血清半乳甘露聚糖抗原水平在真菌性鼻竇炎患者診斷中的應(yīng)用價(jià)值

涂澄宇

（南昌大學(xué)第四附屬醫(yī)院耳鼻喉科，江西 南昌 330003）

真菌性鼻竇炎（FRS）又稱霉菌性鼻竇炎，指因患者的鼻竇黏膜組織、骨質(zhì)受到真菌侵襲所引發(fā)的感染性疾病。隨著臨床抗生素應(yīng)用病種范圍的增多、使用頻率與使用量的增加，使得真菌耐藥性得以提高，從而導(dǎo)致真菌性鼻竇炎發(fā)病率呈現(xiàn)出逐年升高的趨勢[1]。有資料顯示，上頜竇真菌感染屬于真菌性鼻竇炎的主要類型，同時(shí)感染病菌主要為曲霉菌[2]。在真菌性鼻竇炎患者中，CT檢查病變鼻竇中鈣化率僅為51%，同時(shí)非真菌性鼻竇炎也可能發(fā)生鈣化，其發(fā)生率為3%左右，而當(dāng)患者不存在典型的體征癥狀以及CT影像學(xué)特征時(shí)，為其開展檢查則可能出現(xiàn)漏診或誤診[3]。本次研究就選取2016年1月至2017年1月本院耳鼻喉科收治的住院患者134例，探討真菌性鼻竇炎患者血清半乳甘露聚糖抗原水平及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1月至2017年1月本院耳鼻喉科收治的疑似真菌性鼻竇炎住院患者134例，其中男71例，女63例，年齡18～56歲，平均年齡（41.3±5.6）歲。本次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。依據(jù)病理學(xué)檢查可知，62例患者被確診為真菌性鼻竇炎，將其設(shè)定為觀察組；72例患者被確診為非真菌性鼻竇炎，將其設(shè)定為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料完整；對本次研究內(nèi)容知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：入組前1～2天應(yīng)用血液制品、真菌類制品、中藥注射液以及生脈注射液進(jìn)行治療的患者；多發(fā)性骨髓瘤患者；應(yīng)用半合成青霉素進(jìn)行治療的患者；真菌性肺炎及真菌性陰道炎患者；透析治療患者；毛霉菌及隱球菌感染患者。

1.2 方法 首先采集患者的靜脈血3 ml，將其置于不含添加劑的真空采血管中，對血清進(jìn)行分離，每5例患者作為一個(gè)檢測批次，采用試劑盒配備的血清A管、陽性對照B管、陰性對照C管和等待檢測的患者血清D1～5管各300μl和100 μl血清處理液進(jìn)行振蕩混勻，將其置于水浴鍋中進(jìn)行孵育，水浴鍋內(nèi)溫度為100℃，時(shí)間為3 min，然后放入離心機(jī)中進(jìn)行離心，離心速度為每分鐘12 000轉(zhuǎn)，時(shí)間10 min，取上清液備用。采用辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗GM單克隆抗體EB-A2共50 μl，置入到已經(jīng)完成包被的EB-A2微孔板內(nèi)，采集已經(jīng)完成制備的上清液50 μl，將其放入到微孔板中，對微孔板采用黏合膜進(jìn)行密封；將微孔板放置在37℃環(huán)境下進(jìn)行孵育，孵育時(shí)間為90 min，然后采用Tris-NaCl洗液對微孔板進(jìn)行反復(fù)沖洗，沖洗次數(shù)為5次。采用200 μl含四甲基聯(lián)苯胺的作用底物進(jìn)行加入，將其放置在避光環(huán)境中，在室溫下作用30 min，采用100 μl反應(yīng)終止液進(jìn)行加入。采用自動(dòng)定量酶標(biāo)儀（上海普科光學(xué)儀器設(shè)備有限責(zé)任公司，型號HKD5500）進(jìn)行光度值測量，波長設(shè)定為450/620 nm；在開展實(shí)驗(yàn)的過程中，參照標(biāo)準(zhǔn)血清A值均值為0.3～0.8，陽性質(zhì)控GM值超過2，陰性質(zhì)控GM值低于0.4作為質(zhì)控。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組GM值水平，以病理檢查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，觀察GM試驗(yàn)診斷真菌性鼻竇炎的敏感度、特異度、陰性預(yù)測值以及陽性預(yù)測值。GM診斷結(jié)果判定：陽性，2次GM值超過0.5或單次GM值超過0.8；陰性，GM值低于0.5[4]。敏感度為真陽性患者在總患者人數(shù)中百分比；特異度為真陰性患者在患者中的百分比；陰性預(yù)測值為真陰性患者占陰性患者中的百分比；陽性預(yù)測值為真陽性患者在陽性患者中的百分比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件為SPSS 17.0，計(jì)量資料采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組GM試驗(yàn)診斷結(jié)果比較 觀察組陽性率高于對照組，陰性率低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組GM試驗(yàn)診斷結(jié)果比較[n（%）]Table 1 Comparison of two groups of GM diagnostic Results[n(%)]

