復(fù)方丹參注射液對(duì)重癥急性胰腺炎肺損傷大鼠CYLD/NF-κB信號(hào)的影響*

馬 丹 包先麗 葉 霜 陶 然

（1.北京市和平里醫(yī)院，北京 100013；2.北京安貞醫(yī)院，北京 100029）

重癥急性胰腺炎（SAP）屬于臨床常見(jiàn)急性腹部病癥之一，不僅造成胰腺炎癥損傷，還會(huì)累及重要器官受損，其中急性肺損傷（ALI）在SAP早期最為常見(jiàn)，是導(dǎo)致SAP患者死亡的重要原因［1］，因此探究SAP-ALI發(fā)病機(jī)制，對(duì)于預(yù)防以及治療SAP-ALI，改善患者預(yù)后均十分重要。研究顯示核因子-κB（NF-κB）參與ALI的發(fā)生，抑制NF-κB通路后可減輕ALI炎癥損傷［2］。 圓柱瘤蛋白（CYLD）為 NF-κB 負(fù)調(diào)節(jié)因子，有學(xué)者研究顯示CYLD在ALI過(guò)程中發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用［3］。以上研究表明CYLD/NF-κB可能作為SAPALI治療靶點(diǎn)。本研究旨在探究復(fù)方丹參注射液對(duì)SAP-ALI大鼠的保護(hù)作用，以及在CYLD/NF-κB通路的作用機(jī)制。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF清潔級(jí)雄性SD大鼠購(gòu)自中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，體質(zhì)量 260 g，8～10周齡，合格證號(hào)：SYXK（京）2016-0013。

1.2 試藥與儀器

復(fù)方丹參注射液，四川升和藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20161016；地塞米松注射液，廣西萬(wàn)德藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20160918；蘇木素、伊紅染液購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；BCA蛋白測(cè)定試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司；山羊血清、5%脫脂牛奶購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；兔抗鼠 CYLD、p65、p-p65、IκBα、p-IκBα 抗體均購(gòu)自美國(guó) Sigma-Aldrich 公司；TNF-α、IL-1β、IL-6 酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒購(gòu)自美國(guó)Rche公司。低溫離心機(jī)購(gòu)于Eppendorf公司；倒置顯微鏡、凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自日本Olympus公司。

1.3 模型制備

根據(jù)文獻(xiàn)法［4］制備SAP-ALI大鼠，制備前大鼠自由飲水，禁食12 h，腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉，隨后固定于手術(shù)臺(tái)，常規(guī)消毒、鋪巾后，于腹正中做一切口，暴露十二指腸，并將其提出體外，識(shí)別胰膽管匯入十二指腸系膜乳頭開(kāi)口處，在其下緣腸壁處選取無(wú)血管區(qū)，用注射器針頭穿刺后，將5 cm硬膜外導(dǎo)管置入，朝向開(kāi)口方向緩慢推進(jìn)5 cm后，縫扎胰膽管下段以及硬膜外導(dǎo)管，于導(dǎo)管末端連接輸液轉(zhuǎn)換器，泵入5%0.1 mL/kg牛黃膽酸鈉，流速控制在0.2 mL/min，2 min后見(jiàn)胰膽管以及主胰管擴(kuò)張后，維持10 min，將縫扎線(xiàn)去除，并將導(dǎo)管退出，封閉穿刺孔，復(fù)位十二指腸后逐層關(guān)腹。假手術(shù)組僅翻動(dòng)十二指腸、胰腺，不穿刺注藥。造模后48 h內(nèi)觀察到大鼠進(jìn)食減少、飲水增多、毛色灰暗、背部弓起、耳緣靜脈突起加粗，并伴有眼球變濁暗淡等癥狀，同時(shí)肺部聽(tīng)診可聞雜音，且呼吸急促，則判定造模成功。共60只大鼠造模成功。

1.4 分組及給藥

造模后，將模型制備成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、SM低、中、高劑量組、地塞米松組，每組12只。造模后6 h后開(kāi)始給藥，復(fù)方丹參注射液（SM）低、中、高劑量組：經(jīng)尾靜脈注射 3、6、12 mL/kg，每日 1 次，連續(xù)給藥7 d。地塞米松組：經(jīng)尾靜脈注射地塞米松2 mg/kg，每日1次，連續(xù)給藥7 d。模型組：將等劑量生理鹽水以相同的方法進(jìn)行尾靜脈注射，每日1次，連續(xù)注射7 d。

