集細(xì)胞，經(jīng)1 mL 1×TE緩沖溶液洗滌1次后，細(xì)胞懸浮于50 μL 1×TE緩沖溶液中。

轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞涂布于尿嘧啶缺陷篩選培養(yǎng)基表面，于30℃條件下培養(yǎng)2～3 d，挑取單克隆子分別接種于液體篩選培養(yǎng)基中，于30℃、72 r/min條件下培養(yǎng)24 h。采用酵母細(xì)胞質(zhì)粒小提試劑盒提取重組質(zhì)粒pYES2-XYL1，經(jīng)EcoRI單酶切或HindIII及BamHI雙酶切后，凝膠電泳檢測(cè)酶切結(jié)果。采用T7 Forward primer（5′-TAATACGACTCACTATAGGG-3′）對(duì)目的基因進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

1.3.3 轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母INVSc1/pYES2-XYL1產(chǎn)木糖醇能力檢測(cè)

轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母INVSc1/pYES2-XYL1及未轉(zhuǎn)XYL1基因的釀酒酵母INVSc1分別接種于10 mL SC-URA液體培養(yǎng)基中，于30℃條件下靜置培養(yǎng)過夜。細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞密度，按106CFU/mL接種于50 mL含50 g/L木糖及10 g/L半乳糖（或10 g/L葡萄糖）的SC-URA液體培養(yǎng)基中，于30℃、200 r/min、厭氧條件下培養(yǎng)，每24 h取1 mL發(fā)酵液，連續(xù)取樣5 d，采用山梨醇/木糖醇檢測(cè)試劑盒檢測(cè)發(fā)酵液中的木糖醇含量。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理

發(fā)酵實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，發(fā)酵液中木糖醇含量取3次重復(fù)的平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPASS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 重組質(zhì)粒pYES2-XYL1的構(gòu)建

提取重組質(zhì)粒pUC57-XYL1，經(jīng)SacI單酶切或HindIII及BamHI雙酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖2所示。

H+B為HindIII及BamHI雙酶切產(chǎn)物；S為SacI單酶切產(chǎn)物圖2 重組質(zhì)粒pUC57-XYL1的酶切產(chǎn)物電泳圖Fig.2 Electrophoretogram of enzyme-digested products of recombinant plasmid pUC57-XYL1

由圖2可以看出，重組質(zhì)粒pUC57-XYL1經(jīng)單酶切后，堿基長(zhǎng)度為3～4 kbp，與預(yù)期單酶切產(chǎn)物（3 667 bp）大小相符；經(jīng)雙酶切后，目的基因條帶XYL1大小約1 kbp，克隆載體pUC57大小為2～3 kbp，與預(yù)期雙酶切產(chǎn)物大小相符。

將帶有粘性末端的目的基因XYL1與酵母表達(dá)載體pYES2連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒pYES2-XYL1，結(jié)果見圖3。

圖3 重組質(zhì)粒pYES2-XYL1Fig.3 Recombinant plasmid pYES2-XYL1

2.2 轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母INVSc1/pYES2-XYL1的構(gòu)建

將重組載體pYES2-XYL1導(dǎo)入釀酒酵母INVSc1感受態(tài)細(xì)胞中，通過營(yíng)養(yǎng)缺陷互補(bǔ)型篩選成功獲得2株轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母菌株INVSc1/pYES2-XYL1，分別為INVSc1/pYES2-XYL1-01、INVSc1/pYES2-XYL1-02。提取轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母菌株INVSc1/pYES2-XYL1-01、INVSc1/pYES2XYL1-02的重組質(zhì)粒pYES2-XYL1-01、pYES2-XYL1-02進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物電泳結(jié)果見圖4。

由圖4可以看出，重組質(zhì)粒pYES2-XYL1-01、pYES2-XYL-02經(jīng)EcoRI單酶切后，兩重組質(zhì)粒的堿基長(zhǎng)度均約為7 kbp，與其預(yù)期大?。? 825 bp）相符。經(jīng)HindIII及BamHI雙酶切后，目的基因XYL1堿基長(zhǎng)度均約1 kbp，pYES2載體堿基長(zhǎng)度均約6 kbp，與預(yù)期雙酶切產(chǎn)物大小相符。結(jié)果表明，已成功制備含單拷貝XYL1基因的釀酒酵母菌株INVSc1/pYES2-XYL1。

H+B為HindIII及BamHI雙酶切產(chǎn)物；E為EcoRI單酶切產(chǎn)物。圖4 重組質(zhì)粒pYES2-XYL1的酶切產(chǎn)物電泳圖Fig.4 Electrophoretogram of enzyme-digested products of recombinant plasmid pYES2-XYL1

2.3 轉(zhuǎn)基因釀酒酵母INVSc1/pYES2-XYL1發(fā)酵產(chǎn)木糖醇能力測(cè)定

將篩選到的2株轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母菌株INVSc1/pYES2-XYL1-01及INVSc1/pYES2-XYL1-02按1×106CFU/mL菌體濃度接種于含50 g/L木糖及10 g/L半乳糖（或10 g/L葡萄糖）的SC-URA液體培養(yǎng)基中，于30℃、200 r/min、厭氧條件下培養(yǎng)，每隔24 h檢測(cè)一次發(fā)酵液中木糖醇含量，結(jié)果見表1。

