馬鈴薯秦芋32的莖尖脫毒培養(yǎng)技術(shù)研究

楊涼花

摘要 由于馬鈴薯傳統(tǒng)種植方法可引起病毒積累，因而造成品種嚴(yán)重退化。為明確恢復(fù)馬鈴薯種性的方法，本文對(duì)馬鈴薯秦芋32的莖尖脫毒培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，以培養(yǎng)基配方MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA最適宜秦芋32的莖尖組織培養(yǎng)。因此，可用馬鈴薯莖尖脫毒培養(yǎng)獲取無病毒種薯，恢復(fù)種性，以提高產(chǎn)量。

關(guān)鍵詞 馬鈴薯；秦芋32；莖尖剝離；培養(yǎng)基配方

中圖分類號(hào) S532 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）19-0080-01

馬鈴薯是世界上僅次于小麥、水稻和玉米的第4種主要農(nóng)作物，目前大約有幾千個(gè)品種。馬鈴薯塊莖水分多，脂肪少，熱量低，適合作為主食，也可作為蔬菜食用[1]。近年來，隨著人們生活水平的日益提高，食品結(jié)構(gòu)出現(xiàn)新的變化，馬鈴薯已成為備受人們歡迎的休閑食品[2]。

秦芋32是安康市特有的馬鈴薯品種，薯塊呈橢圓形，傳統(tǒng)的種植方法是用塊莖作為種子，將芽眼切下用來播種。馬鈴薯病毒的累積性感染是引起馬鈴薯種性嚴(yán)重退化的主要原因，而通過莖尖分生組織培養(yǎng)獲取無病毒種薯來恢復(fù)種性的方法已被廣泛采用，可進(jìn)行大批量原原種的繁殖，恢復(fù)種性，提高產(chǎn)量，改善品質(zhì)[3-4]。

1 材料與方法

1.1 供試材料

以安康本地的馬鈴薯品種秦芋32的莖尖作為試驗(yàn)材料。

1.2 培養(yǎng)方法

1.2.1 培養(yǎng)條件。外植體選擇健壯植株的莖尖。一般在25 ℃恒溫條件下培養(yǎng)。光照時(shí)間為10 h/d，光照度為2 000 lx。

培養(yǎng)基滅菌前pH值為5.8，蔗糖濃度為20 g/L，瓊脂濃度為0.68 g/L。

1.2.2 外植體消毒。于晴天早上9：00左右在地里采摘莖尖，流水條件下反復(fù)沖洗2 h后送入無菌接種間，在超凈工作臺(tái)上先用75%的酒精浸泡15 s，無菌水沖洗1～2次，再用0.1%升汞滅菌8～10 min。消毒時(shí)要不斷攪動(dòng)，使材料與消毒液充分接觸，消毒時(shí)間也要控制。時(shí)間短了消毒不徹底，時(shí)間稍長(zhǎng)了又會(huì)不同程度地影響成活率，應(yīng)通過仔細(xì)觀察莖尖在消毒液里顏色的變化來控制時(shí)間。最后再用無菌水沖洗4～5次，置入鋪有無菌濾紙的培養(yǎng)皿中，吸干表面水分，備用[5-6]。

1.2.3 培養(yǎng)基設(shè)置。基本培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基。總共設(shè)置9個(gè)培養(yǎng)基，分別為①M(fèi)S+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA；②MS+0.1 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA；③MS+0.1 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA；④MS+0.5 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA；⑤MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA；⑥MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA；⑦M(jìn)S+1.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA；⑧MS+1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA；⑨MS+1.0 mg/L 6-BA +1.0 mg/L NAA。

1.2.4 莖尖剝離和培養(yǎng)。將經(jīng)過消毒處理好的莖尖去除葉片，用無菌鑷子夾起，放在顯微鏡下，用解剖針進(jìn)行剝離，帶有1～2個(gè)葉原基最佳。將剝離的莖尖分別接種于設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基中[7-8]。

將接種莖尖的試管放入培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，開始觀察愈傷組織萌動(dòng)狀況[9-10]。

2 結(jié)果與分析

接種40 d后，由觀察可知，馬鈴薯莖尖在①號(hào)培養(yǎng)基中少數(shù)產(chǎn)生愈傷組織，絕大部分沒有任何變化；在②號(hào)培養(yǎng)基中多數(shù)產(chǎn)生愈傷組織，成苗率為20%；在③號(hào)培養(yǎng)基中，隨著 NAA含量的提高，一部分分化出芽，大部分逐漸死亡；在④號(hào)培養(yǎng)基中，通過愈傷組織分化出的苗極少成苗，大部分不萌動(dòng)；在⑤號(hào)培養(yǎng)基中全部成活，通過愈傷組織成苗率在 60%以上；在⑥號(hào)培養(yǎng)基中大部分不生長(zhǎng)，接種的莖尖沒有變化；在⑦號(hào)培養(yǎng)基中，極少出現(xiàn)愈傷組織；在⑧號(hào)培養(yǎng)基中，一部分分化出苗，生長(zhǎng)緩慢；在⑨號(hào)培養(yǎng)基中，少數(shù)能不通過愈傷組織直接出苗，成苗率較之前面的培養(yǎng)基有所下降。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，以MS為基本培養(yǎng)基，在一定范圍內(nèi)添加激素，并不是濃度越高就越能提高莖尖的成活率和成苗率，濃度高反而抑制莖尖的分化生長(zhǎng)。其中以MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA為秦芋32莖尖組織培養(yǎng)的最宜培養(yǎng)基。上述9種培養(yǎng)基可為通過莖尖剝離獲得脫毒種苗生產(chǎn)提供技術(shù)參考。

4 參考文獻(xiàn)

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