血清學(xué)指標(biāo)對(duì)胃癌及萎縮性胃炎患者臨床診斷價(jià)值研究

侯陳鳳 賈杰　余炳取　鄭娟紅　趙茂森

[摘要] 目的 研究血清學(xué)指標(biāo)對(duì)胃癌及萎縮性胃炎患者臨床診斷價(jià)值。 方法 選取2013年2月～2016年2月間在本院胃鏡室進(jìn)行檢測(cè)患者282例，根據(jù)最終診斷把患者分成5組：胃癌組（50例）、淺表性胃炎組（99例）、胃潰瘍組（38例）、胃息肉組（38例）和萎縮性胃炎組（57例），選取同期在本院體檢健康者100例作為對(duì)照組，采用乳膠增強(qiáng)免疫比濁法對(duì)PGⅠ和PGⅡ進(jìn)行定量檢測(cè)，ELISA法檢測(cè)血清TK1水平，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清CA72-4水平。結(jié)果 胃癌組血清TK1及CA72-4含量明顯高于其他各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；胃潰瘍組血清PGⅠ含量比對(duì)照組高，胃癌組和萎縮胃炎組則低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；胃癌組與萎縮胃炎組在PCR含量上對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但胃癌組比其他各組要高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；血清TK1、PGⅠ及CA72-4含量異常為胃癌發(fā)生危險(xiǎn)因素，PGⅠ呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，TK1及CA72-4呈現(xiàn)正相關(guān)；不同檢測(cè)方式中TK1+CA72-4方式準(zhǔn)確度、特異度最高，四項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)敏感度最高。 結(jié)論 血清TK1、PGⅠ及CA72-4含量異常為胃癌發(fā)生危險(xiǎn)因素，PGⅠ呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，TK1及CA72-4呈現(xiàn)正相關(guān)，PGR及PGⅠ檢測(cè)對(duì)胃癌和萎縮性胃炎有重要診斷價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；萎縮性胃炎；血清學(xué)指標(biāo)；診斷價(jià)值

[中圖分類號(hào)] R573.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）26-0042-04

Study on the clinical diagnostic value of serological indices in the patients with gastric cancer and atrophic gastritis

HOU Chenfeng JIA Jie YU Bingqu ZHENG Juanhong ZHAO Maosen

Department of Gastroenterology， Wenzhou Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine in Zhejiang Province， Wenzhou 325000， China

[Abstract] Objective To study the clinical diagnostic value of serological markers in the patients with gastric cancer and atrophic gastritis. Methods A total of 282 patients who were examined in the gastroscopy room in our hospital from February 2013 to February 2016 were selected. According to the final diagnosis， the patients were divided into 5 groups： gastric cancer group （50 cases）， superficial gastritis group （99 cases）， gastric ulcer group （38 cases）， gastric polyps group （38 cases） and atrophic gastritis group （57 cases）. In the same period， 100 healthy subjects in our hospital were selected as the control group. The latex-enhanced immunoturbidimetry was used to quantitatively detect PG I and PG II. Serum TK1 levels were detected by ELISA. The level of serum CA72-4 was detected by electrochemiluminescence. Results The levels of serum TK1 and CA72-4 in gastric cancer group were significantly higher than those in other groups， and the difference was statistically significant（P<0.05）； serum PG I levels in the gastric ulcer group were higher than those in the control group， and the gastric cancer group and atrophic gastritis group were lower than the control group. The differences were statistically significant（P<0.05）； there was no statistically significant difference in the content of PCR between gastric cancer group and atrophic gastritis group（P>0.05）. However， the gastric cancer group was higher than other groups， and the differences were statistically significant（P<0.05）； abnormal serum levels of TK1， PG I， and CA72-4 were risk factors for gastric cancer. PG I was negatively correlated， and TK1 and CA72-4 were positively correlated； the accuracy and specificity of the TK1+CA72-4 method were the highest in different detection methods. The sensitivity of the four joint detections was the highest. Conclusion Abnormal serum levels of TK1， PG I and CA72-4 are risk factors for gastric cancer. PG I is negatively correlated， and TK1 and CA72-4 are positively correlated. PGR and PG I detection have an important diagnostic value for gastric cancer and atrophic gastritis.

