密度儀在血液制品生產(chǎn)中的應(yīng)用

馬 杰 ，陳 川 ，郭 佳

（1四川大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院 四川 成都 610041）

（2成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司 四川 成都 610041）

密度儀在血液制品生產(chǎn)中的應(yīng)用

馬 杰1，陳 川2，郭 佳2

（1四川大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院 四川 成都 610041）

（2成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司 四川 成都 610041）

目的：通過(guò)測(cè)定供試品密度的物理性質(zhì)，建立一種密度與蛋白含量相關(guān)聯(lián)的測(cè)定方法，使生產(chǎn)過(guò)程中蛋白含量測(cè)定簡(jiǎn)便、快速，該方法在生產(chǎn)中質(zhì)量可控。方法：用凱氏定氮法分別十次測(cè)量同一批次人血白蛋白配制后原液、同一批次靜注人免疫球蛋白（pH4）配制后原液，分別取平均值，作為工作標(biāo)準(zhǔn)品，建立密度與蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果：利用密度儀測(cè)定人血白蛋白試驗(yàn)樣品，靜注人免疫球蛋白（pH4）試驗(yàn)樣品，各10個(gè)批次，并與凱氏定氮法測(cè)定結(jié)果對(duì)比，發(fā)現(xiàn)密度儀法測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好，RSD≤0.5%,與凱氏定氮法法對(duì)比，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為99%～101%。人血白蛋白實(shí)驗(yàn)品t雙尾檢驗(yàn)P=0.588，靜注人免疫球蛋白（pH4）實(shí)驗(yàn)品t雙尾檢驗(yàn)P=0.820。結(jié)論：在生產(chǎn)人血白蛋白、靜注人免疫球蛋白過(guò)程中，密度儀操作簡(jiǎn)便快捷，并與凱氏定氮法結(jié)果無(wú)顯著性差異，方便在生產(chǎn)過(guò)程中進(jìn)行質(zhì)量控制，大大的提高了工作效率，適合推廣應(yīng)用。

密度儀；蛋白含量；凱氏定氮法

1 引言

蛋白質(zhì)含量的質(zhì)量控制在人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）生產(chǎn)過(guò)程中是非常重要的，測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法主要有凱氏定氮法、福林酚法（Lowry法）、雙縮脲法、考馬斯亮藍(lán)法、紫外-可見(jiàn)分光光度法等[1]。凱氏定氮法作為藥典規(guī)定的方法，具有高準(zhǔn)確度和高精確度的特點(diǎn)，使該方法在血液制品生產(chǎn)過(guò)程中被廣泛使用，但凱氏定氮法試驗(yàn)操作復(fù)雜、繁瑣，周期長(zhǎng)、速度慢且使用的硫酸具有一定的腐蝕性會(huì)對(duì)試驗(yàn)人員具有一定的危害性，故無(wú)法滿足生產(chǎn)過(guò)程中蛋白含量的質(zhì)量控制。為了解決這一矛盾，筆者通過(guò)實(shí)驗(yàn)實(shí)踐，發(fā)現(xiàn)密度儀測(cè)定蛋白含量可以很好的解決這一問(wèn)題。

2 設(shè)備與材料

2.1 DMA4100M型密度儀，生產(chǎn)廠家：奧地利Anton paar。該密度儀利用U型振蕩管在電磁場(chǎng)的作用下，根據(jù)振蕩頻率的強(qiáng)弱測(cè)定溶液的密度。

2.2 人血白蛋白超濾配置后原液，通過(guò)低溫乙醇法分離精制超濾所得。

2.3 靜注人免疫球蛋白（pH4）超濾配置后原液，通過(guò)低溫乙醇法分離精制超濾所得。

2.4 人血白蛋白試驗(yàn)樣品。

2.5 靜注人免疫球蛋白（pH4）試驗(yàn)樣品。

3 方法

3.1 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線

將材料1.2和1.3分別進(jìn)行凱氏定氮法試驗(yàn)10次，得出結(jié)果取平均值，作為工作標(biāo)準(zhǔn)品，分別是工作標(biāo)準(zhǔn)品1，工作標(biāo)準(zhǔn)品2。將這兩個(gè)工作標(biāo)準(zhǔn)品各取50ml，用純化水1:1稀釋?zhuān)瑐溆谩８鶕?jù)密度儀產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，將工作標(biāo)準(zhǔn)品1注入密度儀中，輸入已知的蛋白含量值，然后將稀釋一倍的工作標(biāo)準(zhǔn)品1注入密度儀中，輸入蛋白含量值，這樣根據(jù)兩點(diǎn)確定一條直線的原理就建立了人血白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線。同理，可用工作標(biāo)準(zhǔn)品2和稀釋液建立靜注人免疫球蛋白（pH4）標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線精確度確認(rèn)

