N-Cadherin、sCD40水平變化與多發(fā)性骨髓瘤患者臨床分期的關(guān)聯(lián)性分析

賈新勇，郭改玲，王秋平，申燕

(漯河醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 漯河462300)

多發(fā)性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）是惡性漿細(xì)胞病的一種常見(jiàn)類(lèi)型，該病起病緩慢、病情隱匿，且骨髓瘤細(xì)胞增生程度、浸潤(rùn)程度及部位不同，致使臨床表現(xiàn)復(fù)雜，缺乏特異性。MM不同臨床分期預(yù)后不同，治療方案的選擇及實(shí)施亦有差異，故對(duì)MM進(jìn)行準(zhǔn)確的臨床分期，可為治療方案的制定提供客觀依據(jù)，對(duì)改善患者預(yù)后極其重要。近年隨臨床對(duì)MM研究深入發(fā)現(xiàn)，骨髓微環(huán)境與細(xì)胞因子在其發(fā)病及進(jìn)展中均有重要參與[1，2]。神經(jīng)鈣黏素（N-Cadherin）是鈣黏附分子家族中的一員，其介導(dǎo)的細(xì)胞與細(xì)胞間黏附調(diào)節(jié)著細(xì)胞行為，故研究發(fā)現(xiàn)N-Cadherin可通過(guò)介導(dǎo)成骨細(xì)胞及骨髓瘤細(xì)胞相互黏附而對(duì)成骨細(xì)胞分化產(chǎn)生抑制作用，最終導(dǎo)致骨質(zhì)疏松，參與骨髓瘤黏附、遷移、定居[3]。白細(xì)胞分化抗原40（CD40）為腫瘤壞死因子受體超家族Ⅰ型跨膜蛋白，其與表達(dá)在CD4+T細(xì)胞上的配體結(jié)合后可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，同時(shí)參與炎癥反應(yīng)等生理病理過(guò)程，且研究發(fā)現(xiàn)MM患者血清可溶性白細(xì)胞分化抗原40（sCD40）呈異常表達(dá)狀態(tài)[4]。本研究選取我院79例MM患者，以探討N-Cadherin及血清sCD40與其臨床分期的相關(guān)性，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年8月-2017年9月我院收治的79例MM患者設(shè)為觀察組，均符合《中國(guó)多發(fā)性骨髓瘤工作組.中國(guó)多發(fā)性骨髓瘤診治指南(2013年修訂)》中MM診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，其中男35例，女 44 例，年齡 36～67 歲，平均（50.22±10.43）歲；ISS臨床分期[6]：Ⅰ期22例，Ⅱ期29例，Ⅲ期28例。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核同意，且入組對(duì)象均知情同意；排除妊娠期或哺乳期女性、合并自身免疫性疾病或其他惡性腫瘤疾病。

1.2 方法

1.2.1 N-Cadherin表達(dá) 穿刺抽取0.2ml骨髓液樣本，注入肝素抗凝管內(nèi)，取50μl骨髓液置入流式試管，同時(shí)加入單克隆抗體，避光環(huán)境下放置20min，再于試管內(nèi)加入1ml紅細(xì)胞裂解液，室溫下放置10min；離心（1000r/min，5min）后舍棄上清液，并于試管中注入1.5ml 0.9%氯化鈉溶液，再離心（1000r/min，5min）棄去上清液；試管內(nèi)加入 500μl 0.9%氯化鈉溶液，上機(jī)待檢，儀器為Epics XL型流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman Coulter公司），以CD45/SSC設(shè)門(mén)法直接檢測(cè)，計(jì)算N-Cadherin（CD325）陽(yáng)性細(xì)胞在CD38+/CD138+細(xì)胞中比例。

1.2.2 血清sCD40水平 抽取空腹?fàn)顟B(tài)下肘靜脈血 3ml，離心（3000r/min，10min）后上層血清液立即送檢或-70℃凍存待檢；以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清sCD40水平，儀器為Bio-Rad iMark酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司），試劑盒購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo) ⑴對(duì)比MM不同臨床分期之間NCadherin表達(dá)及血清sCD40水平，分析N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平與MM臨床分期的相關(guān)性；⑵根據(jù)不同臨床分期選擇手術(shù)、化療、放療等方案進(jìn)行治療，根據(jù)預(yù)后情況分為預(yù)后良好組（n=53）及預(yù)后不良組（n=26），治療有效、疾病轉(zhuǎn)歸或病情穩(wěn)定為預(yù)后良好，治療無(wú)效、疾病進(jìn)展為預(yù)后不良。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以SPSS 18.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料（±s）表示，t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析，計(jì)數(shù)資料 n（%）表示，χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床分期N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平 MM不同臨床分期N-Cadherin表達(dá)無(wú)顯著差異（P＞0.05），血清 sCD40水平隨臨床分期增加呈增高趨勢(shì)，兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），見(jiàn)表 1。

表1 不同臨床分期N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平比較（±s）

表1 不同臨床分期N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平比較（±s）

臨床分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期F值P值例數(shù) N-Cadherin（%） sCD40（pg/ml）22 29 28/ /10.72±2.18 11.54±1.19 11.17±1.63 5.514 0.227 236.21±36.24 416.22±62.25 651.46±83.16 256.04 0.000

