交叉污染對全自動血凝分析儀SYSMEX CS2000I活化部分凝血活酶時間的影響

葛頌 王新芹

（南京鼓樓醫(yī)院集團宿遷市人民醫(yī)院 江蘇 宿遷 223800）

全自動血凝分析儀SYSMEX CS2000I測定凝血指標(biāo)部分項目存在交叉污染現(xiàn)象[1]。我們在工作中發(fā)現(xiàn)凝血試劑通過試劑針的攜帶污染對血漿APTT測定存在一定的影響[2]，所做值偏低，造成負(fù)誤差[3]，針對這一現(xiàn)象，進行如下實驗。

1.儀器與試劑

1.1 儀器

日本SYSMEX CS2000I全自動血凝分析儀。

1.2 試劑

日本SYSMEX公司配套試劑由美國德靈公司（DADE BEHRING）生產(chǎn)，主要包括：FIB試劑（Thrombin reagent，批號：547541）；PT測定試劑（Thromborels，批號：562837）；APTT測定試劑（Actin，批號：557254）；配套緩沖液（OV Buffer，批號：554615）；氯化鈣試劑（Cacl2，批號：563812）；TT測定試劑（Test Thrombin，批號：47718）。清洗液（CleanⅠ，批號：A8035）。定值質(zhì)控血漿（Control 1 Plasma，批號：548052）；定值質(zhì)控血漿（Control 2 Plasma，批號：548271）。嚴(yán)格按照試劑說明書溶解保存使用試劑。

2.方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 交叉污染排查實驗 取當(dāng)日標(biāo)本若干，混合成混合血清，在無污染條件下單獨測定PT，APTT，F(xiàn)IB，TT各三次為對照組，再將PT，F(xiàn)IB，TT分別與APTT組合重復(fù)測三次[4]。

2.1.2 干擾分析實驗 將混合血漿400微升分別與10微升生理鹽水（NS），OVB，Thrombin試劑混合，作為標(biāo)本進行APTT測定，確定對APTT造成干擾原因的查詢[5]。

2.1.3 設(shè)計避免交叉污染程序 取一份足量多的正?；旌涎?，重復(fù)測APTT20次[6]，F(xiàn)IB與APTT組合重復(fù)測20次，重設(shè)儀器設(shè)置[7]，使試劑針在吸取Thrombin 試劑后進行CLⅠ清洗和Cacl2前進行CLⅠ清洗后再對FIB與APTT組合重復(fù)測20次。定值質(zhì)控1，2均重復(fù)測定10次。

2.1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，定量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗，定性資料的組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 結(jié)果

2.2.1 交叉污染排查結(jié)果 經(jīng)過交叉污染排查實驗，發(fā)現(xiàn)FIB對APTT存在負(fù)干擾，具有非常顯著性的意義（P＜0.01）。其他項目無影響，根據(jù)資料顯示，為FIB測定后對APTT測定存在干擾檢測結(jié)果的物質(zhì)。結(jié)果見表1。

表1 交叉污染排查情況對APTT的影響

2.2.2 干擾實驗結(jié)果 加生理鹽水組，加OVB組兩組數(shù)據(jù)與對照組進行比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。而加Thrombin reagent組與對照組相比，其直接立即變?yōu)槟龎K，即APTT值趨近于0，差異具有非常顯著性的意義（P＜0.01）。結(jié)果見表2。

表2 分別與生理鹽水、OVB、Thrombin reagent混合后測定APTT的結(jié)果

2.2.3 避免交叉污染實驗 避免交叉污染實驗設(shè)計如下，與對照組作比較。經(jīng)全自動血凝分析儀SYSMEX CS2000I測定凝血指標(biāo)，再由該批號定值質(zhì)控給定的靶值，算得一系列偏倚值，即單測定值質(zhì)控1，F(xiàn)IB+APTT（設(shè)置前）組合，F(xiàn)IB+APTT（設(shè)置后）組合所得APTT偏倚分別為0.062，0.457，0.064；質(zhì)控2分別為0.011，0.503，0.0098。由上分析可知，單測定值質(zhì)控1,2血漿FIB+APTT（設(shè)置后）組合所得APTT偏倚在允許范圍內(nèi)，而FIB+APTT（設(shè)置前）組合所測APTT偏倚超過允許范圍，進一步說明設(shè)置前FIB+APTT組合所得到的APTT結(jié)果偏低，存在負(fù)干擾?；旌涎獫{及質(zhì)控品1,2 FIB+APTT（設(shè)置前）與對照組之間的差異具有非常顯著性的意義（P＜0.01），F(xiàn)IB+APTT（設(shè)置后）與對照組之間無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。所作數(shù)據(jù)如下表3、4、5所示。

表3 避免交叉污染實驗[APTT與FIB+APTT（設(shè)置前）、FIB+APTT（設(shè)置后）混合血漿APTT值的比較]

表4 避免交叉污染實驗[APTT與FIB+APTT（設(shè)置前）、FIB+APTT（設(shè)置后）質(zhì)控1血漿APTT值的比較]

表5 避免交叉污染實驗[APTT與FIB+APTT（設(shè)置前）、FIB+APTT（設(shè)置后）質(zhì)控2血漿APTT值的比較]

3.討論

全自動血凝分析儀SYSMEX CS2000I在使用過程中存在較大的交叉污染現(xiàn)象，本文通過實驗發(fā)現(xiàn)FIB+APTT（設(shè)置前）組合所測APTT值偏低，其偏倚值超過允許范圍，說明FIB+APTT（設(shè)置前）組合所測APTT值存在明顯的負(fù)誤差（表4，表5，P＜0.01）。而進一步實驗發(fā)現(xiàn)FIB中的Thrombin試劑對APTT測定存在較大負(fù)干擾（表2，P＜0.01）。分析是由于Thrombin試劑中含有較高濃度的凍干凝血酶制劑，而SYSMEX CS2000I血凝分析儀只有一根試劑針和一個樣本針，僅靠去離子水清洗試劑針一次，很難去除前一種試劑的殘余成分，從而使Thrombin試劑對APTT測定造成較大負(fù)干擾。

綜上所述，由上一種試劑中含有與下一個標(biāo)本反應(yīng)的成分是導(dǎo)致凝血反應(yīng)交叉污染的主要原因。因此，使用此儀器時要注意防止交叉污染，用CLⅠ清洗試劑針可有效避免交叉污染對APTT測定的影響。