表1 釀酒酵母產(chǎn)木糖醇能力測(cè)定結(jié)果Table 1 Determination results of the xylitol production ability ofSaccharomyces cerevisiae

由表1可知，2株轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母INVSc1/pYES2-XYL1-01、INVSc1/pYES2-XYL1-02以半乳糖及木糖為碳源時(shí)，發(fā)酵5 d后，木糖醇產(chǎn)量分別可達(dá)（13.68±2.37）g/L、（12.09±1.45）g/L，木糖醇產(chǎn)量差異不顯著（P＞0.05）。而非轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母INVSc1的木糖醇產(chǎn)量為（1.08±0.37）g/L，顯著低于轉(zhuǎn)基因釀酒酵母組（P＜0.05）。結(jié)果表明，XYL1基因的導(dǎo)入顯著提高了釀酒酵母INVSc1菌株生產(chǎn)木糖醇的能力（P＜0.05）。當(dāng)2株轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母INVSc1/pYES2-XYL1-01、INVSc1/pYES2-XYL1-02以葡萄糖及木糖為碳源時(shí)，產(chǎn)木糖醇的能力顯著下降（P＜0.05），木糖醇產(chǎn)量雖略高于非轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母組，但無顯著差異（P＞0.05）。其可能原因在于，當(dāng)pYES2-XYL1載體導(dǎo)入釀酒酵母INVSc1菌株中，啟動(dòng)外源基因表達(dá)的GAL1啟動(dòng)子在葡萄糖存在時(shí)受到抑制，導(dǎo)致XYL1基因無法正常表達(dá)；而當(dāng)發(fā)酵液中存在半乳糖時(shí)，該啟動(dòng)子去阻遏，使得XYL1基因被誘導(dǎo)表達(dá)。

當(dāng)葡萄糖作為木糖的共底物時(shí)，轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母的木糖醇產(chǎn)量與非轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母無顯著差異（P＞0.05），說明葡萄糖對(duì)該啟動(dòng)子的抑制作用很強(qiáng)。這一啟動(dòng)子使制備的轉(zhuǎn)基因釀酒酵母可實(shí)現(xiàn)人為誘導(dǎo)表達(dá)，即在種子制備階段，采用含葡萄糖的培養(yǎng)基抑制XYL1基因表達(dá)，避免外源基因的過度表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母的生理影響，而在發(fā)酵木糖階段，發(fā)酵液中添加一定濃度的半乳糖誘導(dǎo)GAL1啟動(dòng)子啟動(dòng)XYL1基因的表達(dá)。由于釀酒酵母的發(fā)酵過程必然伴隨著半乳糖的消耗，因此，發(fā)酵液中初始半乳糖的含量對(duì)整個(gè)發(fā)酵過程至關(guān)重要。有關(guān)發(fā)酵液中適宜的半乳糖初始濃度有待進(jìn)一步研究。

木糖作為自然界中較為豐富的可再生碳源，使人們嘗試將高活性xyl酵母菌種中的XYL1基因?qū)脶劸平湍钢?，制備轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母并發(fā)酵木糖制備木糖醇[9，11-15]。目前，已在包括樹干畢赤酵母（P.stipitis）在內(nèi)的多個(gè)酵母菌種中檢測(cè)到XYL1基因的高效表達(dá)[4-9]。通常采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)或反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）技術(shù)從基因組DNA或轉(zhuǎn)錄組核糖核酸（ribonucleicacid，RNA）中擴(kuò)增目的基因的DNA序列或cDNA序列。在本研究中，在已知樹干畢赤酵母XYL1基因DNA序列（GenBank：X59465.1）的基礎(chǔ)上，采用人工合成的方法獲得該基因的編碼序列及部分3′端非編碼序列。轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母發(fā)酵木糖制備木糖醇的能力間接證明了合成基因的高效表達(dá)。在轉(zhuǎn)基因領(lǐng)域，由于某些生物材料特別稀少，甚至難以獲得，因此，無法采用常規(guī)PCR或RT-PCR技術(shù)獲得目的基因。本研究為類似的轉(zhuǎn)基因研究提供了理論及技術(shù)基礎(chǔ)。

3 結(jié)論

本研究成功構(gòu)建轉(zhuǎn)XYL1基因釀酒酵母INVSc1/pYES2-XYL1-01、INVSc1/pYES2-XYL1-02，其以50g/L木糖及10g/L半乳糖為碳源發(fā)酵5 d后，木糖醇產(chǎn)量分別達(dá)到（13.68±2.37）g/L、（12.09±1.45）g/L，顯著高于非轉(zhuǎn)基因釀酒酵母INVSc1的木糖醇產(chǎn)量（1.08±0.37）g/L（P＜0.05）。結(jié)果表明，XYL1基因的導(dǎo)入顯著提高了釀酒酵母INVSc1菌株生產(chǎn)木糖醇的能力（P＜0.05）。為采用基因工程釀酒酵母制備食用木糖醇提供了理論及技術(shù)基礎(chǔ)。