寬葉重樓的生藥學(xué)研究

保山中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校中醫(yī)藥系，云南 保山 678000

重樓屬植物全世界共有24種，分布于亞歐大陸的熱帶和溫帶地區(qū)，我國有19種，以西南各省區(qū)的種類和資源最為豐富[1-2]，云南重樓資源最為豐富，有計(jì)16種，其種類多樣性居全國之首[3-4]。該屬植物多以根莖入藥，具有清熱解毒、熄風(fēng)定驚、消腫止痛之功效，在止血、抗腫瘤 、抗生育、免疫調(diào)節(jié)及心血管等方面也具有較好的生理活性[5-7]。但不同物種其化學(xué)成分和功用稍有差異，藥材的真?zhèn)沃苯雨P(guān)系到醫(yī)療效果。2015年版中國藥典收載的重樓為百合科植物云南重樓ParispolyphyllaSmith var.yunnanensis(Franch.)Hand. -Mazz.或七葉一枝花ParispolyphyllaSmith var.chinensis(Franch.)Hara的干燥根莖[8]，由于重樓自然生長速度十分緩慢，又長期依賴野生資源，加之主產(chǎn)區(qū)亂采濫挖，忽視對資源的保護(hù)和繁育，導(dǎo)致重樓資源匱乏，供需矛盾日益突出。為此尋找新藥源作為重樓的替代品勢在必行。寬葉重樓(ParispolyphyllaSmith var.latifoliaWangetChang)又名燈臺七、漏蘆(陜西)，蛇膀根(甘肅)，經(jīng)查閱文獻(xiàn)[9-11]，目前尚未見寬葉重樓的生藥學(xué)研究。本文對寬葉重樓的藥用部分進(jìn)行系統(tǒng)的生藥學(xué)研究，不僅有利于加強(qiáng)對藥材重樓的生藥鑒別，還為合理開發(fā)、利用和擴(kuò)大重樓屬植物的藥用資源提供依據(jù)，及寬葉重樓能否作為重樓屬基源植物的替代品種以提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 組織切片機(jī)(浙江金華無線電廠)，Olympus bx51TF生物數(shù)碼攝影顯微鏡，GoodLook-2000型薄層色譜成像系統(tǒng)(上?？普苡邢薰?。

1.2 材料 重樓皂苷I(批號：CLZI20160517)、重樓皂苷Ⅱ(批號：CLZII20151102)、重樓皂苷Ⅵ(批號：CLZVI20150715)、重樓皂苷Ⅶ(批號：為CLVII20161021)、重樓對照藥材均購自南京春秋生物工程有限公司。所用試劑均為分析純；水為超純水。

寬葉重樓藥材于2017年7月采集于云南省保山地區(qū)，樣品編號為20170705，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)張潔副教授鑒定為百合科(Liliaceae)重樓屬(Paris)植物寬葉重樓(ParispolyphyllaSmith var.latifoliaWangetChang)的根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 植物形態(tài) 多年生草本，植株高35～100 cm，無毛；根狀莖粗厚，直徑達(dá)1～2.5 cm，外面棕褐色，密生多數(shù)環(huán)節(jié)和許多須根。莖通常帶紫紅色，直徑(0.8～)1～1.5 cm，基部有灰白色干膜質(zhì)的鞘1～3枚。葉8～13(～22)枚，較寬，通常為倒卵狀披針形或?qū)捙樞?，長12～15 cm，寬2～4(～6)cm，先端漸尖，基部楔形，具短葉柄?；üｉL5～16(～30)cm；外輪花被片葉狀，5～7枚，狹披針形或卵狀披針形，長3～8 cm，寬(0.5～)1～1.5 cm，先端漸尖頭，基部漸狹或短柄；內(nèi)輪花被片狹條形，遠(yuǎn)比外輪花被片長；雄蕊7～14枚，花藥長5～8 mm，與花絲近等長；藥隔突出部分極短，長0.5～1 mm；子房近球形，暗紫色，花柱明顯，長3～5 mm，頂端具4～5分枝，幼果外面有疣狀突起，成熟后更為明顯[12]。如圖1所示。

2.2 性狀鑒別 根莖短，長1～3.5 cm，直徑0.5～1.5 cm，稍微彎曲，頂端殘留有鱗葉和莖基。藥材表面灰棕色或黃棕色，呈結(jié)節(jié)狀扁圓柱形，有層狀突起的環(huán)紋，多環(huán)節(jié)，結(jié)節(jié)上可見凹陷的莖痕及須根。質(zhì)地較硬，斷面粉性，呈白色或淺棕黃色。氣微，味微苦、麻。如圖2所示。