2.2 GM試驗(yàn)診斷真菌性鼻竇炎的準(zhǔn)確性 通過檢測可知，GM試驗(yàn)診斷真菌性鼻竇炎的靈敏度為0.29（95%CI為0.12～0.44）；GM試驗(yàn)診斷真菌性鼻竇炎的特異度為0.91（95%CI為0.82～0.96）；陽性預(yù)測值為0.74（95%CI為0.50～0.97）；陰性預(yù)測值為0.59（95%CI為0.46～0.72）；診斷符合率為0.64（95%CI為0.52～0.75）；陽性似然比為3.47；陰性似然比為0.78。

3 討論

GM試驗(yàn)在對真菌性鼻竇炎進(jìn)行診斷的原理是通過對曲霉菌的半乳聚糖抗原進(jìn)行檢測，但在真菌菌絲發(fā)生生長的過程中，曲霉菌的半乳聚糖抗原會(huì)有菌絲發(fā)生脫落，經(jīng)由試劑盒所提供的抗體出現(xiàn)反應(yīng)，所以半乳聚糖的檢測結(jié)果和患者機(jī)體中所含有的真菌量呈現(xiàn)為正比，也可以對患者的病情嚴(yán)重程度進(jìn)行一定反應(yīng)，同時(shí)GM試驗(yàn)結(jié)果也可以作為臨床治療療效的指標(biāo)[5]。但GM試驗(yàn)檢測的細(xì)菌種類主要為曲霉菌，而在對其他種類的真菌開展檢測時(shí)，GM試驗(yàn)則可能發(fā)生假陰性[6]。本次研究結(jié)果顯示，在開展病理檢查后可知，本次研究中觀察組的62例患者的致病菌均為曲霉菌。本次研究中觀察組中GMS染色表現(xiàn)為陽性的患者中，其GM試驗(yàn)的結(jié)果與GMS染色結(jié)果相符，分析其原由，主要是由于真菌對患者機(jī)體黏膜和血管造成侵襲有關(guān)，曲霉菌抗原從菌絲發(fā)生脫落，進(jìn)入到機(jī)體血液中，所以能夠被有效檢測。由于侵襲性真菌型鼻竇炎患者的機(jī)體受到真菌的侵襲，使得其機(jī)體黏膜和血管均遭受較大的破壞，從而導(dǎo)致機(jī)體血液中所含有的抗原數(shù)量眾多，所以本次研究結(jié)果中觀察組中只有18例患者表現(xiàn)為GM陽性[7]。由于在機(jī)體中，曲霉菌抗原存在周期較短，會(huì)在較短時(shí)間內(nèi)被機(jī)體清除，因此當(dāng)患者發(fā)生真菌球型鼻竇炎后，其機(jī)體內(nèi)真菌菌絲會(huì)出現(xiàn)相互纏繞，從而導(dǎo)致實(shí)性腫物的出現(xiàn)，也就是真菌球，真菌在機(jī)體內(nèi)主要以聚集的方式進(jìn)行生長，所以曲霉菌抗原不容易從菌絲上發(fā)生脫落，因此機(jī)體血液中的曲霉菌抗原數(shù)量較少[8]。本次研究結(jié)果顯示，觀察組中僅44例患者表現(xiàn)為GM陰性。并且在對照組中，GM試驗(yàn)表現(xiàn)為陽性的患者為6例，雖然本次研究設(shè)立了嚴(yán)格的納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，對近期采用半合成青霉素進(jìn)行疾病治療的患者進(jìn)行排除，但通過術(shù)后對患者進(jìn)行隨訪可知，6例患者在日常生活中均喜愛飲用牛奶和蛋白類食物，在手術(shù)治療后15天，為患者開展GM試驗(yàn)復(fù)查可知，結(jié)果均表現(xiàn)為陰性，通過開展鼻內(nèi)鏡檢查可知，患者受累鼻竇具有光滑黏膜，同時(shí)未出現(xiàn)異常分泌物。

通過本次研究可知，GM試驗(yàn)的檢測敏感度為0.29，特異度為0.91，陰性預(yù)測值為0.59，陽性預(yù)測值為0.74，診斷符合度為0.64。敏感度雖較低，但特異度較高，尤其是在對侵襲型真菌性鼻竇炎進(jìn)行診斷時(shí)準(zhǔn)確率極高。分析其原由，可能是由于本次研究觀察組中鼻竇炎患者均為曲霉菌感染，而GM試驗(yàn)即對曲霉菌抗原開展檢測，因此其具備較高的特異度。臨床上在對真菌性鼻竇炎開展治療時(shí)，治療方案不會(huì)由于真菌種類不同而有所差異，因此GM檢測可通過檢測曲霉菌抗原而為真菌性鼻竇炎的診斷提供參考依據(jù)，從而使患者的疾病得到有效診斷。

綜上所述，GM試驗(yàn)可作為真菌性鼻竇炎的早期診斷方法，其具備較高的特異度，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。