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    子宮平滑肌小窩蛋白表達(dá)與產(chǎn)后出血發(fā)病關(guān)系

    2018-12-27 01:35:44廖秋萍顏建英劉兆董羅金英
    關(guān)鍵詞:小窩信號轉(zhuǎn)導(dǎo)平滑肌

    廖秋萍 顏建英 劉兆董 羅金英

    目前,全世界范圍內(nèi)導(dǎo)致孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一是產(chǎn)后出血(Postpartum hemorrhage,PPH)。而宮縮乏力是導(dǎo)致產(chǎn)后出血的首要原因。目前認(rèn)為[1],小窩是細(xì)胞信號分子富集和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐。其主要的結(jié)構(gòu)蛋白是小窩蛋白(caveolin),調(diào)控許多關(guān)鍵信號分子的活性狀態(tài)。調(diào)控信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活性的分子通過聚集到細(xì)胞膜表面小窩,與小窩蛋白結(jié)合并相互作用,改變信號通路活性。其中子宮平滑肌細(xì)胞的興奮性是其調(diào)控終點之一。本研究通過檢測產(chǎn)婦子宮平滑肌小窩蛋白表達(dá)水平,探討其與宮縮乏力性產(chǎn)后出血發(fā)病的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 資料來源與分組

    選擇我院2012年10月—2015年10月行子宮下段剖宮產(chǎn)的產(chǎn)婦60例,分為研究組(宮縮乏力性產(chǎn)后出血組,n=30)和對照組(宮縮正常無產(chǎn)后出血組,n=30)。兩組產(chǎn)婦年齡、分娩次數(shù)、孕周、入院時BMI及入院時凝血功能指標(biāo)水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。宮縮乏力性產(chǎn)后出血診斷標(biāo)準(zhǔn)參照第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》[2],采用稱重法測量產(chǎn)后出血量。剖宮產(chǎn)指征為臍帶因素、社會因素。所有研究對象均獲知情同意后簽署知情同意書,并經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)。

    1.2 方法

    (1)標(biāo)本收集:在胎兒娩出后、處理宮縮乏力之前,切取少許子宮下段切口上緣子宮平滑肌組織。取組織約1.0 g用于蛋白提?。蝗〗M織約1 mm3大小,用于石蠟切片。

    (2)采用免疫熒光法觀察子宮平滑肌細(xì)胞小窩蛋白定位情況。采用TRITC標(biāo)記的二抗進(jìn)行試驗,采集紅色熒光圖片。用激光共聚焦顯微鏡觀察。

    (3)采用蛋白印跡法測定子宮平滑肌組織中小窩蛋白蛋白表達(dá)水平。結(jié)果計算:蛋白表達(dá)相對量=目的蛋白IOD值/內(nèi)參IOD值。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

    數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件包處理,計量資料比較采用t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組一般情況比較

    兩組產(chǎn)婦年齡、孕周、分娩次數(shù)、入院時BMI及入院時凝血功能指標(biāo)水平,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1,2。

    2.2 子宮平滑肌細(xì)胞小窩蛋白定位情況

    用激光共聚焦顯微鏡觀察到兩組產(chǎn)婦子宮平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞膜表面和細(xì)胞質(zhì)均可見紅色熒光,即表明子宮平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞膜表面和細(xì)胞質(zhì)均有小窩蛋白-1、小窩蛋白-2表達(dá)。

    表1 兩組產(chǎn)婦一般情況比較(±s)

    表1 兩組產(chǎn)婦一般情況比較(±s)

    組別 年齡(歲) 孕周(周) 分娩次數(shù) BMI(kg/m2)研究組 28.30±3.26 39.53±1.17 0.80±0.55 26.97±3.52對照組 27.13±3.17 39.73±0.98 0.68±0.61 25.78±2.80 t值 1.405 -0.719 -1.138 1.446 P值 0.165 0.475 0.260 0.154

    表2 兩組產(chǎn)婦入院時凝血功能指標(biāo)水平比較(±s)

    表2 兩組產(chǎn)婦入院時凝血功能指標(biāo)水平比較(±s)

