• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    乳腺癌組織中ALDH1及BCRP的表達狀況與乳腺癌病理特征的相關(guān)性分析

    2018-08-30 09:16:58梁法清杜正貴何陽君
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2018年14期
    關(guān)鍵詞:病理特征乳腺癌

    梁法清 杜正貴 何陽君

    [摘要] 目的 探討乳腺癌患者癌組織及腋窩淋巴結(jié)中乙醛脫氫酶1(ALDH1)以及乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)的表達狀況與乳腺癌病理特征的關(guān)系。 方法 選取2013年1月~2016年3月在四川大學(xué)華西醫(yī)院治療的乳腺癌患者共84例,同時選取距腫瘤邊緣大于1 cm正常乳腺組織(癌旁正常組織)作為對照,采用免疫組化法檢測ALDH1和BCRP蛋白的表達。 結(jié)果 乳腺癌組織中ALDH1和BCRP蛋白表達率明顯高于癌旁正常組織(P < 0.01);腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移患者癌組織中ALDH1和BCRP蛋白表達陽性率明顯高于無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P < 0.05);雌激素受體(ER)陽性患者乳腺癌組織中BCRP蛋白表達陽性率明顯高于ER陰性患者(P < 0.05);而乳腺癌組織中ALDH1和BCRP蛋白表達與患者年齡、絕經(jīng)情況、腫瘤大小、組織分級、TNM分期和孕激素受體(PR)均無相關(guān)性(P > 0.05);乳腺癌患者ALDH1和BCRP蛋白的表達也無相關(guān)性(rs=-0.092,P > 0.05)。 結(jié)論 ALDH1和BCRP蛋白在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中有一定作用,可能參與了腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等過程。

    [關(guān)鍵詞] 乙醛脫氫酶1;乳腺癌耐藥蛋白;乳腺癌;病理特征

    [中圖分類號] R737.9 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210(2018)05(b)-0076-04

    The relationship between the expressions of aldehyde dehydrogenase 1, breast cancer resistance protein in breast cancer tissues and pathological features of breast cancer

    LIANG Faqing1 DU Zhenggui1 HE Yangjun2

    1.Department of Breast Surgery, West China Hospital of Sichuan University, Sichuan Province, Chengdu 610041, China; 2.Department of Surgery, Chengdu Seventh People′s Hospital, Sichuan Province, Chengdu 610041, China

    [Abstract] Objective To investigate the relationship between aldehyde dehydrogenase 1 (ALDH1), breast cancer resistance protein (BCRP) expressions in tumor tissues and pathological features of breast cancer. Methods From January 2013 to March 2016, 84 patients with breast cancer in West China Hospital of Sichuan University and the normal breast tissues (adjacent tissues) which was used for control group is defined as the edge of cancer tissueedge greater than 1 cm were selected. The expression of ALDH1 and BCRP protein was detected by immunohistochemistry. Results The expression rates of ALDH1 and BCRP protein in breast cancer tissues were significantly higher than those in adjacent tissues (P < 0.01). The positive rates of ALDH1 and BCRP protein expression in patients with axillary lymph node metastasis were significantly higher than those in patients without axillary lymph node metastasis (P < 0.05). The positive rate of BCRP protein expression in estrogen receptor (ER) positive patients was significantly higher than that in ER negative patients (P < 0.05). The expression of ALDH1 and BCRP protein was not correlated with age, menopause, tumor size, histological grade, TNM stage and progesterone receptor (PR) (P > 0.05). There was no correlation between the expression of ALDH1 and BCRP protein in breast cancer (rs=-0.092, P > 0.05). Conclusion ALDH1 and BCRP may play an important role in the development of breast cancer, which may be involved in the tumor invasion, metastasis etc.

