多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)在食品致病微生物檢測(cè)中的應(yīng)用

摘 要：目前來(lái)說(shuō)食品行業(yè)發(fā)展勢(shì)頭迅猛，食品行業(yè)的衛(wèi)生狀況沒(méi)有得到很好的控制。導(dǎo)致很多有害的微生物和細(xì)菌，在嚴(yán)重危害著食品的品質(zhì)和人們的身體健康。所以監(jiān)管人員需要采取更先進(jìn)更專業(yè)的微生物檢測(cè)技術(shù)，快速準(zhǔn)確地檢測(cè)食品中致病微生物的含量，本文介紹現(xiàn)代食品檢測(cè)技術(shù)和多重PCR技術(shù)的技術(shù)原理，同時(shí)介紹多重PCR技術(shù)運(yùn)用在食品致病微生物檢測(cè)的具體應(yīng)用形式，以供同行參考研究。

關(guān)鍵詞：多重PRC快速檢測(cè)技術(shù)；食品致病微生物檢測(cè)；技術(shù)原理；檢測(cè)方式

中圖分類號(hào)：TS207.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1004-7344（2018）26-0375-02

1 引 言

食品致病微生物的種類數(shù)量在逐年增長(zhǎng)，對(duì)于微生物的檢測(cè)方法也在不斷增多，同時(shí)得到一定的創(chuàng)新和改善。在實(shí)際的食品致病微生物檢測(cè)當(dāng)中，采用傳統(tǒng)的常規(guī)培養(yǎng)法、免疫學(xué)方法等都存在著操作復(fù)雜、菌落培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)等種種問(wèn)題。而采用多重PCR技術(shù)，其具有快速、簡(jiǎn)便等多個(gè)優(yōu)點(diǎn)，和傳統(tǒng)的檢測(cè)手段相比克服了操作繁瑣、時(shí)間長(zhǎng)的缺點(diǎn)，同時(shí)相關(guān)檢測(cè)結(jié)果也表明，采用多重PRC技術(shù)效果顯著、準(zhǔn)確率高，所以目前正在致病菌檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品等方面的研究中被廣泛運(yùn)用。

2 現(xiàn)代食品檢測(cè)技術(shù)和多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)淺析

2.1 現(xiàn)代食品檢測(cè)技術(shù)

食品指的是不經(jīng)過(guò)加工、或經(jīng)過(guò)一定加工后，具有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值可供人們食用的物質(zhì)。食品當(dāng)中致病細(xì)菌含量的多少直接影響到了人們的身體健康，所以食品一定要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的現(xiàn)代食品檢測(cè)技術(shù)檢驗(yàn)。

運(yùn)用生物、物理或化學(xué)等學(xué)科技術(shù)對(duì)食品工業(yè)當(dāng)中生產(chǎn)的食物成品、半成品、原料等物質(zhì)進(jìn)行微生物的分析檢測(cè)，是食品檢測(cè)的首要任務(wù)?，F(xiàn)代食品檢測(cè)技術(shù)根據(jù)被檢測(cè)樣本種類的不同，由微生物分析法、儀器分析法、感官檢驗(yàn)法等多種檢測(cè)方式。隨著時(shí)代的進(jìn)步和科學(xué)技術(shù)水平的提升，國(guó)際上在現(xiàn)代食品檢測(cè)技術(shù)方面的研究成果日新月異，先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)在不斷用于實(shí)踐當(dāng)中，新技術(shù)的產(chǎn)生使得食品行業(yè)可以運(yùn)用更高精尖的食品檢測(cè)儀器來(lái)進(jìn)行食品安全的檢測(cè)，不僅縮短檢測(cè)時(shí)間、降低檢測(cè)成本，還能提升檢測(cè)準(zhǔn)確率，可謂一舉多得。目前主要有電子傳感檢測(cè)技術(shù)、生物傳感檢測(cè)技術(shù)、PCR基因擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)等，本文就將針對(duì)多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)展開(kāi)分析和探討。

2.2 多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)原理探究

在多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)的實(shí)際運(yùn)用當(dāng)中，PCR技術(shù)主要依靠的是聚合酶的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，采用主要模板為RNA，此外還需要使用的輔助工具是DNA聚合酶，以此來(lái)實(shí)現(xiàn)DNA片段的擴(kuò)增。針對(duì)多重PCR技術(shù)來(lái)說(shuō)，主要包括變性、退火和延伸三個(gè)步驟，是按從DNA單鏈轉(zhuǎn)化成DNA雙鏈的過(guò)程。我們把這個(gè)DNA雙鏈叫做模板，進(jìn)行多次相同的操作之后，就可以實(shí)現(xiàn)循環(huán)擴(kuò)增。多重PCR檢測(cè)技術(shù)是在傳統(tǒng)PCR檢測(cè)技術(shù)的基礎(chǔ)上，把引物的數(shù)量從兩對(duì)增加到多對(duì)，這樣可以實(shí)現(xiàn)多個(gè)序列同時(shí)擴(kuò)增，提升擴(kuò)增的速度和效率。

2.3 多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)優(yōu)勢(shì)

多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)十分高效，在同一PCR反應(yīng)管當(dāng)中可以一次性檢測(cè)出多種病原微生物，甚至對(duì)病原微生物的具體型號(hào)進(jìn)行分型，不僅檢測(cè)速度非?？欤铱梢酝ㄟ^(guò)微量的樣本就得到準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。對(duì)于成組病原體的檢測(cè)，比如戰(zhàn)傷感染厭氧細(xì)菌、腸道致病細(xì)菌、無(wú)芽孢厭氧細(xì)菌等多種細(xì)菌進(jìn)行同時(shí)檢驗(yàn)，既經(jīng)濟(jì)又簡(jiǎn)便。多種病原體在同一個(gè)樣本中被檢測(cè)出來(lái)，可以節(jié)省檢測(cè)的開(kāi)支和時(shí)間耗費(fèi)，為臨床提供更多有價(jià)值的信息。

