黃芪粗提物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

鮑家卉，王雪慧，逄淑偉,王 瑩，劉馨宇，張雪梅

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，吉林延吉 133002)

中醫(yī)藥在防治肝臟疾病方面有悠久的歷史。肝損傷是指一系列理化因素所引起的肝細(xì)胞變性、壞死和凋亡，是各種肝臟疾病的病變結(jié)果。急性肝損傷是指各種原因引起的肝臟功能的異常，肝損傷是急性肝功能衰竭的基礎(chǔ)，嚴(yán)重或持續(xù)的肝損傷最終導(dǎo)致肝功能衰竭[1]。引起肝急性損傷的原因很多，四氯化碳(CCl4)引起的肝損傷是化學(xué)性肝損傷的一類典型代表，化學(xué)性肝損傷可上調(diào)肝損傷指數(shù)，導(dǎo)致肝細(xì)胞破裂，影響機(jī)體內(nèi)某些酶的含量，進(jìn)而影響肝臟的解毒功能，引起肝功能障礙，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致肝衰竭，甚至威脅生命?；瘜W(xué)性肝損傷至今尚無(wú)有效的治療手段。因此，尋找新型保肝、護(hù)肝藥物十分重要。

黃芪(Astragalusmembranaceus)味甘，微溫，歸肺，脾經(jīng)，咀嚼有微豆腥味[2]，具有補(bǔ)氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌功效[3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芪有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓和較廣泛的抗菌作用[4]。黃芪不僅能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，改善心肌供血，提高免疫功能，而且能夠延緩細(xì)胞衰老的進(jìn)程[5]。邱季等[6]研究表明，黃芪提取物在一定程度上改善肝細(xì)胞變性、壞死病變，對(duì)小鼠急性化學(xué)性肝損傷具有保護(hù)作用。本試驗(yàn)通過(guò)腹腔注射CCl4建立急性肝損傷模型，研究黃芪粗提物對(duì)肝損傷的保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR小鼠，雌雄各半，體重18 g±2 g，購(gòu)自長(zhǎng)春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.1.2 藥品與試劑 黃芪，購(gòu)自吉林省延吉市延西大藥房；聯(lián)苯雙酯滴丸，購(gòu)自吉林省延吉市延西大藥房(批號(hào)A02141208)；谷草轉(zhuǎn)氨酶AST(批號(hào)20161120)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT(批號(hào)20161120)、丙二醛MDA(批號(hào)20161120)、甘油三酯TG(批號(hào)20161120)試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 黃芪粗提物的制備 黃芪飲片100 g，浸泡過(guò)夜，加熱回流，過(guò)濾，重復(fù)3次，濃縮,使其按生藥量計(jì)算為0.6 g/mL，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組、造模與給藥 將36只小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性組和黃芪粗提物高、中、低劑量組，每組6只。藥物組分別灌胃8、4、2 g/kg黃芪粗提物，陽(yáng)性組以0.1 mL/10 g灌胃15 mg/kg聯(lián)苯雙酯，空白組和模型組灌胃等體積生理鹽水(0.1 mL/10 g)，1次/d，連續(xù)15 d。末次給藥后24 h給小鼠腹腔注射100 mL/L CCl4溶液10 mL/kg。

1.2.2 各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè) 末次給藥24 h后稱重，采血，分離血清；剝離肝臟，稱肝臟濕重，部分肝臟制備100 mg/mL肝組織勻漿。分別對(duì)肝臟指數(shù)，血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的含量進(jìn)行測(cè)定，部分肝臟100 mL/L中性甲醛溶液固定，HE染色，觀察病理組織學(xué)變化。

2 結(jié)果

2.1 黃芪粗提物對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響

由表1可知，與空白組比較，模型組極顯著增加小鼠肝臟指數(shù)(P<0.01)。與模型組比較，黃芪粗提物高劑量組極顯著降低肝臟指數(shù)(P<0.01)，黃芪粗提物中劑量組顯著降低肝臟指數(shù)(P<0.05)。結(jié)果表明，黃芪粗提物高、中劑量組能顯著降低肝臟指數(shù)，且呈一定的量效關(guān)系。

2.2 黃芪粗提物對(duì)小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的影響

由表2可知，與空白組比較，模型組極顯著增加小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的含量(P<0.01)。與模型組比較，黃芪粗提物高劑量組極顯著降低小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的含量(P<0.01)，黃芪粗提物中劑量組極顯著降低小鼠血清中ALT、AST、MDA的含量(P<0.01)，黃芪粗提物中劑量組顯著降低小鼠肝臟中TG的含量(P<0.05)，黃芪粗提物低劑量組顯著降低小鼠肝臟中ALT和AST及肝臟中TG的含量(P<0.05)。結(jié)果表明，黃芪粗提物高、中、低劑量組能顯著降低小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的含量，且呈一定的量效關(guān)系。

表1 黃芪粗提物對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響

注：與空白組比較，##P<0.01；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

Note:Compared with control group,##P<0.01;Compared with model group,**P<0.01,*P<0.05.

