苦豆籽炒制中氧化苦參堿與苦參堿轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

杜偉偉田繼業(yè)鄧登友勾永志

（1，河北省保定冀中藥業(yè)有限公司 071000；2.河北省保定市畜牧獸醫(yī)局 071000）

苦豆籽炒制中氧化苦參堿與苦參堿轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

杜偉偉1田繼業(yè)1鄧登友2勾永志2

（1，河北省保定冀中藥業(yè)有限公司 071000；2.河北省保定市畜牧獸醫(yī)局 071000）

在不同炒制溫度和炒制時(shí)間下對苦豆籽中氧化苦參堿和苦參堿含量間轉(zhuǎn)化情況進(jìn)行分析研究。在115～215℃內(nèi)設(shè)置了11個(gè)炒制溫度，并設(shè)定了5min、10min、15min3個(gè)不同的炒制時(shí)間對苦豆籽進(jìn)行處理，共得處理樣33個(gè)。33個(gè)樣品經(jīng)煎煮后采用HPLC法測定苦豆籽中氧化苦參堿和苦參堿的含量，從而比較分析氧化苦參堿和苦參堿之間的轉(zhuǎn)化情況。結(jié)果顯示：在不同炒制溫度下，隨著溫度的升高氧化苦參堿轉(zhuǎn)化為苦參堿的量也在逐漸升高，而隨著炒制時(shí)間的增加，氧化苦參堿和苦參堿的總量也在分別呈現(xiàn)緩慢下降和上升趨勢，而炒制溫度165℃為其突出溫度。通過兩者數(shù)據(jù)變化顯示，氧化苦參堿并未完全轉(zhuǎn)化為苦參堿，其轉(zhuǎn)化機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

苦豆籽；炒制溫度；氧化苦參堿；苦參堿；測定分析；實(shí)驗(yàn)

苦豆子為豆科槐屬植物，主要分布于中國北方的荒漠、半荒漠地區(qū)。味極苦，性寒，有毒，入胃和大腸經(jīng)[1]；有清熱燥濕，止痛，殺蟲等功效?？喽棺幼鳛橹匾乃幱煤惋曈弥参镔Y源，早在20世紀(jì)30年代初就被世界性研究，先后提取出苦參總堿、槐安堿、槐定堿等多種化學(xué)成分并被正式列入 《美國藥典》。而國內(nèi)研究始于1971年，因其不斷開發(fā)出的清熱解毒、抗菌消炎、抗癌等作用而引起國內(nèi)外醫(yī)藥界廣泛重視?？喽棺尤?duì)I養(yǎng)豐富，粗蛋白、粗纖維含量均在20%以上，還含有少量的鈣、磷；苦豆子葉、種子中更含有動(dòng)物所必需的各種氨基酸，具有很好的飼用價(jià)值。而其在生物提取中也含有許多重要的化學(xué)成分，主要為蛋白質(zhì)、糖類、有機(jī)酸、黃酮類、色素和生物堿，在藥用方面有很大的研究價(jià)值[2]。

目前國內(nèi)多以苦豆子為原料從中提取出相應(yīng)純化的生物堿制成不同劑型投入到臨床使用中?？鄥A和氧化苦參堿作為苦豆子中具有廣泛生物活性的重要生物堿成分，它們均具有消炎鎮(zhèn)痛、止咳平喘、抗心律失常、抗腫瘤等作用，氧化苦參堿還具有升白、鎮(zhèn)靜、降溫、護(hù)肝等作用，具有很好的開發(fā)前景[3]。而國內(nèi)對其提取、分離工藝及各單體藥理作用方面多有研究[4]，而對于氧化型生物堿如氧化苦參堿與還原性型生物堿如苦參堿，其彼此之間的轉(zhuǎn)化及其影響因素方面的研究報(bào)道卻是很少。本研究旨在通過不同炒制溫度及時(shí)間對苦豆子種子 （苦豆籽（中氧化苦參堿和苦參堿的轉(zhuǎn)化情況進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，從而明確其轉(zhuǎn)化條件，為以后工業(yè)提取苦豆子中氧化苦參堿和苦參堿的單體堿提供參考依據(jù)。

