ELISA法檢測血液HBsAg灰區(qū)區(qū)間問題的探討

李麗平 ，楊堃 ，彭小華 ，吳青蓮

(1、新余市中心血站，江西 新余 338000；2、新余市渝水區(qū)珠珊衛(wèi)生院，江西 新余 338033)

當(dāng)前血液篩查以ELISA法和核酸兩種方法同時(shí)檢測，通過ELISA法檢測血液中的病毒特異性抗原或抗體，核酸則同時(shí)檢測HBV－DNA、HCVRNA和HIV－RNA。ELISA法以標(biāo)本OD值/臨界值即S/CO值作為判斷標(biāo)本陰陽性的標(biāo)準(zhǔn)，試劑說明書規(guī)定標(biāo)本S/CO值≥1為陽性，S/CO值＜1為陰性，在實(shí)際工作中常出現(xiàn)標(biāo)本S/CO值＜1，而核酸檢測為HBV－DNA陽性的情況，說明在試劑說明書規(guī)定的S/CO值＜1的某個(gè)區(qū)間設(shè)置一個(gè)范圍判定標(biāo)本結(jié)果為陽性或待檢，可以最大程度減少低濃度標(biāo)本漏檢的可能?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 標(biāo)本來源與處理 2012年3月1日至2017年12月6日本站ELISA法檢測HBsAg結(jié)果S/CO值在0．5～4范圍內(nèi)的標(biāo)本195例，留取2管標(biāo)本，其中一管用于核酸檢測，另一管用于血清學(xué)檢測。

1．2 儀器 Uranus－AE－100全自動(dòng)酶免分析儀、Hamilton STAR全自動(dòng)混樣儀、Ezbead System－32提取儀、7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀。

1．3 試劑 HBsAg檢測試劑由廈門新創(chuàng)、北京萬泰用兩個(gè)廠家提供，核酸檢測試劑由上海浩源生物科技有限公司提供。

1．4 方法 用兩種 ELISA法試劑進(jìn)行 HBsAg檢測，S/CO值在0．5～4范圍內(nèi)的標(biāo)本，取相同的試劑進(jìn)行再檢，同時(shí)對(duì)HBsAg單試劑陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測，核酸結(jié)果判定：Ct＞45為陰性，Ct≤45為陽性。

2 結(jié)果

2．1 S/CO 值在 0．5－4 范圍內(nèi)的 HBsAg 檢測結(jié)果2012年3月1日至2017年12月6日，本站共檢測標(biāo)本46122例，其中ELISA法HBsAg檢測結(jié)果S/CO值在0．5～4范圍內(nèi)的標(biāo)本195例，初檢陽性結(jié)果 S/CO 值 0．5＜S/C≤0．8標(biāo)本 13 例， 核酸檢測陽性 1 例；結(jié)果 0．8＜S/C≤1．0 標(biāo)本 45 例，再檢陽性 7 例，核酸檢測陽性 8 例；結(jié)果 1．0＜S/C≤4．0 標(biāo)本137例，再檢陽性33例，核酸檢測陽性4例。見表1。

2．2 HBV－DNA陽性標(biāo)本中兩種試劑初檢結(jié)果HBsAg初檢陽性標(biāo)本中，HBV－DNA檢測陽性的13例標(biāo)本有8例為一種試劑結(jié)果陽性，另一試劑顯弱色，5例為單試劑初檢陽性，其中S/CO值≤1．0范圍的標(biāo)本HBV－DNA陽性9例。見表2。

2．3 4 例HBV－DNA陽性標(biāo)本ELISA法結(jié)果 4例雙試劑均呈弱色，S/CO值在0．5以下，核酸檢測HBV－DNA陽性。見表3。

3 討論

2012年3 月1 日至2017年12月6日共檢測無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本46122例，其中HBsAg陽性441（0．96%）例，HBV－DNA 陽性 81（0．18%）例，核酸陽性率高于其他地區(qū)[1－3]。HBsAg單試劑陽性182（S/CO≥0．8）例，再檢陽性 40 例，ELISA 法檢測影響因素很多[4]，可能是慢性乙肝感染者病毒S區(qū)或X區(qū)基因突變影響[5]，也可能是HBV感染的早期窗口期，HBsAg病毒處于低水平狀態(tài)，或是ELISA方法的局限性和血液標(biāo)本本身的影響，導(dǎo)致大部分標(biāo)本初檢結(jié)果為非特異性反應(yīng)。ELISA法HBsAg單試劑陽性核酸檢測陽性12例，其中檢測結(jié)果在0．7≤S/CO 值≤1．0范圍的標(biāo)本 HBV－DNA 陽性有9例，8例HBV－DNA陽性的ELISA法檢測結(jié)果一種試劑結(jié)果陽性，另一試劑顯弱色，4例HBVDNA陽性的ELISA法檢測結(jié)果S/CO值均在0．5以下。

表1 S/CO值在0.5-4范圍內(nèi)的HBsAg檢測結(jié)果

表2 HBV-DNA陽性標(biāo)本中兩種試劑初檢結(jié)果（S/CO值）

表3 4例HBV-DNA陽性標(biāo)本ELISA法結(jié)果

ELISA法再檢陽性集中在 S/CO大于 0．8，為40例，核酸陽性集中在S/CO值大于0．7，為13例，有文獻(xiàn)顯示單試劑陽性而核酸陰性，中和試驗(yàn)陽性的情況[6]，說明核酸結(jié)果為陰性，而單試劑再檢仍為陽性的標(biāo)本仍存在一定的風(fēng)險(xiǎn)。

ELISA法檢測HBsAg的試劑說明書規(guī)定標(biāo)本S/CO值≥1為陽性，S/CO值＜1為陰性。在表1中0．5＜S/CO值≤1．0的標(biāo)本數(shù)為58例， 其中結(jié)果在0．7≤S/CO值≤1．0的標(biāo)本45例，再檢陽性7例，核酸陽9例，占HBsAg單試劑陽性標(biāo)本核酸檢測陽性的69．2%，而這部分標(biāo)本按試劑說明書結(jié)果判定要求為陰性，說明ELISA法檢測試劑在結(jié)果S/CO值小于1．0的標(biāo)本判定上應(yīng)該設(shè)定一個(gè)范圍，才能減少HBsAg的漏檢，這個(gè)范圍設(shè)置多少才合適，沒有文獻(xiàn)報(bào)道[7－10]。

從表 1、 表 2中數(shù)據(jù)看出 0．8≤S/CO 值≤1．0標(biāo)本ELISA法再檢陽性和核酸檢測陽性最多，表3中4例核酸陽性的標(biāo)本其S/CO值均在0．5以下且兩種試劑都不同程度的顯色，說明核酸檢測可以最大限度降低風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)彌補(bǔ)ELISA法的不足[11－14]，從以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出ELISA法檢測HBsAg結(jié)果S/CO在1．0以下的設(shè)置灰區(qū)是非常有必要的，筆者建議使用國產(chǎn)ELISA法試劑檢測HBsAg，且還沒有開展核酸檢測的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置一個(gè)灰區(qū)，灰區(qū)范圍在0．7≤S/CO值≤1．0是比較合適的，既降低了低濃度HBsAg的漏檢，又減少了標(biāo)本再檢導(dǎo)致的試劑浪費(fèi)，同時(shí)使用兩個(gè)不同廠家試劑檢測的，兩種試劑結(jié)果均出現(xiàn)弱色，該標(biāo)本應(yīng)該考慮淘汰。