    組別 凝血酶原時間PT(s) 國際標(biāo)準(zhǔn)化比值INR 活化部分凝血酶時間APTT(s) 凝血酶時間TT(s) 纖維蛋白原Fg(g/L)研究組 12.31±0.59 0.93±0.06 33.80±3.20 16.17±0.76 4.26±0.69對照組 12.00±0.59 0.90±0.04 33.19±2.39 16.19±0.75 4.54±0.59 t值 2.001 1.963 0.842 -0.129 -1.682 P值 0.051 0.054 0.403 0.898 0.098

    表3 小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達(dá)水平比較(±s)

    表3 小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達(dá)水平比較(±s)

    組別 小窩蛋白-1 小窩蛋白-2研究組 2 984.12±307.56 3 522.16±592.18對照組 2 554.66±406.49 2 780.75±592.18 t值 -4.625 -4.849 P值 0.000 0.000

    2.3 兩組產(chǎn)婦子宮平滑肌組織小窩蛋白表達(dá)水平比較

    研究組子宮平滑肌組織小窩蛋白-1和小窩蛋白-2蛋白水平均高于對照組(均P<0.05)。見表3及圖1。

    圖1 兩組產(chǎn)婦子宮平滑肌組織小窩蛋白-1和小窩蛋白-2蛋白檢測

    3 討論

    小窩是細(xì)胞質(zhì)膜向內(nèi)凹陷所形成的囊狀結(jié)構(gòu),其主要結(jié)構(gòu)蛋白是小窩蛋白。小窩作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐,許多細(xì)胞信號分子富集于小窩,并與小窩蛋白相互作用,導(dǎo)致其活性狀態(tài)改變[3]。有研究顯示,小窩是重要的信號平臺,調(diào)控許多信號通路上關(guān)鍵分子的活性,從而調(diào)節(jié)信號通路活性狀態(tài),改變細(xì)胞和組織功能[4]。小窩蛋白可分為1、2、3型,子宮平滑肌中主要為1、2型[5-6]。研究發(fā)現(xiàn)在鼠子宮平滑肌細(xì)胞中小窩結(jié)構(gòu)具有調(diào)控子宮平滑肌收縮活性的作用[7]。

    本研究采用免疫熒光技術(shù)證實子宮平滑肌細(xì)胞中含有小窩蛋白;進(jìn)一步采用蛋白印跡法進(jìn)行定量測定,發(fā)現(xiàn)宮縮乏力性產(chǎn)后出血產(chǎn)婦子宮平滑肌小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達(dá)均顯著高于對照組。提示小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達(dá)增加可能與宮縮乏力性產(chǎn)后出血的發(fā)生有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)[8]:在不同妊娠階段小鼠子宮平滑肌組織小窩蛋白表達(dá)量有所不同,在分娩期間小窩蛋白表達(dá)量下降,其原因可能是小窩蛋白在調(diào)節(jié)子宮平滑肌收縮活性方面起重要作用。Lorca RA等[9]認(rèn)為,小窩作為含有豐富膽固醇和鞘脂類細(xì)胞膜上微小結(jié)構(gòu),是信號蛋白分子聚集的“驛站”,具有調(diào)控細(xì)胞興奮性及細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用,從而調(diào)節(jié)子宮平滑肌細(xì)胞收縮活性;其重要機(jī)制之一是:作為調(diào)節(jié)子宮平滑肌細(xì)胞收縮的大電導(dǎo)鈣激活鉀通道能定位于小窩,并與小窩上的小窩蛋白-1和小窩蛋白-2結(jié)合并相互作用,調(diào)節(jié)子宮平滑肌細(xì)胞鉀離子電流,導(dǎo)致細(xì)胞膜電位改變,起到調(diào)節(jié)子宮平滑肌收縮的作用。近期有研究者總結(jié)出[10],小窩作為子宮平滑肌收縮活動性信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)樞紐,參與了肥胖孕婦因脂肪因子介導(dǎo)發(fā)生的早產(chǎn)與過期妊娠;并指出小窩可能是預(yù)防和治療肥胖孕婦早產(chǎn)、延期與難產(chǎn)的靶點之一。此外,最近研究表明,小窩蛋白可能是通過與雌激素受體相結(jié)合起到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐作用[11-12]。

    本研究從定性到定量研究揭示小窩蛋白可能參與宮縮乏力性產(chǎn)后出血的發(fā)病,但具體作用機(jī)制尚不明確。未來尚需進(jìn)一步深入研究其具體發(fā)病機(jī)制,從而為臨床防治該病拓展新思路。

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