一例血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染的診斷

呂遠蓉　王懷禹　魏玲

摘要：2017年3月，四川省某養(yǎng)雞場飼養(yǎng)的肉雞突然出現(xiàn)精神萎靡、心包積液、肝臟腫大和壞死為主要特征的疫病，臨床初步診斷為Ⅰ群禽腺病毒感染，取送檢的病料組織進行實驗室病毒分離鑒定，并通過分子生物學(xué)PCR檢測和序列分析，最終確定該養(yǎng)雞場發(fā)生了血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染并分離到致病毒株，養(yǎng)殖場應(yīng)該引起對該病的重視。

關(guān)鍵詞：Ⅰ群禽腺病毒；感染；診斷

近3年來，我國各地陸續(xù)發(fā)生由血清4型Ⅰ群禽腺病毒（fowl adenovirus，F(xiàn)AV-Ⅰ）引起的一種病毒性疾病，該病主要表現(xiàn)為雞心包積水綜合征和雞包涵體肝炎等特征，因此該病又稱心包積水綜合征（hydropericardium syndrome，HPS）和安卡拉?。╝ngara disease，AD）。該病死亡率高達80%以上，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了很大的經(jīng)濟損失，是當(dāng)前危害養(yǎng)雞業(yè)的一種重要的病毒性傳染病。該病的主要臨床表現(xiàn)為3～8周齡的雞突然死亡，初期診斷較為困難，一般無明顯的臨床癥狀，通常發(fā)病7天后，死亡率逐漸上升。2017年12月，四川省某養(yǎng)雞場飼養(yǎng)的肉雞突然出現(xiàn)精神萎靡不振、排黃綠色糞便、死亡等臨床癥狀，剖檢可見心包積液嚴(yán)重，腎臟和肺臟腫大，肝臟腫大、變色、壞死。取送檢的病料組織進行實驗室病毒分離和鑒定，通過分子生物學(xué)PCR檢測和核酸序列分析，最終確定該養(yǎng)雞場發(fā)生了血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染并分離到致病毒株，現(xiàn)將診斷過程報道如下。

1材料和方法

1.1 SPF雞與SPF雞胚

SPF雞及SPF雞胚購自濟南斯帕法斯家禽有限公司。

1.2臨床癥狀與病理變化觀察

觀察發(fā)病雞的臨床癥狀，并對病死雞進行解剖，觀察病理變化。

1.3病料樣品的采集與處理

無菌采集剖解雞的心包積液和肝臟組織作為臨床病料樣品，低溫運送至實驗室檢測。將病料樣品按3信體積的比例加滅菌生理鹽水，利用研磨器進行研磨，研磨后組織液反復(fù)凍融3次，采用12，000r/min離心10min，吸取上清液加入青、鏈霉素，4℃過夜，次日取病毒液進行病毒分離。

1.4病毒分離與雞胚病變觀察

將處理后的病料樣品通過卯黃囊途徑接種6日齡SPF雞胚10枚，同時取5枚SPF雞胚接種生理鹽水作為對照，37℃孵育168h，同時棄去24h內(nèi)死亡雞胚，記錄雞胚死亡時間，將24～168h死亡的雞胚放4℃保存，168h后對死亡雞胚全部解剖并觀察絨毛尿囊膜病變和雞胚發(fā)育情況，收集死亡雞胚的卯黃連續(xù)接種6日齡SPF雞胚并盲傳3代。

1.5 PCR檢測與序列鑒定

根據(jù)相關(guān)方法，設(shè)計合成1對Ⅰ群禽腺病毒檢測引物，利用病毒基因組DNA提取試劑盒提取臨床病料樣品和第3代分離毒的病毒基因組DNA，按照參考文獻中的PCR擴增程序進行PCR擴增，PCR擴增產(chǎn)物利用瓊脂糖凝膠電泳檢測，對特異性擴增片段利用膠回收試劑盒回收純化，將回收產(chǎn)物送生工生物工程（上海）股份有限公司進行序列測定，將測序結(jié)果利用Blast軟件與GenBank中登錄的序列進行比對。

2結(jié)果與分析

2.1臨床癥狀與病理變化觀察結(jié)果

病雞精神萎靡不振，排黃綠色糞便，發(fā)病雞死亡，剖檢可見心包積液嚴(yán)重，心包腔中有黃色透明的液體，肝臟出血、腫脹、腫大、變色、壞死。腎臟和肺臟腫大。

2.2病毒分離與雞胚病變觀察結(jié)果

10枚SPF雞胚接種后在64～96h死亡，盲傳3代后，死亡時間集中在48～72h，剖檢死亡雞胚均可見雞胚卯黃膜增厚，胚體較小且發(fā)育不良，羽毛稀少，體表發(fā)紅，尿囊液渾濁，個別雞胚有尿酸鹽沉積。對照組雞胚無死亡，發(fā)育良好，解剖無任何病變。

2.3 PCR檢測與序列鑒定結(jié)果

PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳，在位于約502bD處出現(xiàn)特異性DNA擴增條帶，與李天芝等專家的報道完全一致。PCR擴增產(chǎn)物的測序結(jié)果經(jīng)序列比對證實為血清4型FAV-Ⅰ特異性序列。

3討論

Ⅰ群禽腺病毒是腺病毒科禽腺病毒屬成員，可感染各種禽類并且各種日齡的禽類均易感，導(dǎo)致禽類生產(chǎn)性能下降和不同程度地死亡，給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。腺病毒在禽體內(nèi)是一種條件性病原體，一般情況下不表現(xiàn)臨床癥狀，但機體抵抗力低下時，特別是并發(fā)感染時，腺病毒會表現(xiàn)出嚴(yán)重的致病性。該病自2015年開始，在我國多地暴發(fā)并流行，該病主要侵害幼齡雞群，特別是3～8周齡育雛、育成期肉雞，病死率最高可達80%以上。Ⅰ群禽腺病毒對外界抵抗力不強，只要做好雞舍的消毒和日常管理，就可以減少病原體數(shù)量，防止病毒水平傳播。預(yù)防本病可以在雞群中適量補充微量元素和維生素B、C、K及魚肝油等，提高雞群免疫力，增強雞群抗病力。一旦有雞發(fā)病要采取隔離措施，種蛋也可能成為疾病傳播來源，要加強監(jiān)測，要做好引進種蛋和種雞的病原檢測和凈化，這對防止雞腺病毒感染十分重要。此外，控制好傳染性法氏囊病毒、雞傳染性貧血病毒等免疫抑制性病原也是預(yù)防禽腺病毒感染的重要手段。Ⅰ群禽腺病毒至少有12個血清型，血清型的復(fù)雜也增加了疫苗研制的難度。國內(nèi)目前還沒有商品化的疫苗用來防控禽腺病毒感染，但是各生物公司研制的滅活疫苗已經(jīng)處于臨床試驗階段，相信在不久就可以應(yīng)用于禽腺病毒防控之中。