    [Key words] Aldehyde dehydrogenase 1; Breast cancer resistance protein; Breast cancer; Pathological characteristics

    乳腺癌是臨床上較為常見的惡性腫瘤,且近年來呈現(xiàn)出了明顯的上升趨勢,美國癌癥協(xié)會報道中乳腺癌在女性新發(fā)病歷中居于首位[1]。由此可見乳腺癌在人群中的疾病負(fù)擔(dān)較重,因此對乳腺癌的發(fā)病機制的研究極為重要,是我們對乳腺癌預(yù)防、診斷、治療的基石。對于乳腺癌發(fā)病及侵襲機制的研究,可以為臨床上乳腺癌患者的靶向治療提供新的靶點,并可以為乳腺癌患者的臨床預(yù)后評估提供可靠的實驗室指標(biāo)。我們知道,一些腫瘤生物學(xué)指標(biāo)可以促進癌細胞的增殖與分化,進而參與到癌癥的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移等過程。有基礎(chǔ)研究報道,乙醛脫氫酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)以及乳腺癌耐藥蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)可以通過誘導(dǎo)癌細胞細胞周期調(diào)控異常,提高癌組織對于抗癌藥物的耐受能力,進而促進乳腺癌的發(fā)生發(fā)展[2-4]。然而,在臨床研究中,ALDH1以及BCRP是否與乳腺癌的發(fā)生及疾病進展有關(guān)尚未見報道,因此,本研究將選取在四川大學(xué)華西醫(yī)院(以下簡稱“我院”)治療的乳腺癌患者84例,重點探討了ALDH1和BCRP在乳腺癌患者中的異常表達,并分析其與乳腺癌患者臨床病理特征間的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2013年1月~2016年3月在我院治療的乳腺癌患者84例,均為女性患者,年齡29~65歲,中位年齡50歲。納入標(biāo)準(zhǔn):①均接受乳腺全切手術(shù)的乳腺癌患者,術(shù)后均經(jīng)病理證實為浸潤性導(dǎo)管癌;②術(shù)前未接受放化療等治療;③患者及家屬知情同意并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①臨床病理資料欠缺;②術(shù)前接受放化療等治療;③選取的對照組標(biāo)本中有腫瘤累及病例。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

    1.2 染色及檢測方法

    1.2.1 染色方法 ①組織固定及保存:采取組織后,4%多聚甲醛中4℃固定過夜,置于70%酒精中4℃保存。②組織的包埋:將保存于4℃、70%酒精中的組織分別置于80%酒精15 min、95%酒精15 min,100%酒精15 min×2次,1/2酒精1/2透明劑60 min,透明劑60 min×2次,1/2透明劑1/2石蠟90 min,石蠟120 min×2次,將組織放入盛有石蠟的模具中,擺好位置,于石蠟包埋機的冷臺上冷卻。③切片及貼片:將包埋好的組織置于切片機上,切片厚度為3~5 μm,放于展片機中展開,將組織切片撈于多聚賴氨酸載玻片上,編號,60℃烤干1 h,貼片后60℃烤片2~3 h,后置于4℃保存。④脫蠟及脫水:先后使用使用等體積二甲苯及無水乙醇充分混合備用,脫蠟脫水時依次使用如下溶液及時間進行沖洗:二甲苯(5 min×2次)→二甲苯-無水乙醇溶液(5 min)→無水乙醇(5 min×2次)→95%乙醇(5 min)→70%乙醇(5 min)→50%乙醇(5 min)→自來水沖洗(5 min)。⑤抗原修復(fù):將切片置入盛有10 mmol/L檸檬酸鈉緩沖液的容器內(nèi)在微波爐內(nèi)煮沸,后在亞沸騰溫度下孵育10 min后流水沖洗5 min。⑥室溫下使用5%山羊血清封閉切片30 min。⑦將ALDH1及BCRP抗體(鼠來源,南京碧云天生物科技有限公司)分別稀釋200倍,分別采用滴染法小心添加一抗,確保待染組織被一抗染液完全包被,在室溫下孵育1.5 h后轉(zhuǎn)入濕盒內(nèi)放入4℃冰箱內(nèi)孵育過夜。⑧室溫下孵育二抗1 h,酶法檢測。⑨流水沖洗,脫水并封片,顯微鏡下放大400倍觀察。OLIPICS電子顯微鏡購自上海精密儀器有限公司,配套試劑購自南京泰康生物科技有限公司。

    1.2.2 判讀標(biāo)準(zhǔn) 按切片中細胞有無顯色及顯色深淺進行評分,無顯色為0分,淺棕色為1分,深棕色為2分。按顯色細胞比例進行評分:0%~10%記0分,10%~<30%記1分,30%~<70%記2分,≥70%記3分。以上2項評分之和作為積分,按積分高低判讀表達水平,0分為陰性,1~2分為低表達,3~5分為高表達。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料用率表示,組間比較采用χ2檢驗,相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析,以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 ALDH1和BCRP在乳腺癌和癌旁組織中的表達情況

