維生素D缺乏性佝僂病患兒血清25-羥維生素D與骨密度和細(xì)胞免疫狀況的關(guān)系探討

張 玉

(山西省運(yùn)城市婦幼保健院,山西 運(yùn)城044000)

維生素D(Vit D)缺乏性佝僂病是兒科常見疾病,是以Vit D缺乏引起機(jī)體鈣磷代謝紊亂、骨骼鈣化異常為主要特征的全身營養(yǎng)性疾病,多見于嬰幼兒[1]。Vit D不僅參與機(jī)體鈣磷代謝,且具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化及免疫功能等多種生理學(xué)功能[2]。研究發(fā)現(xiàn)[3-4],Vit D缺乏性佝僂病患兒除了可出現(xiàn)骨密度降低、骨骼異常外,常伴隨機(jī)體免疫力下降,易出現(xiàn)肺炎、腹瀉或貧血等并發(fā)癥。Vit D代謝與Vit D缺乏性佝僂病病情進(jìn)展關(guān)系密切,但與患兒免疫水平變化的關(guān)系研究尚少。血清25-羥維生素D[25(OH)D]能夠直接反映機(jī)體Vit D的水平。因此,本研究通過檢測Vit D缺乏性佝僂病患兒與健康嬰幼兒血清25(OH)D及各T淋巴細(xì)胞亞群的變化,初步探討血清25(OH)D水平與細(xì)胞免疫水平的關(guān)系,以期為臨床中Vit D缺乏性佝僂病的病情評估及指導(dǎo)治療提供依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2016年5月至2017年5月運(yùn)城市婦幼保健院兒?？剖罩蔚?0例Vit D缺乏性佝僂病患兒為觀察組,其中男43例,女37例;年齡0～3周歲;喂養(yǎng)方式:完全母乳20例,母乳+人工21例,完全人工39例;23例伴有“X”或“O”形蹆、肋串珠、乒乓顱等骨骼異常,57例無明顯骨骼異常,但均有易驚、多汗等非特異性神經(jīng)精神癥狀。選取同期醫(yī)院體檢中心的80例健康嬰幼兒為對照組,其中男42例,女38例;年齡0～3周歲;喂養(yǎng)方式:完全母乳18例,母乳+人工41例,完全人工21例。兩組一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合Vit D缺乏性佝僂病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];②年齡≤3歲;③受試嬰幼兒監(jiān)護(hù)人簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①健康嬰幼兒合并骨骼代謝相關(guān)疾病者;②合并消化、呼吸系統(tǒng)疾病者;③合并嚴(yán)重肝腎功能障礙者;④檢測前接受飲食、口服Vit D或鈣劑治療者。

2 方法

2.1 血清25(OH)D檢測 收集兩組受試嬰幼兒空腹血2 mL,室溫靜置60 min后,2 800 r p m離心10 min,取上層血清,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA,IDS公司)檢測各組血清25(OH)D水平,嚴(yán)格按照檢測程序操作,且保持室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果為“在控”狀態(tài)。用3550 UV酶標(biāo)儀(Bio-rad公司)檢測450 n m處吸光度值,根據(jù)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算血清25(OH)D水平。

2.2 骨密度檢測 采用OmnisenseTM7000P骨密度B超儀(Sunlight公司)檢測兩組受試嬰幼兒雙側(cè)脛骨中段骨密度,環(huán)境溫度控制在18～24℃。標(biāo)準(zhǔn)體模校正后保證精確性誤差和準(zhǔn)確性誤差分別控制在1%、3%以內(nèi),將測量值與亞洲兒童數(shù)據(jù)庫為正常值,計算百分位數(shù)P值和標(biāo)準(zhǔn)差的離差Z值。