[Key words] Gastric cancer； Atrophic gastritis； Serological indicators； Diagnostic value

胃癌是臨床較為常見腫瘤之一，患者前期癥狀不易被發(fā)覺，當(dāng)確診時(shí)多數(shù)已經(jīng)處于中期或晚期，治療以后患者預(yù)后情況比較差[1]。雖然目前臨床放、化療及手術(shù)治療的水平有了很大提升，但還達(dá)不到根治腫瘤的目的，患者手術(shù)以后可能出現(xiàn)轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)。當(dāng)前診斷胃癌一般依靠病理學(xué)、胃鏡和影像學(xué)檢測(cè)，但以上檢測(cè)手段都有一定局限，不適合在人群中廣泛使用，而腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)給人們提供了新的思路。相關(guān)血清指標(biāo)檢測(cè)沒有侵入性，操作較簡單，可在前期診斷、健康人普查及高危人群篩查中廣泛使用[2-3]。因此，本文通過探究血清細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶（Thymidine kinase1，TK1）、糖類抗原72-4（Carbohydrate antigens72-4，CA72-4）及胃蛋白酶原（Pepsinogen，PG）在不同病理類型的胃病者和健康者內(nèi)水平情況，評(píng)價(jià)其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌和萎縮性胃炎患者臨床的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年2月～2016年2月間在本院胃鏡室進(jìn)行檢測(cè)患者282例，其中男145例，女137例，平均年齡（58.2±11.7）歲；依據(jù)《中國慢性胃炎共識(shí)意見》[4]對(duì)患者進(jìn)行診斷，必要時(shí)對(duì)患者進(jìn)行病理檢測(cè)；根據(jù)最終診斷把患者分成5組：胃癌組（50例）中，男27例，女23例，平均年齡（61.7±10.4）歲；淺表性胃炎組（99例）中，男42例，女57例，平均年齡（56.9±11.7）歲；胃潰瘍組（38例）中，男21例，女17例，平均年齡（58.4±12.9）歲；胃息肉組（38例）中，男23例，女15例，平均年齡（59.1±15.4）歲；萎縮性胃炎組（57例）中，男32例，女25例，平均年齡（58.5±10.1）歲；選取同期在本院體檢健康者100例作為對(duì)照組，其中男48例，女52例，平均年齡（57.1±14.2）歲；以上六組對(duì)象在年齡和性別方面對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情并同意。

1.2 主要儀器和試劑

試劑：胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）試劑盒（北京九強(qiáng)生物公司生產(chǎn)）、TK1試劑盒（武漢華美生物公司生產(chǎn)）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）試劑盒（由北京九強(qiáng)生物公司生產(chǎn)）、CA72-4試劑盒（德國羅氏公司生產(chǎn)）；

儀器：貝克曼AU5800型全自動(dòng)生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)）、半自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國賽默飛世爾公司生產(chǎn)）、常溫離心機(jī)（上海天呈公司生產(chǎn)）、恒溫箱（北京科偉永興公司生產(chǎn)）、羅氏e601型電化學(xué)發(fā)光儀（德國羅氏公司生產(chǎn)）、4℃及-20℃冰箱（青島海爾公司生產(chǎn)）、微型振蕩器（北京百萬電子科技中心生產(chǎn)）、洗板機(jī)（美國賽默飛世爾公司生產(chǎn)）、低溫高速離心機(jī)（德國Heraeus公司生產(chǎn)）。