3 多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)用于檢測(cè)食品致病微生物方法

我國(guó)食源性病原菌的種類和數(shù)目十分多，其中以腸道致病細(xì)菌為主要病原，引起中毒的食物主要是動(dòng)物性食品。根據(jù)目前我國(guó)的食品安全管理?xiàng)l例看來(lái)，針對(duì)食品病原菌的檢測(cè)通常包括：大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等，下面本人對(duì)常見(jiàn)的、危害性比較大的同時(shí)列在國(guó)家法律規(guī)定檢測(cè)清單中的有害菌進(jìn)行描述，同時(shí)介紹多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)在這些菌落檢測(cè)上的具體應(yīng)用方式和應(yīng)用特點(diǎn)：

3.1 腸出血性大腸菌群

大腸菌群是一群好氧和兼性厭氧的細(xì)菌，在人體正常的體溫下，24h內(nèi)能夠發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，大腸菌群的主要來(lái)源是人畜的排泄物，除了大腸埃希氏桿菌之外，還有腸桿菌科的腸桿菌屬等。我國(guó)食品衛(wèi)生檢驗(yàn)檢疫標(biāo)準(zhǔn)中提出要對(duì)大腸菌群的含量進(jìn)行檢測(cè)，該菌群的檢出情況代表了食品中是否存在糞便污染。大腸菌群數(shù)量的高低代表食物受到糞便污染的程度和對(duì)人體健康威脅程度的大小。

對(duì)于大腸桿菌來(lái)說(shuō)，它會(huì)產(chǎn)生毒素，這種毒素很難通過(guò)現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行針對(duì)性的檢測(cè)，但是通過(guò)多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)則可以在溶血素基因等基因?yàn)槟康幕虻幕A(chǔ)之上，準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)食品中是否含有大腸桿菌。目前對(duì)于進(jìn)口牛肉的質(zhì)量檢疫當(dāng)中采用多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)，以此嚴(yán)格保障進(jìn)口牛肉的質(zhì)量合格?？偠灾畬?duì)于大腸菌群的檢測(cè)，采用PCR檢測(cè)技術(shù)和傳統(tǒng)的血清檢測(cè)相比，準(zhǔn)確度提升了不少。

3.2 沙門(mén)氏菌

沙門(mén)氏菌同屬腸桿菌科，是革蘭氏陰性腸道桿菌。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的沙門(mén)氏菌種類達(dá)到1000余種根據(jù)國(guó)家要求，因?yàn)樯抽T(mén)氏菌毒性較強(qiáng)，對(duì)人體的危害程度較大，所以比較容易遭受沙門(mén)氏菌感染的食品比如生雞蛋等，都需要進(jìn)行嚴(yán)格的分類管理，進(jìn)行嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)的微生物致病菌檢測(cè)，讓這些常見(jiàn)的食物遠(yuǎn)離沙門(mén)氏菌的侵?jǐn)_，從而有效預(yù)防相關(guān)疾病對(duì)于沙門(mén)氏菌的檢測(cè)，由于食物中沙門(mén)氏菌的含量很低，在生產(chǎn)加工的過(guò)程中又由于各種因素的干擾讓該病原菌的檢測(cè)準(zhǔn)確率進(jìn)一步降低。而通過(guò)多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)，可以有效明確沙門(mén)氏菌的血清類型，甚至還可以掌握實(shí)際的突變情況。目前常用血清型特異性引物rfb基因來(lái)專門(mén)針對(duì)沙門(mén)氏菌的致病菌檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)的實(shí)際數(shù)據(jù)表明，這不但可以運(yùn)用在常規(guī)的血清檢測(cè)當(dāng)中，還可以在別的肉品檢測(cè)當(dāng)中運(yùn)用。

3.3 金黃色葡萄球菌

金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬，是人類重要的一種病原菌，如果攝入量過(guò)多可以引發(fā)嚴(yán)重的微生物感染，甚至導(dǎo)致人類的死亡。這種細(xì)菌在自然界的分布十分廣泛，所以其危害食品安全性的可能性也很大。其可以通過(guò)食品加工者、銷售員等，間接引發(fā)食物的微生物感染，造成食物污染。

針對(duì)金黃色葡萄球菌來(lái)說(shuō)，在蔬菜和腌制肉食當(dāng)中都能夠大量存在并快速繁殖，最終形成大量的腸毒素導(dǎo)致人類中毒。對(duì)于金黃色葡萄球菌的微生物檢測(cè)技術(shù)早已有之，檢測(cè)方法比如動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、血清學(xué)實(shí)驗(yàn)、免疫熒光蛋白實(shí)驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附方法等，目前已經(jīng)相當(dāng)成熟，相關(guān)學(xué)者在采用了多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行微生物檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，準(zhǔn)確率和傳統(tǒng)方法比沒(méi)有明顯差異，二效率卻可以得到提升。

4 結(jié) 語(yǔ)

總而言之，多重PCR快速檢測(cè)技術(shù)在食品的微生物檢測(cè)中應(yīng)用優(yōu)勢(shì)和傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)相比十分大，不僅可以提升檢測(cè)的準(zhǔn)確度和效率，還能夠降低檢測(cè)的操作復(fù)雜程度，最終還可以擴(kuò)增多方面基因的效果，為促進(jìn)食品致病微生物的檢測(cè)提供十分重要的依據(jù)，由此作為基礎(chǔ)保障了食品安全的健康和質(zhì)量，保障廣大人民群眾的身體健康，值得大范圍推廣和應(yīng)用。

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收稿日期：2018-8-3