苦豆子生物總堿在青綠期主要集中在種子中且依據(jù) 《中華藥海》記載[5]，苦豆籽用法為炒制冒煙，呈黑色為度，而苦豆籽約在120℃左右開始冒煙，在200℃左右全為黑。以此本實(shí)驗(yàn)取用苦豆籽作為實(shí)驗(yàn)對象，并在115～215℃溫度范圍內(nèi)設(shè)置了11個(gè)溫度梯度，分別為115℃、125℃、135℃、145℃、 155℃、 165℃、 175℃、 185℃、 195℃、 205℃、 215℃。分別在特制旋轉(zhuǎn)炒鍋中進(jìn)行炒制，且每個(gè)溫度又分別設(shè)置炒制時(shí)間為5min、10min、15min。本研究采用高效液相色譜法（HPLC（測定苦豆籽中氧化苦參堿和苦參堿的含量，從而分析氧化苦參堿和苦參堿之間的轉(zhuǎn)化情況。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

高效液相色譜儀：Waters 2695 Alliance高效液相色譜系統(tǒng)，四元梯度泵，Empower色譜工作站，2996 PDA檢測器，購于美國Waters公司；苦參堿 （批號：110805-200508，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：100%（與氧化苦參堿 （批號：110780-201007，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：92.3%（均購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇、三乙胺為液相色譜純，磷酸為分析純；特制可旋轉(zhuǎn)炒制容器、超聲儀、25ml容量瓶、1ml移液管。電熱鼓風(fēng)干燥箱上海一恒科學(xué)儀器有限公司；分析天平CPA-225D Sartorius；苦豆籽，購自安國中藥材市場，經(jīng)保定陽光本草藥業(yè)有限公司鑒定。

1.2 方法

1.2.1 苦豆籽處理試驗(yàn)

將特制可旋轉(zhuǎn)炒制容器放置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中至設(shè)定溫度穩(wěn)定30min，通過特制管口將苦豆籽樣品各取20g加入容器內(nèi)至炒制設(shè)定時(shí)間，取出晾至常溫即可。

取適量生苦豆籽和經(jīng)過上述處理的 （經(jīng)不同溫度和時(shí)間炒制（的33個(gè)苦豆籽樣品，分別粉碎過篩后各稱取10g，加入適量水，煎煮兩次，每次半個(gè)小時(shí)，過濾，合并過濾液且濃縮至每1ml相當(dāng)于苦豆籽1g的溶液。將濃縮液裝入瓶中做好標(biāo)記，滅菌后低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 HPLC測定樣品含量

（1（色譜條件。①色譜柱：Kromasil-C18（5μm，4.6×150mm（；②流動(dòng)相：乙腈：水 （0.5%三乙胺溶液，用磷酸調(diào)pH至6.5（=20：80；③檢測波長：215nm；④流速：0.8ml/min；⑤理論板數(shù)：以氧化苦參堿計(jì)算應(yīng)≥5000。

（2（生苦豆籽、對照品及供試品溶液的制備。①生苦豆籽溶液制備：用移液管精密量取煎煮好的生苦豆籽溶液1ml，置于25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混合均勻，備用；②對照品溶液制備：取氧化苦參堿和苦參堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含氧化苦參堿0.10mg，苦參堿0.04mg的溶液，混合均勻，備用；③供試品溶液制備：取經(jīng)“1.2.1”項(xiàng)下處理好的33個(gè)樣品，分別精密量取各樣品1ml，置于各個(gè)對應(yīng)的25ml容量瓶中，加甲醇適量并在超聲儀中溶解，取出定容至刻度，用0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液適量至液相小瓶中，備用。

（3（含量測定。將各個(gè)標(biāo)記好的液相小瓶放入高效液相色譜儀托盤內(nèi)，設(shè)定好程序，測定即得。

2 結(jié)果

2.1 生苦豆籽中氧化苦參堿與苦參堿含量測定結(jié)果

從生苦豆籽中氧化苦參堿與苦參堿的含量測定結(jié)果可看出 （見表1（，氧化苦參堿含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于苦參堿含量，同許多文獻(xiàn)的所得結(jié)論一致[6,7]，說明在生苦豆籽植物體內(nèi)氧化苦參堿的存在形式較苦參堿穩(wěn)定。

