肝癌組織HIF-1α、MRP表達(dá)水平及與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

吉文偉，郭勝利，宋展

(1、南陽市中心醫(yī)院膽道普外科，河南 南陽473000；2、南陽市中心醫(yī)院普外科，河南 南陽473000)

肝癌一般是由遺傳或環(huán)境等多種因素誘發(fā)的惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率和死亡率。隨著化療耐藥和惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展機(jī)制研究的逐步深入，從分子水平對惡性腫瘤的治療效果、耐藥性及腫瘤轉(zhuǎn)移已成為腫瘤的重要研究方向[1]。

相關(guān)資料[2]顯示缺氧的微環(huán)境是影響腫瘤治療效果的重要原因。滕鳳猛[3]的研究證實(shí)在缺氧的微環(huán)境下惡性腫瘤可通過乏氧誘導(dǎo)因子－1（Hypoxia inducible factor－1，HIF－1）改善腫瘤內(nèi)細(xì)胞的代謝并促進(jìn)腫瘤內(nèi)部生成新的血管，進(jìn)而加速腫瘤的生長速度。HIF－1是一類廣泛存在于人體和哺乳動物的逆轉(zhuǎn)錄因子，主要分為HIF－1α和HIF－1β兩個亞型單位。相關(guān)研究[4]也發(fā)現(xiàn)多藥耐藥蛋白（multidrug resistance protein，MRP） 的過度表達(dá)既是誘發(fā)腫瘤細(xì)胞多重耐藥的主要機(jī)制，還可能與惡性腫瘤的惡性生物學(xué)行為具有密切聯(lián)系。我們推測上述兩種因子可能存在某種協(xié)同作用，但目前HIF-1α和MRP相關(guān)性研究相對較少。故此，本研究探討肝癌組織HIF-1α、MRP表達(dá)水平及意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年2月至2017年4月我院病理科保存的原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織117例，其中男性71例，女性46例；年齡38～69歲，平均年齡（50.03±7.26）歲。同時選取40正常肝臟組織作為對照，其中男性28例，女性12例；年齡36～65歲，平均年齡（49.11±8.20）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床病理資料保存完整；⑵術(shù)前未接受過放療、化療等資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床病理資料不完整。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 鼠抗人單克隆抗體 HIF-1α（1：50）、鼠抗人單克隆抗體MRP、SP試劑盒及DAB試劑盒均購置于南京建成生物研究所。免疫組化研究法檢測HIF-1α、MRP表達(dá)情況，具體操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。已知陽性反應(yīng)片為陽性對照，PBS代替一抗為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 HIF-1α以細(xì)胞胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，MRP以細(xì)胞膜或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)[5]。每張切片隨機(jī)選取5個高倍視野，根據(jù)染色強(qiáng)度和著色細(xì)胞比例進(jìn)行評分[6，7]：⑴染色強(qiáng)度：不著色為 0分，淺黃色為 1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；⑵著色細(xì)胞比例：無著色細(xì)胞為0分，著色細(xì)胞比例＜25%為1分，25%～50%為2分，＞50%為3分。將染色強(qiáng)度和著色細(xì)胞比例得分相乘，最終得分≤3分為陰性，＞3分為陽性[5]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析采用SPSS 19.0軟件，計數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝癌組織和癌旁組織HIF-1α、MRP表達(dá) 肝癌組織HIF-1α、MRP陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P＜0.05），見表 1。

2.2 HIF-1α表達(dá)與肝癌臨床病理特征的關(guān)系HIF-1α表達(dá)與肝癌腫瘤包膜、門靜脈癌栓、TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與患者年齡、性別、HBsAg 和腫瘤直徑無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

表1 肝癌組織和癌旁組織HIF-1α、MRP表達(dá)

表2 HIF-1α表達(dá)與肝癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 MPR與與肝癌臨床病理特征的關(guān)系 MRP表達(dá)與肝癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與患者年齡、性別、HBsAg、腫瘤直徑、腫瘤包膜、門靜脈癌栓和TNM分期無關(guān)（P＞0.05）；見表3。

2.4 肝癌組織 HIF-1α、MRP相關(guān)性 肝癌組織HIF-1α 表達(dá)與MRP表達(dá)呈正相關(guān) （rs=0.737，P＜0.05），見表 4。