1.5 標(biāo)本采集與檢測(cè)

末次給藥后6 h，大鼠經(jīng)腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉，處死后，抽取腹水，采集腹動(dòng)脈血3 mL，獲取左肺進(jìn)行支氣管肺泡灌洗（BAL）；同時(shí)獲得右肺上葉組織，置于PBS溶液中洗滌后置于4%多聚甲醛中固定；取右肺中葉以評(píng)估肺濕/干質(zhì)量比；迅速切除胰腺、右肺下葉組織，凍存于-80℃，進(jìn)行后續(xù)蛋白免疫印跡分析等。

1.5.1 胰腺、肺組織病理學(xué)檢查 將右肺上葉組織置于4%多聚甲醛中固定24 h，石蠟包埋制備5 μm切片。脫蠟、脫水后，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色后，于顯微鏡下進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。收集圖像后參考Schmidt病理評(píng)分法［5］，對(duì)胰腺組織進(jìn)行評(píng)分。0分表示無(wú)明顯病理學(xué)變化，1分表示水腫局限或彌漫性葉間隙擴(kuò)張、2～10個(gè)小葉或血管周?chē)霈F(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；2分表示水腫擴(kuò)張至小葉間，11～20個(gè)小葉或血管周?chē)霈F(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；3分表示水腫呈彌漫性間隙擴(kuò)張，21～30個(gè)小葉或血管周?chē)霈F(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；4分表示水腫呈彌漫性間隙擴(kuò)張，超過(guò)30個(gè)小葉或血管周?chē)霈F(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。采用Holfbauer評(píng)分法［6］對(duì)肺組織病理情況進(jìn)行評(píng)分，主要從水腫、出血、炎癥浸潤(rùn)等進(jìn)行評(píng)定：肺部無(wú)病變?yōu)?分；25%視野出現(xiàn)以上病變?yōu)?分，50%視野出現(xiàn)病變?yōu)?分，75%視野存在以上病變?yōu)?分；整個(gè)視野均出現(xiàn)以上病變?yōu)?分。

1.5.2 腹水量、肺組織干濕比重測(cè)定 處死大鼠后，抽取腹水，觀察顏色，并對(duì)體積進(jìn)行測(cè)定；取胰腺、右下葉肺組織置于電子天平中稱(chēng)重，此時(shí)所測(cè)質(zhì)量為濕重，置于80℃恒溫箱內(nèi)烘烤，直至質(zhì)量不再發(fā)生變化，此時(shí)所測(cè)重量為干重，計(jì)算干濕重比值（W/D）。

1.5.3 動(dòng)脈血?dú)庵笜?biāo)測(cè)定 采用全自動(dòng)血?dú)夥治鰴z測(cè)儀檢測(cè)腹動(dòng)脈血中氧分壓（PaO2）、二氧化碳分壓（PaCO2），計(jì)算氧合指數(shù)（OI）。

1.5.4 蛋白免疫印跡法檢測(cè)CYLD/NF-κB信號(hào)通路蛋白檢測(cè) 取出保存肺組織，添加RIPA裂解緩沖液，提取總蛋白。BCA蛋白測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。SDS-PAGE電泳結(jié)束后，轉(zhuǎn)移至PDVF膜上。置于4℃下加入一抗孵育過(guò)夜。洗滌后加入二抗常溫孵育3 h。采用化學(xué)發(fā)光試劑顯影后，使用Quantity One軟件分析相對(duì)蛋白表達(dá)水平。

1.5.5 免疫組化檢測(cè)CYLD/NF-κB信號(hào)通路蛋白表達(dá) 常規(guī)制備肺組織石蠟切片（4 μm），脫蠟脫水后置于檸檬酸鈉中孵育20 min，添加3%過(guò)氧化氫中孵育10 min，10%山羊血清孵育30 min。加入一抗后置于4℃孵育過(guò)夜。將PBS孵育的切片作為陰性對(duì)照，添加二抗孵育30 min，隨后添加鏈霉親和素過(guò)氧化物酶孵育15 min。然后用PBS洗滌后添加DAB溶液，顯微鏡下觀察顯色后水洗，添加蘇木精進(jìn)行復(fù)染，氨水返藍(lán)后用自來(lái)水沖洗，添加二甲苯透明處理，并用中性樹(shù)脂封片，顯微鏡下進(jìn)行觀察肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，標(biāo)尺為100 μm。