2.3 T淋巴細(xì)胞亞群檢測 采用全血免疫法檢測各T淋巴細(xì)胞亞群水平。采集兩組受試嬰幼兒清晨空腹乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈全血2 mL,混勻后在50μL全血中滴加熒光素標(biāo)記的單克隆抗體10μL,混勻后室溫避光孵育20 min,滴入500μL溶血素充分混勻,30 min內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+占淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分比(體積法),并計算CD4+/CD8+比值(Bri Cyte E6型流式細(xì)胞儀及其配套抗體、溶血素、質(zhì)控物;深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司,單克隆抗體:CD3-FITC/CD8-PE/CD45-per CP/CD4-APC)。

3 療效觀察

3.1 觀察指標(biāo) ①血清25(OH)D水平、骨密度標(biāo)準(zhǔn)差的離差Z值和百分位數(shù)P值對比;②各T淋巴細(xì)胞亞群占比及CD4+/CD8+比值對比;③血清25(OH)D水平與骨密度、T淋巴細(xì)胞亞群占比的關(guān)系分析。

3.2 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差s)表示,采用t檢驗(yàn);血清25(OH)D水平與骨密度標(biāo)準(zhǔn)差的離差Z值、各T淋巴細(xì)胞亞群占比采用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3.3 結(jié)果

(1)血清25(OH)D水平、骨密度比較 觀察組患兒血清25(OH)D水平、骨密度均顯著低于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組嬰幼兒血清25(OH)D、骨密度標(biāo)準(zhǔn)差的離差Z值和百分位數(shù)P值比較

表1 兩組嬰幼兒血清25(OH)D、骨密度標(biāo)準(zhǔn)差的離差Z值和百分位數(shù)P值比較

注:與對照組比較,△P＜0.05

?

(2)各T淋巴細(xì)胞亞群占比及CD4+/CD8+比值比較 觀察組患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)占比及CD4+/CD8+比值均顯著低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 兩組嬰幼兒各T淋巴細(xì)胞亞群占比及CD4+/CD8+比值比較(%

表2 兩組嬰幼兒各T淋巴細(xì)胞亞群占比及CD4+/CD8+比值比較(%

注:與對照組比較,△P＜0.05

?

(3)血清25(OH)D水平與骨密度、T淋巴細(xì)胞亞群占比的關(guān)系分析 觀察組血清25(OH)D水平與骨密度標(biāo)準(zhǔn)差的離差Z值和百分位數(shù)P值、CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+占比、CD4+/CD8+比值均呈顯著正相關(guān)(r=0.933、0.910、0.762、0.835、0.806、0.845,P=0.000、0.000、0.010、0.004、0.008、0.003)。

4 討論

臨床顯示,Vit D缺乏性佝僂病1歲以內(nèi)嬰幼兒發(fā)病率最高,引起發(fā)病的原因主要有戶外活動少、喂養(yǎng)方式不當(dāng)、Vit D補(bǔ)充不及時、家族有佝僂病史等多種因素[6]。Vit D缺乏性佝僂病患兒早期臨床表現(xiàn)多不明顯,一旦出現(xiàn)明顯癥狀時,已對患兒骨骼發(fā)育造成嚴(yán)重影響。該病發(fā)病早期Vi D缺乏可引起血鈣水平下降,進(jìn)而引起甲狀旁腺功能代謝性亢進(jìn),隨著血鈣水平升高接近正常,而血磷出現(xiàn)顯著下降,最終引起特征性骨骼病變。若不采取有效措施補(bǔ)充機(jī)體Vi D水平,長期Vi D缺乏可能導(dǎo)致患兒出現(xiàn)免疫性疾病,對患兒的生長發(fā)育造成嚴(yán)重影響[7-8]。因此,探討Vit D缺乏性佝僂病患兒血清25(OH)D水平與機(jī)體骨密度、免疫力的關(guān)系,對指導(dǎo)營養(yǎng)支持、治療方案的選擇意義重大。