    乳腺癌組織ALDH1和BCRP蛋白表達率分別為70.24%和72.62%,明顯高于癌旁正常組織(P < 0.01)。見表1、圖1(封四)。

    2.2 ALDH1、BCRP表達與病理特征關(guān)系

    腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移患者ALDH1和BCRP蛋白表達陽性率明顯高于無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05);ER陽性患者BCRP蛋白表達陽性率明顯高于ER陰性患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05);ALDH1和BCRP蛋白表達與患者年齡、絕經(jīng)情況、腫瘤大小、組織分級、TNM分期和PR無關(guān)(P > 0.05)。見表2。

    2.3 相關(guān)性分析

    乳腺癌患者ALDH1和BCRP蛋白表達無相關(guān)性(rs=-0.092,P > 0.05)。

    3 討論

    在年齡大于35歲的育齡期女性中,乳腺癌的發(fā)病率較高,可較普通對照人群上升3~4倍[5]。特別是在具有遺傳易感因素[6]、吸煙[7]及BRC1[8]基因突變等人群中,乳腺癌的發(fā)病率更高。一項臨床回顧性分析研究顯示,乳腺癌的5年生存率為80.60%[9],病死率較高[1],而通過對于乳腺癌發(fā)病過程中相關(guān)腫瘤生物學(xué)機制的研究,可以為臨床上早期干預(yù)提供依據(jù),從而改善遠期生存預(yù)后。

    ALDH1可以通過影響到乳清酸脫氫酶的活性,進而參與到糖代謝、三羧酸循環(huán)及氧化呼吸鏈傳遞等生理過程中,ALDH1的異常表達可以影響癌細胞葡萄糖代謝、能量利用等,進而促進癌細胞的異常分化[10-12]?;A(chǔ)生物學(xué)機制研究也顯示,ALDH1對于下游癌基因轉(zhuǎn)錄蛋白的磷酸化修飾,可以提高細胞周期中G1/G0期比例,促進癌細胞快速跨越G0期,進而促進癌細胞的增殖異常[13-14]。乳腺癌耐藥蛋白BCRP的表達異常,可以促進癌細胞膜內(nèi)的抗癌藥物的排出,導(dǎo)致抗癌藥物生物活性的下降,進而促進癌細胞對于藥物的耐受。同時,BCRP可以增強細胞膜上ATP依賴性的轉(zhuǎn)運蛋白的活性,進而促進細胞膜內(nèi)抗癌藥物經(jīng)過轉(zhuǎn)運蛋白的外排,提高其耐藥能力。已有的研究探討了BCRP及ALDH1在乳腺癌組織中的異常表達[15-17],但缺乏對于二者與乳腺癌臨床病理特征間的關(guān)系研究。

    本研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌組織中的BCRP及ALDH1的陽性表達率均可達50%以上,陽性表達率較高,明顯高于癌旁正常對照,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01),提示BCRP及ALDH1可能參與到乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中。BCRP及ALDH1的異常表達,可以通過影響到癌細胞侵襲能力、對于臨近正常組織的浸潤及遠處器官的轉(zhuǎn)移等,進而促進乳腺癌患者病情的進展。王瑾等[18-19]研究者通過回顧性分析研究了82例樣本量的臨床資料,發(fā)現(xiàn)乳腺導(dǎo)管細胞癌組織中的BCRP及ALDH1表達陽性率可較正常對照組織上升25%以上,且患者的病情越為嚴(yán)重、臨床預(yù)后越差,BCRP及ALDH1的表達陽性率越高,這與本研究的結(jié)論較為一致。在具有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中,BCRP及ALDH1的表達陽性率較高,高于陰性表達組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,從生物學(xué)機制上考慮,BCRP及ALDH1的異常表達與乳腺癌關(guān)系主要可能與以下原因有關(guān):①BCRP及ALDH1的高表達,在促進細胞線粒體氧化應(yīng)激損傷、促進癌細胞細胞周期調(diào)控異常的同時,可以促進其對于淋巴結(jié)內(nèi)皮細胞的浸潤,促進癌細胞通過淋巴管進行轉(zhuǎn)移;②BCRP及ALDH1的異常表達,可以通過新生的微淋巴結(jié)及淋巴液引流等途徑,進而導(dǎo)致腋窩淋巴結(jié)的陽性表現(xiàn)。同時,本研究發(fā)現(xiàn)ER陽性患者BCRP蛋白表達陽性率為87.50%,提示BCRP的表達與雌激素受體信號通路的異常激活可能存在一定的相關(guān)性,BCRP的異常表達可以加劇ER激活導(dǎo)致的細胞內(nèi)第二信使的上調(diào),提高三磷酸腺苷或者鈣離子的濃度,進而導(dǎo)致信號傳導(dǎo)異?;蛘甙┘毎惓T鲋车陌l(fā)生[20]。但本研究并未發(fā)現(xiàn)組織分級、TNM分期和PR與相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)的關(guān)系,同時BCRP及ALDH1二者并不相關(guān)。