3 討論

有氧環(huán)境下HIF-1可經(jīng)羥基化后結(jié)合泛肽連接酶，進(jìn)而通過自身泛肽化而降解；缺氧環(huán)境下HIF-1無法被羥基化，導(dǎo)致體內(nèi)HIF-1濃度升高[8]。張志強(qiáng)[9]的研究發(fā)現(xiàn)HIF-1含量升高時，可參與惡性腫瘤相適應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而形成新生血管和維持腫瘤細(xì)胞的能量代謝。最新的研究[10，11]提示，缺氧環(huán)境下，抑制HIF-1表達(dá)可作為腫瘤治療的新途徑。腫瘤快速增長過程中，因惡性腫瘤細(xì)胞快速增殖進(jìn)而誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)部缺氧，在多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)的HIF-1的高表達(dá)，推測HIF-1可參與腫瘤的浸潤、生長和轉(zhuǎn)移等病理生理過程[12]。

表3 MRP表達(dá)與肝癌臨床病理特征的關(guān)系

表4 肝癌組織HIF-1α與MRP表達(dá)相關(guān)性

本研究結(jié)果顯示肝癌組織HIF-1α、MRP陽性表達(dá)率分別為72.65%和68.38%，明顯高于癌旁組織（P＜0.05）。HIF-1α表達(dá)升高是肝癌發(fā)生過程的重要因素，隨著腫瘤細(xì)胞的持續(xù)增殖，HIF-1α也隨缺氧環(huán)境的加重而高表達(dá)，并參以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧環(huán)境的過程，進(jìn)而進(jìn)一步加速腫瘤細(xì)胞的惡性增殖[13]。該結(jié)果還提示MRP蛋白在肝癌組織的高度表達(dá)可能在肝癌細(xì)胞耐藥過程中具有重要生物學(xué)作用。

本研究中HIF-1α、MRP表達(dá)與肝癌臨床病理特征的關(guān)系結(jié)果顯示：腫瘤包膜不完整、有門靜脈癌栓、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者HIF-1α陽性表達(dá)率分明顯高于腫瘤包膜完整、無門靜脈癌栓、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）；中低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者M(jìn)RP陽性表達(dá)率分別為91.67%和86.00%，明顯高于高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）。上述結(jié)果提示HIF-1α有潛力成為評估肝癌惡性分化程度、病情變化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要因子指標(biāo)；同時說明在不同病理特征的肝癌組織中MRP存在表達(dá)差異，提示MRP對肝癌的惡性發(fā)展過程具有重要影響，可作為判斷肝癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度的重要分子指標(biāo)。

MPR與與肝癌臨床病理特征的關(guān)系結(jié)果顯示MRP表達(dá)與肝癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān) （P＜0.05），與患者年齡、性別、HBsAg、腫瘤直徑、腫瘤包膜、門靜脈癌栓和TNM分期無關(guān)（P＞0.05）。該結(jié)果提示MPR與肝癌的發(fā)生、發(fā)展過程具有密切聯(lián)系。肝癌組織HIF-1α、MRP相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)肝癌組織 HIF-1α表達(dá)與 MRP表達(dá)呈正相關(guān) （P＜0.05）。上述結(jié)果說明肝癌的浸潤轉(zhuǎn)移和惡性增殖過程中，癌細(xì)胞在缺氧條件下，HIF-1α表達(dá)增高，MRP的表達(dá)增高也可能參與了缺氧條件下穩(wěn)定細(xì)胞在內(nèi)環(huán)境中的作用過程。MRP的耐藥機(jī)制研究[14]提示HIF-1α可通過調(diào)整細(xì)胞缺氧適應(yīng)能力進(jìn)而提高腫瘤的多藥耐藥，并推測兩種因子可能存在協(xié)同作用。在缺氧環(huán)境下HIF-1α與MRP具有同樣的蛋白同源性結(jié)果，正常條件下兩種因子還可以在維持維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮作用[15]。

綜上所述，肝癌組織HIF-1α、MRP表達(dá)呈高表達(dá)，HIF-1α、MRP之間可能存在協(xié)同作用，與患者臨床病理特征有一定關(guān)系。