急性心肌梗死病人血清miR-378表達(dá)水平及其臨床意義

，

微小RNA(miRNA)是一類由內(nèi)源基因編碼的長(zhǎng)度約為22 個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，它們?cè)趧?dòng)植物中參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控。目前，在動(dòng)植物以及病毒中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有3萬(wàn)個(gè)miRNA分子[1]。大多數(shù)miRNA基因以單拷貝、多拷貝或基因簇(cluster)的形式存在于基因組中。近年來(lái)的研究顯示，與健康人群相比，急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)病人血清中存在著多種差異表達(dá)的miRNA[2]。這種差異表達(dá)的miRNA可作為AMI病人診斷的血清學(xué)標(biāo)志物。本研究采用貝葉斯定量探討血清學(xué)因子B型腦鈉肽(brain natriuretic peptide，BNP)和微小RNA miR-378在AMI病人血清中的表達(dá)情況及其鑒別診斷AMI與穩(wěn)定型心絞痛(SAP)的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇四川省綿陽(yáng)市中心醫(yī)院急診科2015年3月—2016年8月收治的AMI病人59例(AMI組)和穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris，SAP)病人62例(SAP組)為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)(AHA)制定的AMI與SAP診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；既往無(wú)合并代謝性疾病，如甲狀腺功能亢進(jìn)等；既往無(wú)急性心肌梗死病史，本次為初次診斷；無(wú)惡性腫瘤史。排除標(biāo)準(zhǔn)：AMI或SAP未能確診者；既往行冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)或冠狀動(dòng)脈旁路手術(shù)者；近期存在感染者；孕期或哺乳期婦女；人類免疫缺陷病毒(HIV)陽(yáng)性者。AMI組59例，男35例，女24例；年齡(64.8±16.3)歲；糖尿病6例(10.2%)，高血壓31例(52.5%)，吸煙33例(55.9%)。SAP組62例，男37例，女25例；年齡(63.7±17.2)歲；糖尿病6例(9.7%)，高血壓30例(48.4%)，吸煙32例(51.6%)。兩組病人一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 血清BNP及miR-378檢測(cè) 病人入組后抽取外周靜脈血5 mL置于EDTA抗凝劑的管中，室溫3 000 r/min離心15 min，小心提取上清液分裝到無(wú)RNA酶的EP管中，然后置于-80 ℃低溫冰箱中保存待用。采用固相免疫層析試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)檢測(cè)血清BNP水平，具體操作按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀器，檢測(cè)兩組病人血清miR-378水平，PCR引物由深圳華大基因合成。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察兩組病人血清BNP及微小RNA miR-378水平；并分別以血清BNP和miR-378為參考診斷AMI，計(jì)算診斷的敏感性、特異性及ROC曲線下面積(AUC)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清BNP與miR-378 比較 AMI組血清BNP、miR-378相對(duì)表達(dá)量均高于SAP組(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組血清BNP與miR-378 比較(±s)

2.2 AMI病人血清BNP與miR-378的相關(guān)性 Spearson相關(guān)分析顯示，AMI病人血清miR-378與BNP存在明顯的相關(guān)性(r=0.88，P<0.05)。詳見圖1。

圖1 AMI病人血清BNP與miR-378相關(guān)性的散點(diǎn)圖

2.3 血清BNP與miR-378鑒別診斷價(jià)值 以血清BNP為參考鑒別診斷AMI的敏感性為70.6%，特異性為75.5%，AUC=0.79(95%CI0.70～0.88)。詳見圖2A。以血清miR-378為參考鑒別診斷AMI的敏感性為65.3%，特異性為69.4%，AUC=0.70(95%CI0.59～0.81)。詳見圖2B。

A圖為血清BNP；B圖為血清miR-378

圖2血清BNP與miR-378鑒別診斷AMI的ROC曲線下面積

3 討 論

隨著我國(guó)人口老齡化的加劇，以及生活方式、飲食習(xí)慣變化，冠狀動(dòng)脈性疾病的發(fā)生率在逐年升高。冠狀動(dòng)脈疾病已經(jīng)成為威脅我國(guó)居民健康的重大疾病之一[4]。急性冠脈綜合征(ACS)是冠狀動(dòng)脈病變引起的嚴(yán)重心臟疾病，按嚴(yán)重程度可分為不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死。AMI發(fā)病迅速，未經(jīng)及時(shí)診斷治療的病例死亡率高且預(yù)后差。近年來(lái)的研究顯示，血清BNP可以作為判斷冠狀動(dòng)脈狹窄危險(xiǎn)分層的一個(gè)重要指標(biāo)[5-6]，同時(shí)也作為鑒別診斷AMI的重要血清學(xué)標(biāo)志物。常麗穎[7]采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定AMI病人血清中BNP水平，發(fā)現(xiàn)AMI病人血清BNP水平顯著高于穩(wěn)定心絞痛病人，但該研究未對(duì)血清BNP鑒別診斷AMI與穩(wěn)定型心絞痛病人敏感性、特異性進(jìn)行探討。本研究發(fā)現(xiàn)與SAP病人比較，AMI病人血清BNP顯著升高，且其鑒別AMI與SAP的敏感性與特異性均較高，可對(duì)AMI進(jìn)行輔助診斷。

miRNA是一類由內(nèi)源基因編碼的長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子。近年來(lái)的研究顯示，miRNA的血清表達(dá)水平與某些代謝性疾病的發(fā)生發(fā)展存在明顯的相關(guān)性[3]。已有研究報(bào)道，與健康人群相比，ACS病人血清中存在眾多差異表達(dá)的微小RNA，且這種差異表達(dá)程度與病人病情的嚴(yán)重程度存在一定的相關(guān)性[8]。因此，理論上這些差異表達(dá)的miRNA可能成為鑒別診斷ACS的潛在血清學(xué)標(biāo)志物。miR-378是新近研究發(fā)現(xiàn)的一個(gè)微小RNA，長(zhǎng)度為22nt，廣泛表達(dá)于人體各個(gè)器官中。已有研究發(fā)現(xiàn)，miR-378在動(dòng)脈粥樣硬化性疾病病人血清中表達(dá)水平升高，可能是機(jī)體在缺血缺氧條件下誘導(dǎo)miR-378轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)，從而導(dǎo)致血清表達(dá)水平上升[9]。但關(guān)于miR-378在AMI病人中的表達(dá)水平及其作為鑒別AMI與SAP血清學(xué)標(biāo)志物的研究報(bào)道較少。因此，本研究探討了miR-378在AMI與SAP病人血清中的表達(dá)情況，并根據(jù)貝葉斯定量評(píng)估其臨床鑒別診斷的應(yīng)用價(jià)值。提示血清miR-378診斷AMI的敏感性和特異性尚可，可作為潛在的血清學(xué)標(biāo)志物。

但本研究的樣本量較小統(tǒng)計(jì)學(xué)效能不高，所有病人均來(lái)自四川省綿陽(yáng)市中心醫(yī)院，可能存在一定的病人納入偏倚。同時(shí)，也未對(duì)miR-378與AMI發(fā)生發(fā)展關(guān)系進(jìn)行機(jī)制探討。因此，下一步有必要增大樣本量，并聯(lián)合其他醫(yī)療單位，進(jìn)行多中心的診斷試驗(yàn)。同時(shí)，采用相關(guān)分子生物學(xué)技術(shù)，探討miR-378與AMI發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，為臨床AMI的診治提供更為充分的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。