1.5.6 大鼠BAL中性粒細(xì)胞（PMN）計(jì)數(shù) 將收集的BAL置于4℃、3000 r/min離心10 min后，保存上清液。利用血細(xì)胞自動(dòng)分析儀對(duì)BAL中PMN進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.5.7 BAL 中 TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、SOD、MDA 含量測(cè)定 收集 BAL， 參照 TNF-ɑ、IL-1β、IL-6 ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作；采用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA水平；亞硝酸鹽法測(cè)定SOD水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 各組胰腺、肺組織病理性形態(tài)學(xué)觀察

HE染色顯示假手術(shù)組胰腺組織細(xì)胞正常，間質(zhì)未出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、充血以及壞死組織；模型組胰腺腺泡細(xì)胞出現(xiàn)大量壞死，結(jié)構(gòu)模糊、融合至一片，小葉結(jié)構(gòu)模糊，出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，間隔明顯變寬；見(jiàn)圖1。SM組、地塞米松組均得到明顯改善，且隨著處理計(jì)量的增加，組織逐漸恢復(fù)正常。假手術(shù)組肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺間質(zhì)未出現(xiàn)水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等；模型組肺泡壁變厚、間隔變寬，肺間質(zhì)充血伴隨炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，SM組、地塞米松組均得到明顯改善，且隨著處理計(jì)量的增加，組織逐漸恢復(fù)正常。見(jiàn)圖2。

圖1 各組胰腺組織病理學(xué)檢查（HE染色，100倍）

圖2 各組肺組織病理學(xué)檢查（HE染色，200倍）

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠胰腺、肺組織病理評(píng)分升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，SM組、地塞米松組胰腺、肺組織病理評(píng)分均降低，隨著給藥劑量的升高，胰腺、肺組織病理評(píng)分逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠胰腺組織、肺組織病理評(píng)分比較（分，±s）

表1 各組大鼠胰腺組織、肺組織病理評(píng)分比較（分，±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。下同

組 別 n 肺組織病理評(píng)分 胰腺組織病理評(píng)分假手術(shù)組 1 2 0.3 2±0.0 5 0.2 9±0.0 6模型組 1 2 3.8 1±0.6 4* 7.4 3±1.0 5*S M低劑量組 1 2 2.9 5±0.5 2△ 6.2 2±0.8 4△S M中劑量組 1 2 2.3 4±0.6 1△ 4.5 1±0.5 7△S M高劑量組 1 2 1.0 6±0.2 8△ 2.2 7±0.2 9△地塞米松組 1 2 0.7 4±0.1 7△ 1.7 8±0.3 6△

2.2 各組大鼠腹水量、W/D、PMN比較

見(jiàn)表2。與假手術(shù)組比較，模型組腹水量、胰腺、肺組織W/D均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組相比，地塞米松組、SM各組腹水量、胰腺、肺組織W/D降低，具有劑量依賴(lài)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 各組腹水量、W/D、PMN水平比較（±s）

表2 各組腹水量、W/D、PMN水平比較（±s）

組 別 n 腹水量（m L）胰腺（W/D） 肺組織（W/D）假手術(shù)組 1 2 0.6 8±0.1 2模型組 1 2 1 0.3 5±2.3 8*4.3 2±0.3 8 4.5 2±0.3 8 7.4 6±0.6 9* 6.4 2±0.3 9*S M低劑量組 1 2 9.1 7±1.0 8△S M中劑量組 1 2 7.5 4±0.6 1△6.3 8±0.4 5△ 5.6 3±0.4 1△5.3 9±0.3△ 5.0 7±0.3 2△S M高劑量組 1 2 6.1 7±0.8 7△4.1 5±0.2 9△ 4.6 8±0.3 7△地塞米松組 1 2 5.2 6±0.7 4△3.8 6±0.4 2△ 4.1 6±0.3 9△

2.3 各組動(dòng)脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)比較

見(jiàn)表3。與假手術(shù)組比較，模型組PaCO2升高，PaO2、OI降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，地塞米松組、SM各組PaCO2降低，PaO2、OI升高，具有劑量依賴(lài)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 各組大鼠 PaCO2、PaO2、OI水平比較（mmHg，±s）