1.3 研究方法

收集六組對(duì)象早晨空腹靜脈血5 mL，離心機(jī)3000 rmp，離心8 min，取上清液存入EP管內(nèi)，放置在-20℃冰箱待測(cè)。采用乳膠增強(qiáng)免疫比濁法對(duì)PGⅠ和PGⅡ進(jìn)行定量檢測(cè)，基于乳膠凝集抑制原理進(jìn)行，標(biāo)本中沒有PGⅠ和PGⅡ時(shí)，PGⅠ或PGⅡ多聚物和特異鼠抗人PGⅠ或PGⅡ單克隆抗體包被膠乳發(fā)生凝聚反應(yīng)，吸光度上升，標(biāo)本內(nèi)存在PGⅠ或PGⅡ時(shí)，和PGⅠ或PGⅡ多聚物競(jìng)爭性與乳膠試劑內(nèi)抗體結(jié)合，凝集率下降，所以吸光度改變和樣品內(nèi)PGⅠ、PGⅡ濃度為反比，在700 nm處理檢測(cè)吸光度改變，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。ELISA法檢測(cè)血清TK1水平，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后加入至酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)品孔內(nèi)，樣品也加入到樣品孔內(nèi)，每個(gè)孔內(nèi)10 mL，膠紙將反應(yīng)孔封住，37℃下孵育2 h，洗板5次，再加入10 mL生物素化抗體工作液，37℃下孵育1 h，洗板5次，加入10 mL酶結(jié)合物工作液，37℃下避光孵育30 min，洗板5次，每孔加入10 mL顯色液，37℃下避光孵育20 min，最后加入終止液，混勻后檢測(cè)OD450數(shù)值，標(biāo)準(zhǔn)品濃度當(dāng)做橫坐標(biāo)，OD數(shù)值當(dāng)做縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)樣品OD數(shù)值于標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)查看其濃度；電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清CA72-4水平，準(zhǔn)確移取血清CA72-4置入量瓶內(nèi)，加入0.5 mL 0.3%H2O2，PBS緩沖液定容，并配置空白溶液。選取配置溶液6 mL在專用電解池內(nèi)，把電解池放置在超微弱化學(xué)發(fā)光測(cè)量儀暗室內(nèi)，使用MEC-12B型多功能電化學(xué)分析儀（江蘇電分析儀器廠生產(chǎn)），掃描速度為20 mV/s，在0.3～0.8 V電位范圍內(nèi)進(jìn)行陽極化掃描，BPLC超微弱化學(xué)發(fā)光測(cè)量儀（中國科學(xué)院生物物理研究所）記錄電化學(xué)發(fā)光信號(hào)。

1.4 觀察指標(biāo)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

采用并聯(lián)法，判定標(biāo)準(zhǔn)是各指標(biāo)臨界數(shù)值，單項(xiàng)指標(biāo)判定≤或≥臨界數(shù)值判別是陽性，>或<判別是陰性；聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，全部是陰性判別是陰性，至少一項(xiàng)是陽性時(shí)判別是陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，方差不齊后者非正態(tài)分布，組間對(duì)比Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，兩兩對(duì)比Nemenyi檢驗(yàn)；方差齊且正態(tài)分布，組間對(duì)比行F檢驗(yàn)，兩兩對(duì)比LSD-t檢驗(yàn)；經(jīng)過Logistic分析與ROC曲線評(píng)估各血清指標(biāo)診斷價(jià)值，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 六組對(duì)象血清相關(guān)指標(biāo)含量情況比較

胃癌組血清TK1及CA72-4含量明顯高于其他各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；胃潰瘍組血清PGⅠ含量比對(duì)照組高，胃癌組和萎縮胃炎組則低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；胃癌組與萎縮胃炎組在PGR含量上對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但胃癌組比其他各組要高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 ROC曲線下面積及血清指標(biāo)最佳的診斷臨界值、約登指數(shù)情況比較

血清CA72-4對(duì)胃癌診斷價(jià)值比較低（0.7>AUC>0.05），PGR、TK1及PGⅠ的診斷介質(zhì)中等（0.9>AUC>0.7），四項(xiàng)聯(lián)合診斷價(jià)值比較高（AUC>0.9）。見表2。

由ROC曲線可得到PGR、CA72-4、PGⅠ與TK1最佳的診斷臨界值依次是5、7.9 U/mL、68.3 ng/mL與95.1 pg/mL，約登指數(shù)依次是0.361、0.332、0.379與0.516。

