紅景天提取物對(duì)高原缺氧條件下肉雞抗氧化能力和腹水癥死亡率的影響

■李 龍 劉鎖珠 張振倉

（1.楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物工程分院，陜西楊凌712100；2.西藏農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝860000）

以往高強(qiáng)度的遺傳選育顯著的提高了肉雞的生產(chǎn)性能[1]，但忽略了肉雞心肺功能的選育，因此耗氧器官和供氧器官發(fā)育比例的失調(diào)導(dǎo)致肉雞容易出現(xiàn)肺動(dòng)脈高壓，導(dǎo)致肉雞腹水癥的發(fā)生率高[2-3]。特別是在環(huán)境限制氧氣獲得的條件下，肉雞腹水癥敏感性顯著提高[4]。在高原地區(qū)，由于氧分壓降低，肉雞腹水癥是引起肉雞死亡的主要因素[5]。值得注意的是肉雞本身單位體重代謝率（耗氧量）大約是其它哺乳動(dòng)物的2～2.5倍，因此電子漏和自由基（特別是活性氧）的產(chǎn)生也是明顯高于其它哺乳動(dòng)物的[6]。高原缺氧環(huán)境會(huì)引起肉雞氧氣獲取量減少、能量代謝異常和活性氧增多，其中缺氧誘發(fā)的機(jī)體活性氧增多是肉雞腹水癥發(fā)生的一個(gè)重要原因[7]。

紅景天作為西藏的一種傳統(tǒng)中藥，其具有機(jī)體應(yīng)激保護(hù)作用。清除體內(nèi)自由基是紅景天發(fā)揮這一作用的重要原因。已有大量研究表明無論體外和體內(nèi)試驗(yàn)紅景天均具有抗氧化作用[8-10]，其中四種主要的活性成分（紅景天苷、絡(luò)塞利、絡(luò)塞維和絡(luò)塞琳）也都表現(xiàn)出了清除體內(nèi)活性氧的作用，但存在計(jì)量特異性[11]。之前有研究顯示紅景天粉能夠提高高原缺氧條件下肉雞42 d的抗氧化能力[12]，但對(duì)整個(gè)飼養(yǎng)期肉雞腹水癥死亡率無顯著影響[5]，這可能是由于紅景天粉中有效成分含量過低，發(fā)揮作用過慢有關(guān)。因此本試驗(yàn)擬通過添加紅景天提取物來增加有效成分含量，研究紅景天提取物對(duì)高原缺氧條件下肉雞不同飼養(yǎng)期抗氧化能力和腹水死亡率的影響。

1 材料與方法

1.1 紅景天水提物制備

本試驗(yàn)中紅景天來自于西藏農(nóng)牧學(xué)院校內(nèi)人工種植，經(jīng)本校相關(guān)專家鑒定為大花紅景天。取紅景天干燥根部用蒸餾水清洗根部泥土，在陰涼處風(fēng)干，用粉碎機(jī)將紅景天制成粉末，按質(zhì)量體積比1∶5（w/v）添加蒸餾水，室溫放置24 h（冷滲法）來獲得紅景天水提物，將上層液體轉(zhuǎn)入另一容器中，殘?jiān)貜?fù)上述操作4次。將所有紅景天水提物混合并用紗布過濾，8 000×g離心2 min轉(zhuǎn)移上清棄去殘?jiān)锨謇眯D(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行干燥處理。通過液相色譜檢測(cè)提取物中紅景天苷、絡(luò)塞維和酪醇的含量分別為25.21、10.44 mg/g和0.03 mg/g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用單因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用1日齡AA雄性肉仔雞900只（研究表明雄性肉仔雞的腹水敏感性高于雌性[13]，因此本試驗(yàn)全部選用雄性肉仔雞以更好的建立肉雞腹水癥模型），隨機(jī)分到5個(gè)日糧處理組，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只雞，進(jìn)行為期42 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)。試驗(yàn)所用肉仔雞出雛當(dāng)日從成都空運(yùn)至西藏林芝。試驗(yàn)期飼料全部使用商品肉雞全價(jià)配合飼料（試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1）。5種日糧分別是在基礎(chǔ)日糧中添加0（對(duì)照組）、0.1%、0.15%、0.2%和0.4%的紅景天水提物干粉。

