斑花黃堇藏藥材總生物堿含量的測定

辛青霞 ，盧永昌 *，祁海紅

（1.青海民族大學藥學院，青海西寧810007；2.青海省青藏高原植物資源化學研究重點實驗室，青海西寧810007；3.青海省藥物分析重點實驗室，青海西寧810007）

1 儀器與材料

1.1 儀器

AL204電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；T6新悅紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）；N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）。

1.2 試劑

鹽酸（分析純，白銀良友化學試劑有限公司）；氫氧化鈉（分析純，天津市大茂化學試劑廠）；95%乙醇（分析純，天津市富宇精細化工有限公司）。小檗堿標準品（20 mg，Lot：130412，HPLC≥98%，北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術研究院）。

1.3 材料

斑花黃堇藏藥材，經(jīng)青海民族大學藥學院林鵬程教授鑒定為罌粟科紫堇屬，斑花黃堇干燥全草，自然陰干后粉碎。

2 總生物堿含量測定

2.1 總生物堿的提取

稱取斑花黃堇粗粉15 g，用525 mL 0.4%鹽酸在60℃下回流提取30 min，提取結(jié)束后將提取液合用NaOH溶液調(diào)pH值至10左右，再用氯仿萃取3次，每次50 mL，合并氯仿層，回收氯仿得總生物堿[5]。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標準溶液的制備

稱取2.16 mg小檗堿標準品，溶于10 mL 95%乙醇中，即得質(zhì)量濃度為0.216 mg/mL的標準溶液。

2.2.2 總生物堿樣品溶液的制備

將2.1項下所得總生物堿樣品置于50 mL量瓶中，用95%乙醇溶解并稀釋至刻度得供試品溶液[6]。

綜合以上的分析，儒家傳統(tǒng)思想與高校的思想道德教育二者之間有著不解的淵源，他們相互影響，相互作用，這為我們培養(yǎng)青年學生的思想道德素質(zhì)提供了可借鑒之處。

2.3 最大吸收波長的確定

將制備的總生物堿溶于適量95%乙醇，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，95%乙醇定容。在200～600 nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，取小檗堿標準品溶液方法同上進行測定；另取95%乙醇，同法操作，95%乙醇溶液為空白溶液。結(jié)果表明，小檗堿標準品溶液和總生物堿樣品溶液的最大吸收峰均出現(xiàn)在410 nm處，本實驗選取410 nm為最大吸收波長。

2.4 標準曲線的繪制

準確吸取標準溶液 0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mL于10 mL容量瓶中，用95%乙醇定容，搖勻，測定吸光度。用紫外分光光度計分別在410 nm處測定吸光度，縱坐標為吸光度(A)，橫坐標為小檗堿標準品的質(zhì)量濃度(μg/mL)，繪制標準曲線如圖1?；貧w方程為：y=0.010 3x+0.004 4，R2=0.999 7。

圖1 小檗堿測定的標準曲線

2.5 結(jié)果計算

按照2.4項所述方法測定吸光度，并通過回歸方程計算出樣品中生物堿的質(zhì)量濃度，按下式計算總生物堿含量：

式中：C為樣品最終測定液中總生物堿質(zhì)量濃度(μg/mL)，D為稀釋倍數(shù)，W為斑花黃堇樣品質(zhì)量（g）。

2.6 方法學驗證

2.6.1 穩(wěn)定性實驗

分別吸取8份樣品溶液2.5 mL于10 mL容量瓶中，按照2.3項下的方法依次測定樣品放置0、15、30、60、90、120、150和180 min 時的吸光度，考察樣品的穩(wěn)定性[7]。

RSD=1.59%，表明樣品溶液3 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.2 重復性實驗

分別吸取9份樣品溶液2.5 mL于10 mL容量瓶中，按照2.3項下的方法測量吸光度，考察方法的重復性[8]。9次測定的吸光度分別為0.287、0.277、0.278、0.289、0.279、0.279、0.283、0.280、0.280。RSD=1.48%，表明本方法重復性良好。

2.6.3 精密度實驗

分別吸取9份標準品溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，按照2.3項下的方法測量吸光度，考察方法的精密度[9]。測定的吸光度分別為0.218、0.223、0.222、0.226、0.226、0.227、0.223、0.223、0.228。RSD=1.38%，表明本方法精密度良好。

2.6.4 加樣回收率實驗

量取稀釋后的樣品溶液4.5 mL，共9份，分為3組，分別精密加入對照品溶液0.5，1.0和1.5 mL，按照2.3項下的方法測定吸光度[10]，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實驗

平均回收率為91.38%，RSD=1.36%，表明本方法回收率良好。

3 斑花黃堇藏藥材總生物堿含量測定

經(jīng)方法學驗證，得知紫外分光光度法測定斑花黃堇藏藥材總生物堿含量時穩(wěn)定性、重復性、精密度、加樣回收率良好，故稱取斑花黃堇藏藥材2份，各約2.0 g，按照2.2和2.3項下方法，得到總生物堿提取液，稀釋一定倍數(shù)后，測得相應的吸光度，并計算出斑花黃堇藏藥材的總生物堿含量[11]，分別為2.218和2.228 mg，平均2.223 mg，RSD=1.023%。

4 討論

本實驗通過紫外分光光度法測定斑花黃堇藏藥材時，穩(wěn)定性、重復性、精密度均較好。方法靈敏度高，結(jié)果準確，操作簡單。實驗結(jié)果表明，斑花黃堇藏藥材總生物堿含量高低，可能與各地區(qū)溫度，海拔等地域條件有關。通過對斑花黃堇藏藥材總生物堿的含量測定，可以為下一步紫堇屬藏藥材總生物堿的合理開發(fā)與利用提供堅實的實驗依據(jù)。