表3 各組大鼠 PaCO2、PaO2、OI水平比較（mmHg，±s）

組別 n P a O 2 P a C O 2 O I假手術(shù)組 1 2 9 5.7 2±2.5 8模型組 1 2 5 3.0 6±3.5 3*3 2.2 9±1.8 8 4 4 9.3 6±7.1 8 5 7.5 7±2.6 1* 2 9 2.7 6±8.4 6*S M低劑量組 1 2 6 4.2 2±2.5 9△S M中劑量組 1 2 7 8.1 4±2.2 6△4 6.8 7±2.3 9△ 3 2 5.3 9±6.5 7△3 8.1 3±2.2 4△ 3 7 7.1 2±7.5 6△S M高劑量組 1 2 8 5.1 7±2.4 4△3 1.5 8±1.8 7△ 3 8 9.6 3±8.0 3△地塞米松組 1 2 8 7.6 6±1.5 1△3 0.7 3±1.6 4△ 3 5 7.2 3±9.1 8△

2.4 各組大鼠肺組織CYLD、NF-κB通路蛋白檢測(cè)比較

見(jiàn)圖3、表4。與假手術(shù)組比較，模型組p-p65、p-IκBα蛋白表達(dá)升高，CYLD蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，地塞米松組、SM各組p-p65、p-IκBα蛋白表達(dá)降低，CYLD蛋白表達(dá)升高，具有劑量依賴(lài)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各組間p65、IκBα蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖3 各組CYLD、NF-κB通路蛋白表達(dá)

表4 各組大鼠肺組織 p65、p-p65、IκBα、p-IκBα、CYLD通路蛋白比較（±s）

表4 各組大鼠肺組織 p65、p-p65、IκBα、p-IκBα、CYLD通路蛋白比較（±s）

組 別 n假手術(shù)組 1 2模型組 1 2 S M低劑量組 1 2 p-I κ B α C Y L D 0.1 2±0.0 3 1.0 5±0.1 9 0.7 2±0.0 8* 0.3 6±0.0 8*0.5 5±0.0 9△ 0.4 5±0.0 6△S M 中劑量組 1 2 0.7 2±0.1 2 0.6 4±0.0 8△ 0.7 3±0.1 2 0.4 2±0.0 7△ 0.5 8±0.1 1△S M 高劑量組 1 2 0.7 4±0.1 5 0.5 2±0.0 7△ 0.7 5±0.1 1 0.3 1±0.0 5△ 0.7 1±0.1 4△地塞米松組 1 2 0.7 1±0.7 0.4 3±0.0 8△ 0.7 6±0.1 2 0.2 5±0.0 4△ 0.9 7±0.1 2△p 6 5 p-p 6 5 I κ B α 0.6 7±0.0 9 0.1 5±0.0 3 0.7 6±0.0 6 0.6 9±0.1 1 1.0 8±0.1 5* 0.7 2±0.0 9 0.7 1±0.1 4 0.8 9±0.1 1△ 0.7 4±0.1 8

2.5 大鼠肺組織CYLD、NF-κB通路蛋白陽(yáng)性表達(dá)率檢測(cè)比較

見(jiàn)圖4～圖6、表5。與假手術(shù)組比較，模型組pp65、p-IκBα蛋白陽(yáng)性表達(dá)率升高，CYLD蛋白陽(yáng)性表達(dá)率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組相比，地塞米松組、SM各組p-p65、p-IκBα蛋白陽(yáng)性表達(dá)率降低，CYLD蛋白陽(yáng)性表達(dá)率升高，具有劑量依賴(lài)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖4 各組p-p65在肺組織中的表達(dá)（免疫組化染色，400倍）

圖5 各組p-IκBα在肺組織中的表達(dá)（免疫組化染色，400倍）

圖6 各組CYLD在肺組織中的表達(dá)（免疫組化染色，400倍）

表5 各組p-p65、p-IκBα、CYLD 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較（%，±s）

表5 各組p-p65、p-IκBα、CYLD 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較（%，±s）