2.2 N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平與MM臨床分期的關(guān)聯(lián)性 N-Cadherin表達(dá)與MM臨床分期無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05），血清sCD40水平與MM床分期呈明顯正相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表 2。

表2 N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平與MM臨床分期的關(guān)聯(lián)性（n=79）

2.3 不同預(yù)后治療前后N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平 治療前，預(yù)后良好組N-Cadherin表達(dá)與預(yù)后不良組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），血清sCD40水平低于預(yù)后不良組（P＜0.05）；治療后，預(yù)后良好組N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平較治療前顯著下降（P＜0.05），預(yù)后不良組N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平較治療前無(wú)顯著差異（P＞0.05），見(jiàn)表 3。

表3 不同預(yù)后治療前后N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平比較（±s）

表3 不同預(yù)后治療前后N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平比較（±s）

注：與本組治療前比較，*P＜0.05。

預(yù)后 例數(shù)N-Cadherin（%） sCD40（pg/ml）預(yù)后良好組預(yù)后不良組t值P值53 26/ /治療前11.09±1.35 11.52±1.27 1.356 0.179治療后 治療前 治療后6.35±1.04*10.89±1.25 17.043 0.000 414.25±53.63 574.69±62.22 10.305 0.000 285.31±20.14*565.71±65.87 29.636 0.000

3 討論

MM是血液系統(tǒng)常見(jiàn)腫瘤疾病，由于其治療方案的制定與實(shí)施主要由臨床分期決定，故早期診斷并進(jìn)行準(zhǔn)確的臨床分期對(duì)指導(dǎo)臨床治療、促進(jìn)患者預(yù)后改善至關(guān)重要[7]。目前，MM發(fā)病機(jī)制尚不清楚，可能與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路傳導(dǎo)異常、骨髓微環(huán)境異常等因素有關(guān)，因此對(duì)MM診斷及臨床分期可從此方向切入研究。

MM患者多伴有骨質(zhì)破壞，且研究證實(shí)骨髓瘤病主要由成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞功能失調(diào)所致[8，9]。動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)則發(fā)現(xiàn)，N-Cadherin可表達(dá)于成骨細(xì)胞，且其過(guò)度表達(dá)會(huì)抑制成骨細(xì)胞分化，而在沉默N-Cadherin表達(dá)后，可顯著削弱其對(duì)骨細(xì)胞標(biāo)志物生成的抑制作用[10]。上述間接提示N-Cadherin可能參與MM發(fā)生。此外，亦有研究指出，在MM微環(huán)境中，表達(dá)于骨髓瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞的NCadherin可介導(dǎo)二者相互作用，以維持MM干細(xì)胞靜息狀態(tài)，誘導(dǎo)疾病復(fù)發(fā)[11-13]。細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)對(duì)骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育有調(diào)節(jié)作用，腫瘤壞死因子-α可誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞產(chǎn)生白介素-6，并與白介素-6形成細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，以發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，骨髓瘤細(xì)胞中CD40及其配體共表達(dá)對(duì)白介素-6分泌及調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子-α功能具有重要作用，提示CD40參與亦有可能參與MM發(fā)病過(guò)程[14-16]。本研究中，觀察組N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平較高，證實(shí)N-Cadherin及sCD40在MM發(fā)病中有重要參與作用。研究結(jié)果還顯示，NCadherin表達(dá)與MM臨床分期無(wú)明顯相關(guān)性 （P＞0.05），而血清sCD40水平隨臨床分期增加而上升，呈明顯正相關(guān)（P＜0.05），提示 N-Cadherin 過(guò)度表達(dá)雖參與了MM的發(fā)生，但不隨臨床分期而變化，血清sCD40水平則可用于MM臨床分期的診斷與評(píng)估。此外，由于預(yù)后不良患者多為Ⅲ期患者，且N-Cadherin表達(dá)與臨床分期無(wú)明顯關(guān)聯(lián)性，而血清sCD40水平則與臨床分期密切相關(guān)，故治療前不同預(yù)后MM患者N-Cadherin表達(dá)無(wú)差異，血清sCD40水平有差異。此外，治療后預(yù)后良好組NCadherin表達(dá)及血清sCD40水平較治療前降低（P＜0.05），預(yù)后不良組則無(wú)明顯變化（P＞0.05），提示N-Cadherin及血清sCD40隨疾病轉(zhuǎn)歸其異常表達(dá)有恢復(fù)正常的趨勢(shì)，故其水平變化預(yù)示著MM預(yù)后轉(zhuǎn)歸情況。

綜上，血清sCD40水平隨MM臨床分期增加呈升高趨勢(shì)，與臨床分期呈明顯正相關(guān)，且可評(píng)估預(yù)后情況，N-Cadherin表達(dá)則與MM臨床分期無(wú)明顯相關(guān)性，N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平隨預(yù)后轉(zhuǎn)歸而降低，故聯(lián)合檢測(cè)可為臨床診斷、疾病分期或預(yù)后評(píng)估提供客觀依據(jù)。