分別將工作標(biāo)準(zhǔn)品1、2用純化水進(jìn)行80%、70%、60%梯度稀釋?zhuān)缓笥脤?duì)應(yīng)的曲線檢測(cè)蛋白含量，所得結(jié)果和理論值對(duì)比。

3.3 重復(fù)性試驗(yàn)確認(rèn)

分別用相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)同一批次人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）實(shí)驗(yàn)樣品，各5次，所得結(jié)果求其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

3.4 用相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線分別檢測(cè)材料1.4和1.5各10個(gè)批次，所得結(jié)果與凱氏定氮法檢測(cè)結(jié)果相對(duì)比。

4 結(jié)果

4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線精確度確認(rèn)，結(jié)果如表1，表2。

表1 人血白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確度確認(rèn)結(jié)果

表2 靜注人免疫球蛋白（pH4）標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確度確認(rèn)結(jié)果

表1、表2說(shuō)明密度儀測(cè)定的人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）中間精密度高，回收率均在99%～101%。

4.2 重復(fù)性試驗(yàn)確認(rèn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3、表4。

表3 人血白蛋白重復(fù)性試驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果

表4 靜注人免疫球蛋白（pH4）重復(fù)性試驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果

表3、表4說(shuō)明密度儀測(cè)定的人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）重復(fù)性好、離散性小。

4.3 人血白蛋白試驗(yàn)樣品、靜注人免疫球蛋白（pH4）試驗(yàn)樣品各10個(gè)批次，分別用凱氏定氮法與密度儀法測(cè)定蛋白含量，結(jié)果如表5、表6。

表5 人血白蛋白兩種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

表6 靜注人免疫球蛋白（pH4）兩種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

表5、表6結(jié)果表明：凱氏定氮法檢測(cè)的人血白蛋白試驗(yàn)樣品和靜注人免疫球蛋白（pH4）的含量結(jié)果與密度儀檢測(cè)結(jié)果的回收率在99%～101%，回收率很好，表明密度儀檢測(cè)人血白蛋白與靜注人免疫球蛋白（pH4）重復(fù)性好，精準(zhǔn)度高。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別進(jìn)行t檢驗(yàn)，人血白蛋白P（雙尾）=0.588，靜注人免疫球蛋白（pH4）P（雙尾）=0.820，P〉0.05，t雙尾臨界=2.26，說(shuō)明密度計(jì)測(cè)定這兩種蛋白質(zhì)含量的結(jié)果是準(zhǔn)確可靠的。

5 討論

凱氏定氮法檢測(cè)蛋白質(zhì)含量是國(guó)際上公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法，具有準(zhǔn)確度高、精準(zhǔn)度高的特點(diǎn)，但也有操作復(fù)雜繁瑣、周期長(zhǎng)、速度慢等缺點(diǎn)。密度法測(cè)蛋白質(zhì)含量只需幾分鐘，可以大大提高蛋白質(zhì)檢測(cè)的效率，對(duì)血液制品生產(chǎn)過(guò)程中的超濾、濃縮、配制等過(guò)程質(zhì)量控制得到顯著提高。由于密度儀法精密度非常好，在生產(chǎn)過(guò)程中用密度法測(cè)定蛋白含量，還可以降低不同批次間的差異性，到達(dá)良好的成品分裝效果，保證產(chǎn)品不同批次之間的均一性。然而，密度儀法專(zhuān)屬性較差，如鈉離子含量，辛酸鈉含量，以及麥芽糖含量對(duì)密度影響較大，即使在相同蛋白含量下，隨著這些輔料、穩(wěn)定劑的增加，密度值也隨之增高，所以在制備標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，應(yīng)將各種輔料及穩(wěn)定劑配制成生產(chǎn)過(guò)程中制品配制的相似濃度，使制品除蛋白物質(zhì)以外其他成分含量一致，以排除非蛋白質(zhì)物質(zhì)的對(duì)實(shí)驗(yàn)、儀器的干擾。

[1]中華人民共和國(guó)藥典2015年版四部 [S].中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：96-98.

[2]楊曉東，張金，何彥林，張磷. 密度計(jì)在血液制品生產(chǎn)中的應(yīng)用 [J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，11(3)：72-73.

TQ464.56 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1009-5624（2018）01-0229-03