組別 n p-p 6 5 p-I κ B α C Y L D假手術(shù)組 1 2 1 1.3 5±1.4 1模型組 1 2 4 2.8 6±5.4 7*2 2.6 8±1.5 6 3 9.7 2±1.2 6 4 6.3 5±3.7 8* 1 2.1 6±1.3 4*S M低劑量組 1 2 3 2.3 1±3.8 2△S M中劑量組 1 2 2 6.0 5±4.7 3△3 4.5 6±3.5 1△ 1 9.3 7±2.3 8△2 3.3 5±3.0 1△ 2 7.9 7±1.5 9△S M高劑量組 1 2 2 0.2 7±2.1 8△1 5.6 2±2.3 9△ 2 1.2 7±1.9 2△地塞米松組 1 2 1 9.4 5±2.3 2△1 4.3 6±2.3 4△ 2 0.6 4±1.1 5△

2.6 各組大鼠肺組織中 TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、SOD、MDA水平比較

見(jiàn)表6。與假手術(shù)組比較，模型組PMN、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、MDA水平升高，SOD水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組相比，地塞米松組、SM各組 PMN、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平降低，SOD水平升高，具有劑量依賴(lài)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

本研究通過(guò)逆行胰膽管穿刺法制備SAP-ALI模型，結(jié)果顯示胰腺、肺組織病理評(píng)分、腹水量、胰腺、肺組織 W/D、PaCO2均升高，PaO2、OI降低，HE 染色顯示胰腺腺泡細(xì)胞大量壞死，出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；肺泡壁變厚、間隔變寬，肺間質(zhì)充血伴隨炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。表明模型大鼠胰腺、肺組織均出現(xiàn)嚴(yán)重炎癥性損傷和組織病理改變，提示動(dòng)物模型制備成功。因此，改善SAPALI關(guān)鍵在于控制肺組織炎癥反應(yīng)。

表6 各組大鼠肺組織中 PMN、TNF-α、IL-1β、IL-6、SOD、MDA 水平測(cè)定比較（±s）

表6 各組大鼠肺組織中 PMN、TNF-α、IL-1β、IL-6、SOD、MDA 水平測(cè)定比較（±s）

組 別 n假手術(shù)組 1 2模型組 1 2 S M低劑量組 1 2 I L-1 β（n g/m L）0.2 4±0.0 3 0.7 1±0.0 6*0.5 3±0.0 6△S M 中劑量組 1 2 1.5 6±0.2 4△ 1.3 0±0.1 9△ 0.6 9±0.0 8△ 0.4 1±0.0 7△S M 高劑量組 1 2 1.0 3±0.2 3△ 1.1 5±0.1 7△ 0.5 3±0.0 9△ 0.3 2±0.0 5△地塞米松組 1 2 0.7 9±0.1 4△ 1.0 9±0.0 8△ 0.4 6±0.0 5△ 0.2 7±0.0 3△P M N（×1 0 7/L）T N F-α（n g/m L）I L-6（n g/m L）0.7 5±0.1 3 0.8 8±0.1 3 0.3 6±0.0 4 2.9 2±0.3 5* 1.8 3±0.4 5* 0.9 8±0.1 1*2.1 4±0.2 8△ 1.4 2±0.3 3△ 0.8 4±0.1 2△S O D（n g/m L）M D A（n g/m L）1 7.8 8±4.2 6 7.8 6±1.3 9 8.5 3±0.6 1* 3 3.8 7±2.1 7*9.4 9±1.5 3△ 2 1.2 9±3.4 6△1 1.7 9±2.8 2△ 1 6.4 9±2.3 2△1 3.7 8±2.6 6△ 1 2.3 2±2.2 9△1 3.9 6±2.1 8△ 1 0.6 5±1.9 8△

丹參為復(fù)方丹參注射液的主要成分，臨床藥理試驗(yàn)均證實(shí)丹參具有抗血栓、抗氧化、抗心肌缺血、調(diào)節(jié)血脂的功效，一般用于冠心病、心肌梗死、腦缺血等心腦血管疾?。?-8］。近期研究顯示其也可用于在肺部病變治療，陳杰文等研究顯示丹參可通過(guò)抗氧化作用改善微循環(huán)，降低血清中炎癥因子濃度，進(jìn)而緩解肺損傷［9］。杜識(shí)博等研究顯示，丹參可通過(guò)降低CRP等炎性物質(zhì)的產(chǎn)生，減輕患者局部炎癥損傷，改善肺功能［10］。以上臨床研究均提示丹參對(duì)ALI具有一定的保護(hù)作用。但有關(guān)丹參在SAP-ALI的作用機(jī)制目前尚不清楚。本研究結(jié)果顯示給予復(fù)方丹參液治療后SAP-ALI大鼠胰腺、肺組織損傷有所改善，腹水量、胰腺、肺組織W/D、PaCO2均降低，PaO2、OI升高，提示復(fù)方丹參注射液對(duì)SAP-ALI肺組織損傷具有改善作用，但其作用機(jī)制尚不明確。