表1 生苦豆籽中氧化苦參堿與苦參堿含量測定結(jié)果

2.2 不同溫度及時(shí)間氧化苦參堿與苦參堿含量測定結(jié)果

從33個(gè)苦豆籽樣品中氧化苦參堿與苦參堿含量測定結(jié)果顯示 （見表2（，苦豆籽隨著炒制溫度逐漸的升高，其氧化苦參堿含量也在逐漸的降低，而苦參堿含量卻在逐漸的升高，而隨著溫度的上升氧化苦參堿轉(zhuǎn)化為苦參堿的含量也隨之增加。在每個(gè)溫度梯度下其隨著炒制時(shí)間的增加，氧化苦參堿轉(zhuǎn)化苦參堿的含量也在緩慢的增加。說明炒制溫度和炒制時(shí)間是影響苦豆籽生物堿含量的影響因素之一。

2.3 氧化苦參堿與苦參堿含量不同溫度的差異

對11個(gè)溫度梯度下的苦豆籽樣品進(jìn)行編號：115℃5min、10min、 15min編號1、 125℃5min、 10min、 15min編號2， 以此類推，直至215℃5min、10min、15min編號11。

對表2中的數(shù)據(jù)進(jìn)行歸總并利用spss軟件對氧化苦參堿與苦參堿在不同炒制溫度下所測定的含量分別做了兩兩比較，結(jié)果見表3。從表中可看出，氧化苦參堿含量：在115℃所測的含量與其他溫度相比較均極顯著，125℃與135℃比較顯著，與其他溫度比較極顯著，135℃與145℃及145℃與155℃比較均不顯著，與其他溫度比較極顯著，而從165℃以后各個(gè)溫度與其他溫度比較均極顯著；苦參堿含量：在115℃、125℃與135℃溫度下所測含量，三者之間比較均不顯著，115℃與145℃及其他溫度比較均極顯著，145℃與155℃比較顯著，而從165℃以后各個(gè)溫度與其他溫度比較均極顯著。以此可得出，165℃為突出溫度，即苦豆籽中氧化苦參堿在165℃下其含量降低最明顯，下降趨勢增快，而苦參堿含量同樣從165℃開始上升趨勢增快且氧化苦參堿轉(zhuǎn)化為苦參堿的含量也在迅速增加。

表2 33個(gè)苦豆籽樣品中氧化苦參堿與苦參堿含量測定結(jié)果

表3 不同炒制溫度氧化苦參堿和苦參堿含量 （mg/ml）差異情況

3 討論

苦豆籽有毒，常通過炒制而減小其毒性。本研究針對其炒制溫度及炒制時(shí)間做了進(jìn)一步研究，研究表明苦豆籽中氧化苦參堿和苦參堿含量受炒制溫度及時(shí)間的影響，隨著炒制溫度的升高和炒制時(shí)間的增長，其氧化苦參堿轉(zhuǎn)化為苦參堿的含量也隨之增加，然而從研究結(jié)果也看出氧化苦參堿的轉(zhuǎn)化量與苦參堿的增加量不等，說明氧化苦參堿并沒有完全轉(zhuǎn)化為苦參堿，其轉(zhuǎn)化機(jī)制還需進(jìn)一步研究。氧化苦參堿與苦參堿這種轉(zhuǎn)化趨勢也可為苦豆子提取工藝的研究提供一定的參考依據(jù)。

[1]楊舒淳,鐘曉鈴,劉姝君,等.不同炮制方法對苦豆子毒性的影響[J].新疆中醫(yī)藥雜志,2008,16(5):34-35.

[2]游菁菁,沙碧瑩,尹小英.高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地苦豆子各部位中6種生物堿[J].中國藥學(xué)雜志,2014,49(23):2120-2123.

[3]胡海波.氧化苦參堿對心血管疾病的藥理作用及其機(jī)制研究進(jìn)展[J].2012,21(13):110-112.

[4]李軍,冷曉紅,郝彩琴.苦豆草生物堿的提取工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(12):7068-7070.

[5]冉先德.中華藥海下卷,第一冊[M].哈爾濱:哈爾濱出版社,1998:1031.

[6]陳海燕,郭鴻雁,冷曉紅.HPLC法測定西北地區(qū)不同產(chǎn)地苦豆子藥材中生物堿的含量[J].北方藥學(xué),2013,10(5):10-11.

[7]冷曉紅,郭鴻雁,陳海燕.苦豆子提取過程中氧化苦參堿與苦參堿、氧化槐果堿與槐果堿的相互轉(zhuǎn)化[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2015,32(6):688-691.

杜偉偉，女，碩士，現(xiàn)就業(yè)于保定冀中藥業(yè)有限公司，從事新獸藥研發(fā)相關(guān)工作。