2.3 胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)和血清指標(biāo)分析

為了將性別與年齡有可能造成影響排除，性別與年齡列入分析內(nèi)，獲得調(diào)節(jié)以后風(fēng)險(xiǎn)比（ORa）；血清TK1、PGⅠ及CA72-4含量異常為胃癌發(fā)生危險(xiǎn)因素，PGⅠ呈負(fù)相關(guān)，TK1及CA72-4呈正相關(guān)。見表3。

2.4 血清指標(biāo)不同組合方式的準(zhǔn)確度、特異度及敏感度情況

根據(jù)四格表得出不同指標(biāo)間檢測(cè)的準(zhǔn)確、特異度及敏感度，其中TK1+CA72-4方式準(zhǔn)確度、特異度最高，四項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)敏感度最高。見表4。

3 討論

伴隨著細(xì)胞工程學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)及遺傳學(xué)的快速發(fā)展，人們逐漸發(fā)現(xiàn)了很多小分子物質(zhì)，而腫瘤發(fā)生進(jìn)展和其中某些物質(zhì)有聯(lián)系，人們稱之為腫瘤標(biāo)志物[5-6]。腫瘤病情發(fā)生及進(jìn)展時(shí)，腫瘤標(biāo)志物水平在患者體內(nèi)會(huì)異常升高，說明機(jī)體內(nèi)可能存在腫瘤，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢測(cè)可對(duì)疾病診斷有一定作用。腫瘤標(biāo)志物出現(xiàn)為腫瘤患者的早期診治帶來了曙光，檢測(cè)時(shí)患者痛苦小且操作簡便，可當(dāng)做臨床診斷與篩查手段[7-9]。

CA72-4為特異性腫瘤標(biāo)志物，是美國Colcher等通過實(shí)驗(yàn)得到腫瘤相關(guān)糖蛋白。多種腫瘤內(nèi)都有CA72-4，其異常變高一般存在于消化道腫瘤與卵巢癌。國內(nèi)Chen等[10]對(duì)CA153、CA724、CA125、CA242、CEA及CA199和胃癌相關(guān)性做對(duì)比，結(jié)果顯示CA72-4的診斷價(jià)值最高。本文研究顯示，胃癌組患者血清CA72-4含量要明顯高于其他各組，Logistic分析顯示CA72-2是胃癌發(fā)生危險(xiǎn)因素。但只檢測(cè)CA72-4時(shí)的敏感度比較低，一般需要和其他相關(guān)指標(biāo)一起來提升敏感度。TK1為國際公認(rèn)細(xì)胞異常增殖標(biāo)記物，健康人組織與血清內(nèi)檢測(cè)不到TK1或者含量非常低，但在腫瘤患者體內(nèi)，隨著腫瘤細(xì)胞數(shù)量增殖TK1酶也隨之變高，腫瘤細(xì)胞的成長情況和TK1水平高低有緊密聯(lián)系[11-14]。對(duì)TK1含量檢測(cè)，能夠動(dòng)態(tài)了解到癌細(xì)胞增殖信息，對(duì)前期預(yù)測(cè)腫瘤發(fā)生有積極意義。但相關(guān)研究顯示TK1[15]在乳腺癌、腸癌、食管癌及肺癌等患者體內(nèi)都有不同程度的升高現(xiàn)象，不是特異性指標(biāo)，所以在胃癌檢測(cè)時(shí)候需要和其他相關(guān)指標(biāo)結(jié)合檢測(cè)。PGⅠ為胃泌酸腺的細(xì)胞能力檢測(cè)指針，胃底腺發(fā)生萎縮時(shí)其主細(xì)胞的數(shù)量將降低，胃酸的分泌量也降低，PGⅠ含量隨之減少；當(dāng)機(jī)體內(nèi)胃酸分泌量升高時(shí)，PGⅠ含量則隨之上升[14-20]。

綜上所述，血清TK1、PGⅠ及CA72-4含量異常為胃癌發(fā)生危險(xiǎn)因素，PGⅠ呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，TK1及CA72-4呈現(xiàn)正相關(guān)，PGR及PGⅠ檢測(cè)對(duì)胃癌和萎縮性胃炎有重要診斷價(jià)值。

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（收稿日期：2018-03-30）