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在西藏林芝海拔2 986 m處進(jìn)行，雞只飼養(yǎng)在2層雞籠。第一周育雛溫度為35.5℃左右，之后逐漸降低，三周后禽舍溫度控制在25℃左右。第一周24 h照明，從第二周起每天保持恒定光照時(shí)間（23 h照明，1 h熄燈），自由采食和飲水，免疫和消毒按常規(guī)程序進(jìn)行。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 測(cè)定指標(biāo)

1.4.1 腹水死亡率

試驗(yàn)期間每天記錄發(fā)病、死亡雞只，并對(duì)死雞逐個(gè)剖檢確定死因。如出現(xiàn)腹腔有淺黃色或黃色膠凍狀液體、心包積水、右心室肥大（右心指數(shù)＞0.29）等癥狀判定為腹水死亡[14]。

1.4.2 血液采集與抗氧化性能測(cè)定

分別在第14、28 d和42 d每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取1只雞，頸靜脈采血后立即置于冰上帶回實(shí)驗(yàn)室，4℃2 000×g條件下離心10 min分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

血清中的過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）、蛋白質(zhì)羥基含量（PC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和總抗氧化能力（T-AOC）利用相應(yīng)試劑盒測(cè)定（南京建成生物工程研究所），測(cè)定過程嚴(yán)格按照試劑盒提供的操作步驟進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用EXCEL（2010）整理數(shù)據(jù)，利用SPSS（17.0）進(jìn)行方差分析和LSD多重比較，數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，使用x2檢驗(yàn)比較不同處理組之間的死亡率差異，以P＜0.05判定為差異顯著。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 日糧中添加紅景天提取物對(duì)肉雞腹水死亡率的影響(見圖1)

圖1 日糧中添加紅景天提取物對(duì)不同時(shí)期肉雞腹水死亡率的影響

由圖1可見，在14 d時(shí)各處理組之間肉雞累計(jì)腹水死亡率無顯著差異（P＞0.05）。但在28 d和42 d，0.2%和0.4%紅景天提取物處理組相對(duì)于其他三個(gè)處理組顯著降低了肉雞累計(jì)腹水死亡率（P＜0.05）。

2.2 日糧中添加紅景天提取物對(duì)肉雞抗氧化能力的影響（見表2）

表2 日糧中添加紅景天提取物對(duì)不同時(shí)期肉雞抗氧化能力的影響

由表2可見，在14 d時(shí)，相比于對(duì)照組，0.2%和0.4%紅景天提取物處理組顯著降低了血清中MDA和PC的含量（P＜0.05），而0.1%和0.15%紅景天提取物處理組與對(duì)照組之間各氧化指標(biāo)均無顯著差異（P＞0.05）。在28 d時(shí)，相比于對(duì)照組，0.2%和0.4%紅景天提取物處理組顯著降低了血清中MDA和 PC 的含量（P＜0.05），并顯著提高了 GSH-Px、SOD和T-AOC的活性（P＜0.05），0.15%紅景天提取物處理組顯著提高了血清GSH-Px活性（P＜0.05）。在42 d時(shí)，相比于對(duì)照組，0.15%、0.2%和0.4%紅景天提取物處理組顯著降低了血清中MDA和PC的含量（P＜0.05），并顯著提高了 CAT、GSH-Px、SOD和T-AOC的活性（P＜0.05），相比于對(duì)照組，0.1%紅景天提取物處理組顯著降低了血清中MDA和PC的含量（P＜0.05），并顯著提高了GSH-Px、SOD和TAOC的活性（P＜0.05），但對(duì)CAT的活性無顯著影響（P＞0.05）。