    綜上所述,ALDH1和BCRP在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中有一定作用,可能參與了腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等。但本研究對于ALDH1和BCRP與乳腺癌患者的5年生存率或者中位生存時間等的關(guān)系研究不足,存在一定的局限性。

    [參考文獻]

    [1] Siegel RL,Miller KD,Jemal A,et al. Cancer Statistics [J]. CA Cancer J Clin,2016,66(1):7-30.

    [2] 陳思穎,蔡江霞,張蔚鵬,等.紫杉醇誘導(dǎo)的乳腺癌耐藥細胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J].中國藥學(xué)雜志,2014,22(10):825-832.

    [3] 岳玉函,曹海玲,袁靜,等.乳腺癌組織中耐藥蛋白的表達及化療耐藥性的相關(guān)性研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)報,2014,25(3):211-216.

    [4] 任香,舒春貴.HIF-1α和BCRP在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達及臨床意義[J].中國癌癥防治雜志,2014,32(3):289-291.

    [5] Sarika PR,Nirmala RJ. Curcumin loaded gum arabic aldehyde-gelatin nanogels for breast cancer therapy [J]. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl,2016,65(6):331-337.

    [6] 連臻強,王頎.遺傳性乳腺癌的易感基因檢測與咨詢策略[J].醫(yī)學(xué)與哲學(xué),2016,37(18):11-13.

    [7] 湯靜.2013年杭州市歸因于吸煙的肺癌、胃癌、乳腺癌疾病負(fù)擔(dān)研究[D].杭州:杭州師范大學(xué),2016.

    [8] Asadi S,Nazirzadeh A. Genomic analysis of one allele of a gene HER2/NEU,ERBB1,BRCA1,BRC [J]. 2016.

    [9] Nandekar PP,Khomane K,Chaudhary V,et al. Identification of leads for antiproliferative activity on MDA-MB-435 human breast cancer cells through pharmacophore and CYP1A1-mediated metabolism [J]. Eur J Med Chem,2016, 115:82-93.

    [10] 韓明利,吳誠義,莫志強,等.外源性TGF-β1誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細胞的乙醛脫氫酶1 mRNA及蛋白表達[J].復(fù)旦學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2011,22(4):340-342.

    [11] 王征,張浩,李偉漢,等.乙醛脫氫酶1在浸潤性乳腺癌局部復(fù)發(fā)組織中的表達及意義[J].廣東醫(yī)學(xué),2014,34(16):2589-2591.

    [12] 王興,姜真,孫長崗.乙醛脫氫酶1與乳腺癌耐藥蛋白在乳腺癌中的表達及相關(guān)性研究[J].中國癌癥雜志,2014, 25(3):175-181.

    [13] 蔡建英,吳誠義.乳腺癌中乙醛脫氫酶1與上皮性鈣黏蛋白、神經(jīng)性鈣黏蛋白關(guān)系的研究[J].中國醫(yī)藥生物術(shù),2014,24(3):231-233.

    [14] 關(guān)欣,董毅,鄒亞斌,等.乙醛脫氫酶1在腫瘤細胞質(zhì)中表達和腫瘤細胞基質(zhì)中表達與乳腺癌患者預(yù)后關(guān)系的臨床研究[J].中國婦幼保健,2016,31(13):2736-2738.