本研究發(fā)現(xiàn),觀察組患兒血清25(OH)D水平、骨密度標(biāo)準(zhǔn)差的離差Z值和百分位數(shù)P值均顯著低于對照組(P＜0.05),經(jīng)Pearson相關(guān)性分析,觀察組血清25(OH)D水平與骨密度標(biāo)準(zhǔn)差的離差Z值和百分位數(shù)P值呈顯著正相關(guān)(P＜0.05),提示Vit D缺乏性佝僂病患兒存在血清25(OH)D水平、骨密度異常較低現(xiàn)象,且血清25(OH)D缺乏與骨密度低下有關(guān)。Vit D對人體健康尤其是嬰幼兒健康發(fā)育有重要意義,可參與機(jī)體免疫、造血、內(nèi)分泌等多種系統(tǒng)功能反應(yīng),血清25(OH)D是反映機(jī)體Vit D營養(yǎng)狀態(tài)的最佳指標(biāo),機(jī)體Vit D缺乏時可直接導(dǎo)致血清25(OH)D水平降低[9]。骨密度可直接反映骨骼階段性發(fā)育狀況,應(yīng)用骨密度B超儀可有效輔助嬰幼兒Vit D缺乏性佝僂病的診斷。關(guān)于早期佝僂病患兒與健康嬰幼兒骨密度差異的研究顯示[10],不同年齡亞組(0～1周歲、1～2周歲、2～3周歲)患兒骨密度Z值和P值均顯著低于健康患兒,與本研究結(jié)果相似。研究表明[11],青少年及中老年人群的Vit D水平與骨密度呈明顯正相關(guān),說明Vit D缺乏與低骨密度關(guān)系密切。因此,及時有效補(bǔ)充Vit D對Vit D缺乏性佝僂病患兒骨密度的恢復(fù)有積極的促進(jìn)作用。

本研究結(jié)果表明,觀察組患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)占比及 CD4+/CD8+比值均顯著低于對照組(P＜0.05),經(jīng)Pearson相關(guān)性分析,觀察組血清25(OH)D水平與CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+占比及CD4+/CD8+比值均呈顯著正相關(guān)(P＜0.05),提示Vit D缺乏性佝僂病患兒存在T淋巴細(xì)胞亞群占比異常較低現(xiàn)象,且25(OH)D缺乏與機(jī)體細(xì)胞免疫水平低下有關(guān)。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體外周血中重要的免疫細(xì)胞,根據(jù)其表面CD分子表達(dá)不同存在CD3+、CD4+、CD8+亞群,各亞群處于動態(tài)平衡時可維持機(jī)體正常細(xì)胞免疫水平[12]。研究證實(shí)[13],淋巴細(xì)胞表面大分子物質(zhì)的表達(dá)與鈣磷代謝有關(guān),鈣磷代謝異?？蓪?dǎo)致機(jī)體多種生物反應(yīng)異常,如通過影響氧化磷酸化反應(yīng)而抑制環(huán)磷酸腺苷(c A MP)生成,而c A MP是調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫反應(yīng)的關(guān)鍵物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)[14],T淋巴細(xì)胞表面存在1,25-二羥維生素D3受體,Vit D缺乏可導(dǎo)致1,25-二羥維生素D3供應(yīng)不足,淋巴細(xì)胞表面受體與之結(jié)合減少,進(jìn)而影響相應(yīng)細(xì)胞因子合成和分泌,最終影響機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)。另外,Vit D缺乏可影響鋅(Zn)平衡,Vit D缺乏性佝僂病患兒多存在Zn缺乏,因此可導(dǎo)致DNA或RNA代謝相關(guān)酶的合成障礙,進(jìn)而影響淋巴細(xì)胞功能[15-16]。因此,血清25(OH)D水平及T淋巴細(xì)胞數(shù)量在Vit D缺乏性佝僂病患兒疾病發(fā)展過程中有重要作用。

綜上所述,Vit D缺乏性佝僂病患兒存在血清25(OH)D水平、骨密度及T淋巴細(xì)胞亞群占比異常較低現(xiàn)象,且血清25(OH)D缺乏與骨密度和機(jī)體細(xì)胞免疫水平低下有關(guān)。提示臨床中可通過檢測血清25(OH)D水平綜合評估Vit D缺乏性佝僂病患兒的免疫功能,并制定有效干預(yù)措施加強(qiáng)預(yù)防和保健。