研究顯示NF-κB信號(hào)通路激活在ALI中占有重要地位，抑制該通路的活化可能為治療ALI的靶點(diǎn)［11］。NF-κB一般情況下被IκBα抑制，以非活性狀態(tài)存在于細(xì)胞質(zhì)中，在外界刺激下IκB發(fā)生磷酸化被激活，NF-κB抑制作用被解除，磷酸化后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，促進(jìn)靶基因的轉(zhuǎn)錄［12-13］。蘇中昊等研究顯示內(nèi)毒素致ALI大鼠NF-κB激活后可導(dǎo)致肺組織損傷，而經(jīng)宣白承氣湯治療后可明顯緩解肺損傷［14］。馮洋等研究顯示阻斷NF-κB 信號(hào)通路激活后，可預(yù)防 ALI的發(fā)生、發(fā)展［15］。本研究結(jié)果顯示模型組大鼠p-p65、p-IκBα蛋白表達(dá)升高，說(shuō)明NF-κB通路被激活，給予復(fù)方丹參注射液后，大鼠p-p65、p-IκBα蛋白表達(dá)明顯降低，表明復(fù)方丹參注射液可能通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路活性，緩解肺部炎癥損傷。CYLD為腫瘤抑制蛋白，研究顯示CYLD蛋白功能缺失后會(huì)導(dǎo)致NF-κB信號(hào)通路過(guò)度激活，進(jìn)而導(dǎo)致各種炎癥的發(fā)生［16］。CYLD能夠?qū)⒎核鼗孜镏械亩嗑鄯核劓溄獬虼似淇梢种?IκBα激酶復(fù)合物，進(jìn)而抑制NF-κB信號(hào)通路激活，為該信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子［17］。近期研究顯示抑制CYLD后可引發(fā)SAP-ALI，進(jìn)而引發(fā)炎癥反應(yīng)［18］。本研究顯示模型組大鼠蛋白表達(dá)降低，給予復(fù)方丹參注射液后，CYLD蛋白明顯升高，提示復(fù)方丹參注射液可能通過(guò)激活CYLD蛋白活性，抑制NF-κB信號(hào)通路，緩解肺部炎癥損傷。

PMN浸潤(rùn)與肺組織炎癥性損傷密切有關(guān)，抑制PMN可顯著降低動(dòng)物模型中的肺損傷嚴(yán)重程度［19］。肺泡巨噬細(xì)胞是肺組織中先天性免疫細(xì)胞，可產(chǎn)生過(guò)量的TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎性細(xì)胞因子，引發(fā)炎癥反應(yīng)［20］。SOD屬于機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶，主要作用為清除體內(nèi)多余的自由基，MDA反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接地反映出組織損傷的程度［21］。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組BAL中PMN數(shù)量顯著升高，且肺組織TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平顯著增加，SOD 水平明顯降低，進(jìn)一步證實(shí)SAP-ALI大鼠肺組織炎性損傷。經(jīng)復(fù)方丹參注射液治療后，BAL中炎癥細(xì)胞因子水平、MDA均顯著降低，SOD水平顯著升高，提示復(fù)方丹參注射液可能通過(guò)減少肺組織中炎癥細(xì)胞因子，抑制肺組織中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，緩解氧化應(yīng)激作用，從而減輕肺組織炎癥反應(yīng)，緩解肺組織損傷。

綜上所述，復(fù)方丹參注射液能夠緩解SAP-ALI肺部炎癥損傷，同時(shí)激活CYLD蛋白表達(dá)，抑制NF-κB號(hào)通路活性，推測(cè)復(fù)方丹參注射液改善SAP-ALI肺損傷可能與激活CYLD蛋白、抑制NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。但SAP-ALI肺損傷機(jī)制較復(fù)雜，本研究中復(fù)方丹參注射液僅能部分緩解肺組織炎癥反應(yīng)，而非逆轉(zhuǎn)SAP-ALI引發(fā)肺損傷，這可能還與其他因素有關(guān)，需要深入探究，以期為疾病的治療提供更有力依據(jù)。