    [15] Xu LI,Huang S,Gaili AN,et al. Clinical significance of ALDH1 expression in breast cancer:aMeta analysis [J]. Chinese Journal of Difficult & Complicated Cases,2016.

    [16] Horimoto Y,Arakawa A,Sasahara N,et al. Combination of Cancer Stem Cell Markers CD44 and CD24 Is Superior to ALDH1 as a Prognostic Indicator in Breast Cancer Patients with Distant Metastases [J]. PLoS One,2016,11(10):e0165253.

    [17] Thomas ML,De Antueno R,Coyle KM,et al. Citral reduces breast tumor growth by inhibiting the cancer stem cell marker ALDH1A3 [J]. Molecular Oncology,2016,10(9):1485-1496.

    [18] 劉新麗,李偉東,劉芳芳,等.乳腺浸潤微乳頭狀癌中乙醛脫氫酶-1表型細胞的研究[J].中華內(nèi)分泌外科雜志,2014,25(2):93-100.

    [19] 王瑾.乙醛脫氫酶在乳腺癌中的研究進展[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012,37(7):874-876.

    [20] 侯亮,馮海利.腦膠質(zhì)瘤組織中P-gp、MRP、BCRP的表達及臨床意義[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2017,14(35):12-15.

    (收稿日期:2018-01-03 本文編輯:任 念)