3 討論

生理性缺氧會(huì)破壞機(jī)體的氧化和抗氧化系統(tǒng)的平衡，改變酶和非酶的抗氧化狀態(tài)、蛋白質(zhì)氧化水平和脂類氧化水平，從而引起組織損傷[15]。MDA是多不飽和脂肪酸過氧化的產(chǎn)物，是衡量機(jī)體中氧化應(yīng)激的一個(gè)重要指標(biāo)，與之類似的PC是蛋白質(zhì)氧化的產(chǎn)物，也同樣能夠評(píng)價(jià)機(jī)體的氧化水平[16]。目前研究發(fā)現(xiàn)紅景天提高動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力主要通過兩個(gè)方面實(shí)現(xiàn)：①直接清除活性氧，從而抑制營養(yǎng)物質(zhì)的過氧化；②提高抗氧化酶分泌和活性[8-11，15]。本試驗(yàn)同樣研究發(fā)現(xiàn)日糧中添加0.2%和0.4%的紅景天提取物能夠提高高原缺氧條件下肉雞的抗氧化能力，但14 d時(shí)0.2%和0.4%紅景天提取物能夠顯著降低血清MDA和PC的含量，但對(duì)抗氧化酶的活性無顯著影響。提示適量的紅景天前期對(duì)肉雞抗氧化能力的影響是通過直接清除體內(nèi)活性氧和抑制營養(yǎng)物質(zhì)過氧化來實(shí)現(xiàn)，而非通過提高抗氧化酶的分泌與活性。而在28 d和42 d，0.2%和0.4%紅景天提取物能夠顯著降低血清MDA和PC的含量，提高抗氧化酶的活性，提示在肉雞飼養(yǎng)中后期紅景天主要是通過清除活性氧和增加消化酶分泌和活性2個(gè)途徑來實(shí)現(xiàn)的。

高原缺氧條件下肉雞的腹水癥發(fā)生率會(huì)顯著提高[17]，本試驗(yàn)同樣發(fā)現(xiàn)在西藏林芝2 986 m海拔高度飼養(yǎng)肉雞42 d腹水死亡率達(dá)到了約14%，遠(yuǎn)高于平原地區(qū)肉雞腹水癥的發(fā)生率。肉雞生理缺氧條件下活性氧代謝異常是肉雞腹水癥發(fā)生的一個(gè)重要誘因，這主要是由于活性氧帶來的組織損傷（特別是心肺系統(tǒng)）和減少血液中NO濃度有關(guān)[18]。血液中過高的活性氧會(huì)與血液中NO反應(yīng)生成強(qiáng)抗氧化劑過氧硝酸鹽，而NO是一種重要的血管擴(kuò)張和血壓調(diào)節(jié)因子，被認(rèn)為是動(dòng)物體內(nèi)重要的心臟保護(hù)劑[19]。雖然在14 d時(shí)添加0.2%和0.4%紅景天提取物顯著改善了肉雞的抗氧化能力，但腹水癥的發(fā)生主要集中在肉雞飼養(yǎng)的中后期，這可能是在14 d時(shí)紅景天提取物對(duì)腹水死亡率發(fā)生無顯著影響的主要因素。而在28 d和42 d時(shí)添加0.2%和0.4%紅景天提取物顯著降低了肉雞腹水死亡率的發(fā)生，而這個(gè)時(shí)期紅景天提取物對(duì)肉雞抗氧化性能的改善是其腹水死亡率降低的重要原因之一。雖然0.1%和0.15%紅景天提取物處理組在42 d顯著的提高了肉雞的抗氧化能力，但對(duì)肉雞腹水死亡率的發(fā)生無顯著影響，這可能是添加0.1%和0.15%紅景天提取物活性成分過低，發(fā)揮作用較慢引起的，紅景天發(fā)揮抗氧化功能存在計(jì)量依賴性。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明紅景天提取物能夠降低高原缺氧條件下肉雞腹水死亡率，改善肉雞抗氧化能力是紅景天提取物降低腹水死亡率的原因之一，但存在計(jì)量依賴性。