2.3 顯微鑒別

2.3.1 橫切面鑒別 表皮細(xì)胞1～2列，類圓形，外壁稍增厚，或稍向外凸出，排列比較整齊；皮層較寬，有時可見根跡維管束和葉跡維管束，細(xì)胞為不規(guī)則形或類圓形，細(xì)胞中充滿淀粉粒，粘液細(xì)胞中可見草酸鈣針晶束，皮層與中柱比為2∶1;內(nèi)皮層1列，細(xì)胞比較小；維管束為周木型維管束，外輪維管束稀少，為類圓形或不規(guī)則形，呈散狀排列，木質(zhì)部細(xì)胞大，內(nèi)分布有導(dǎo)管，呈連續(xù)環(huán)列或斷續(xù)于韌皮部的四周，韌皮部細(xì)胞小，排列比較緊密。如圖3所示。

2.3.2 粉末顯微鑒別 粉末為淺灰白色。淀粉粒眾多，多數(shù)為單粒，呈橢圓形、類圓形，有的臍點(diǎn)明顯，多為星狀、點(diǎn)狀或人字形，直徑約為2.20～13.67 μm；少數(shù)為復(fù)粒。草酸鈣針晶多呈束狀存在，比較細(xì)，少數(shù)為散狀分布，長為14.22～70.18 μm。薄壁細(xì)胞不規(guī)則形或類長圓形，內(nèi)富含淀粉粒?？梢娞菁y、螺紋、網(wǎng)紋導(dǎo)管，直徑約為10.65～32.06 μm。如圖4所示。

2.4 理化鑒別 取寬葉重樓粉末各0.5 g于圓底燒瓶中，加乙醇10 mL，加熱回流30 min，濾液作為供試品溶液。取重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.8 mg/mL的溶液及混合溶液作為對照品溶液，照2015年版中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，分別取供試品溶液和對照品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(15∶5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，在365 nm紫外下觀察，隨后噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，觀察薄層板并拍照。

結(jié)果表明，在日光下觀察，供試品溶液色譜中，與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上出現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；在紫外光下觀察，與重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ對照品溶液色譜相應(yīng)位置上出現(xiàn)相同顏色的熒光斑點(diǎn)，說明寬葉重樓中含有重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ這4種成分。如圖5所示。

3 討論

寬葉重樓藥材的主要鑒別點(diǎn)有：①在植物形態(tài)上，寬葉重樓與狹葉重樓植物形態(tài)很像，它們的共同點(diǎn)在于藥隔不外突或外突很短；花瓣絲狀，通常長于萼片；葉基楔形，無柄或具短柄。不同點(diǎn)在于寬葉重樓葉較寬，寬2～4(～6)cm；子房和果有粒狀小瘤。這也是寬葉重樓不同于其他重樓屬植物的特征所在。②在性狀鑒別上，主要的特征表現(xiàn)在表面顏色、形狀、環(huán)紋、斷面特征、氣味5個方面。經(jīng)查閱相關(guān)生藥學(xué)研究文獻(xiàn)。[13-15]，除了七葉一枝花具有斜向環(huán)節(jié)，跟其他重樓屬藥材沒有太大的差異。③在組織構(gòu)造上，重樓屬藥材的組織構(gòu)造很相似，都由表皮、皮層、粘液細(xì)胞、草酸鈣針晶與維管束構(gòu)成。有的表皮細(xì)胞排列不整齊，內(nèi)皮層不明顯，但寬葉重樓的表皮細(xì)胞排列整齊，內(nèi)皮層細(xì)胞明顯，皮層與中柱比為2:1，文獻(xiàn)[10]中，狹葉重樓、七葉一枝花、寬葉重樓的根狀莖橫切面的主要區(qū)別在于：狹葉重樓的上表皮多成圓形或棍棒狀，七葉一枝花的是三角形，寬葉重樓的是長方形或方形。④在粉末特征上，重樓屬藥材很相似，都含有淀粉粒、草酸鈣針晶與導(dǎo)管，無明顯差異。⑤在理化鑒別上，寬葉重樓含有重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ這4種成分。文獻(xiàn)說明[16-18]，含量上的差異是比較明顯的，重樓屬植物根莖中所含重樓皂苷有一定差異，其重樓皂苷含量還可能受產(chǎn)地的影響。根據(jù)查閱文獻(xiàn)[19]，不同的產(chǎn)地可能特征又有差異，也就是環(huán)境改變著植物體的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。此研究可為快速鑒定出寬葉重樓植物提供參考，還可為擴(kuò)大重樓屬藥用植物資源提供科學(xué)依據(jù)，是否能將寬葉重樓替代滇重樓或七葉一枝花入藥，將有待進(jìn)一步的科學(xué)驗(yàn)證。