表2 黃芪粗提物對(duì)小鼠血清中MDA、AST、ALT及肝臟中的TG的影響

注：與空白組比較，##P<0.01；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

Note:Compared with control group,##P<0.01;Compared with model group,**P<0.01,*P<0.05.

2.3 病理組織學(xué)觀察

如圖1所示，小鼠肝組織HE染色可見(jiàn)，空白組小鼠肝小葉形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肝索結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列整齊(圖1A)。模型組小鼠肝索紊亂，肝小葉失去正常結(jié)構(gòu)，肝竇變窄，肝竇周?chē)霈F(xiàn)大面積肝纖維化病變，肝細(xì)胞明顯變性、壞死，細(xì)胞破裂，間質(zhì)充血，細(xì)胞核固縮、溶解，部分可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1B)。陽(yáng)性組小鼠肝細(xì)胞及肝小葉結(jié)構(gòu)較正常，部分肝細(xì)胞破裂，核溶解消失(圖1C)。黃芪粗提物高、中、低各組均能不同程度改善小鼠肝纖維化程度。黃芪粗提物高劑量組肝竇變窄，有輕微充血，少量肝細(xì)胞破裂(圖1D)；黃芪粗提物中劑量組肝竇變窄，有輕微炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，有大量細(xì)胞失去細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核溶解消失(圖1E)；黃芪粗提物低劑量組肝竇周?chē)杂懈卫w維化病變，間質(zhì)充血，大量肝細(xì)胞破裂，細(xì)胞核溶解(圖1F)。由此可見(jiàn)，黃芪粗提物高、中、低劑量組均可不同程度減輕CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷。

A.空白組；B.模型組；C.聯(lián)苯雙酯組；D.黃芪粗提物高劑量組；E.黃芪粗提物中劑量組；F.黃芪粗提物低劑量組

A.Control group；B.Model group；C.Bifendate group；D.Astragaluscrude extract high dose group；E.Astragaluscrude extract mid dose group；F.Astragaluscrude extract low dose group

圖1各組小鼠肝組織病變(HE,100×)

Fig.1 Hepatic histopathological lesions of mice in different groups(HE,100×)

3 討論

肝損傷是一個(gè)復(fù)雜病理過(guò)程，主要包括酒精性肝損傷、藥物性肝損傷、化學(xué)性肝損傷和病毒性肝炎等[7]。CCl4是一種趨肝毒物，能夠強(qiáng)烈引起肝細(xì)胞壞死、肝臟損傷、肝臟纖維化和肝臟腫瘤[8]。黃芪為臨床常用中藥，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓等作用[9]。王忠利等[10]研究表明，黃芪多糖可能通過(guò)降低炎癥因子對(duì)免疫性肝損傷具有保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)室也已證明黃芪粗提物對(duì)酒精造成的小鼠急性肝損傷有一定的治療作用[11]，但對(duì)CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷研究較少。本試驗(yàn)以CCl4急性肝損傷為模型，研究黃芪粗提物對(duì)CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。

臟器重量及臟器系數(shù)可作為大體確定對(duì)應(yīng)器官病變程度的參考[12]。本試驗(yàn)通過(guò)稱量肝臟重量及計(jì)算肝臟系數(shù)作為重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。ALT和AST是由肝臟合成的，能夠直接反映肝功能變化的兩種主要酶。當(dāng)肝臟受到致病因素侵害時(shí)，肝臟結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，導(dǎo)致血清中ALT和AST活性增加[13]。ALT主要分布于細(xì)胞漿中，對(duì)肝細(xì)胞的損傷較為敏感，當(dāng)肝臟受到損傷，導(dǎo)致細(xì)胞通透性增高及線粒體損傷時(shí)，ALT可依據(jù)肝臟受損程度發(fā)生不同程度的活性變化[14]。AST主要存在細(xì)胞核和線粒體中，當(dāng)肝臟損傷時(shí)其被釋放進(jìn)入血液，同樣可以作為判斷肝臟受損程度的指標(biāo)[15]。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化作用的主要產(chǎn)物，能夠嚴(yán)重?fù)p傷生物膜結(jié)構(gòu)[16]，而脂質(zhì)過(guò)氧化物的分解產(chǎn)物可引起細(xì)胞損傷，測(cè)定MDA的量常常可以反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。TG對(duì)維持正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)以及能量代謝等都起到非常重要的作用[17]。在本試驗(yàn)中，黃芪粗提物高、中、低劑量組均能降低脾臟指數(shù)，降低血清中ALT、AST和MDA及肝臟中TG的含量，說(shuō)明黃芪粗提物對(duì)小鼠CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷可以起到保護(hù)作用。

總之，黃芪粗提物通過(guò)降低肝臟指數(shù)，降低血清中ALT、AST和MDA及肝臟中TG的含量，減輕肝纖維化的程度，進(jìn)而對(duì)CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷起到保護(hù)作用。