    猜你喜歡
    病理特征乳腺癌
    絕經(jīng)了,是否就離乳腺癌越來越遠呢?
    中老年保健(2022年6期)2022-08-19 01:41:48
    中醫(yī)治療乳腺癌的研究進展
    乳腺癌是吃出來的嗎
    胸大更容易得乳腺癌嗎
    別逗了,乳腺癌可不分男女老少!
    祝您健康(2018年5期)2018-05-16 17:10:16
    新疆維吾爾族非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變與病理特征的相關(guān)性研究
    50例青年女性乳腺癌臨床治療效果和病理分析
    T1期外周型肺癌臨床病理特征及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分析
    炎癥性乳腺癌的臨床病理特征及生物學(xué)行為分析
    原發(fā)性胃腸道粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤病理研究
    国产视频一区二区在线看| av国产免费在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 人妻久久中文字幕网| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美黑人巨大hd| 免费一级毛片在线播放高清视频| 制服丝袜大香蕉在线| 久久久久久久久中文| 久久亚洲真实| 国产三级在线视频| 国产亚洲精品一区二区www| 色综合亚洲欧美另类图片| 中亚洲国语对白在线视频| 午夜免费成人在线视频| 无限看片的www在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| av视频在线观看入口| 久久欧美精品欧美久久欧美| 色av中文字幕| 久久精品综合一区二区三区| 国产99白浆流出| 色尼玛亚洲综合影院| 夜夜爽天天搞| 久久久成人免费电影| 91在线观看av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久久久久久久免费视频了| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 又紧又爽又黄一区二区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 最近最新免费中文字幕在线| АⅤ资源中文在线天堂| 国产男靠女视频免费网站| 午夜福利成人在线免费观看| а√天堂www在线а√下载| 男人舔奶头视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产精品,欧美在线| 99久久99久久久精品蜜桃| а√天堂www在线а√下载| 欧美又色又爽又黄视频| 国产亚洲精品av在线| 国产激情久久老熟女| aaaaa片日本免费| 天堂√8在线中文| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲人成伊人成综合网2020| 五月伊人婷婷丁香| 九色国产91popny在线| 国产精品女同一区二区软件 | 又爽又黄无遮挡网站| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产三级在线视频| 免费无遮挡裸体视频| 一本精品99久久精品77| 性色avwww在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 日本黄大片高清| 精品无人区乱码1区二区| 九九热线精品视视频播放| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产精品 欧美亚洲| 性色avwww在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 午夜免费观看网址| 成年版毛片免费区| 热99在线观看视频| 国产高潮美女av| a级毛片在线看网站| 亚洲国产欧美网| 免费看美女性在线毛片视频| 真人做人爱边吃奶动态| 日本a在线网址| 成人18禁在线播放| 长腿黑丝高跟| 欧美乱色亚洲激情| 久久人妻av系列| 男女下面进入的视频免费午夜| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲在线观看片| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 婷婷精品国产亚洲av| 天堂影院成人在线观看| 制服丝袜大香蕉在线| 免费高清视频大片| 亚洲中文字幕日韩| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 变态另类丝袜制服| 色在线成人网| 婷婷精品国产亚洲av| 狂野欧美激情性xxxx| 国产三级在线视频| 日韩欧美国产在线观看| 国产成人影院久久av| 欧美午夜高清在线| 网址你懂的国产日韩在线| 老鸭窝网址在线观看| 999久久久国产精品视频| 禁无遮挡网站| 日本黄色视频三级网站网址| 免费观看的影片在线观看| 国产精品av久久久久免费| 黄色女人牲交| 日本一二三区视频观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 曰老女人黄片| tocl精华| 久久中文看片网| 精品久久久久久成人av| 最近视频中文字幕2019在线8| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 全区人妻精品视频| 曰老女人黄片| 精品一区二区三区视频在线 | 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 999久久久国产精品视频| 在线观看免费视频日本深夜| 伦理电影免费视频| bbb黄色大片| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美最黄视频在线播放免费| www.精华液| 亚洲av电影不卡..在线观看| 999久久久国产精品视频| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲人成电影免费在线| 日本a在线网址| avwww免费| 色哟哟哟哟哟哟| 波多野结衣巨乳人妻| 制服人妻中文乱码| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲专区中文字幕在线| 日韩精品中文字幕看吧| 国产三级中文精品| 成年免费大片在线观看| 欧美激情在线99| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产一级毛片七仙女欲春2| 99热这里只有精品一区 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 成人三级做爰电影| 日本一二三区视频观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 搡老熟女国产l中国老女人| 婷婷丁香在线五月| 黄色片一级片一级黄色片| 婷婷六月久久综合丁香| 国产高潮美女av| www日本在线高清视频| 制服人妻中文乱码| 国产亚洲欧美98| 久久九九热精品免费| 日本a在线网址| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 精品一区二区三区四区五区乱码| 成人无遮挡网站| 亚洲无线在线观看| 国产精品,欧美在线| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产伦一二天堂av在线观看| 级片在线观看| 美女黄网站色视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 身体一侧抽搐| 老司机在亚洲福利影院| 麻豆国产av国片精品| 制服丝袜大香蕉在线| 国产又色又爽无遮挡免费看| 两个人的视频大全免费| 国产精品99久久久久久久久| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美黑人巨大hd| 黄色视频,在线免费观看| 欧美午夜高清在线| 欧美在线黄色| 日韩免费av在线播放| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 99久久成人亚洲精品观看| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品av久久久久免费| 国产乱人视频| 一个人看视频在线观看www免费 | 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 一级黄色大片毛片| 91九色精品人成在线观看| 国产精品永久免费网站| 天堂√8在线中文| 久久国产乱子伦精品免费另类| 成人国产综合亚洲| h日本视频在线播放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩大尺度精品在线看网址| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 91久久精品国产一区二区成人 | 色在线成人网| 又粗又爽又猛毛片免费看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产亚洲av高清不卡| 成人三级做爰电影| 美女高潮的动态| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲无线在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美乱妇无乱码| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 天堂网av新在线| 精品无人区乱码1区二区| 99国产综合亚洲精品| 免费av毛片视频| 亚洲av成人一区二区三| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 男人舔女人的私密视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 欧美成人性av电影在线观看| 国产av不卡久久| 久久久久久久久久黄片| 国产三级中文精品| 精品国产亚洲在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| а√天堂www在线а√下载| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲国产欧美人成| 亚洲九九香蕉| 久久久久久久久久黄片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 免费在线观看亚洲国产| 偷拍熟女少妇极品色| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美黄色片欧美黄色片| 男女午夜视频在线观看| 中文字幕高清在线视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 成人无遮挡网站| 99国产综合亚洲精品| 亚洲18禁久久av| 亚洲精品色激情综合| 国产三级黄色录像| 亚洲av电影在线进入| 成年女人永久免费观看视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产av在哪里看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 在线a可以看的网站| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 无限看片的www在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品一区二区三区视频在线 | 99久久成人亚洲精品观看| 成人18禁在线播放| 亚洲av美国av| 亚洲av成人一区二区三| 精品国内亚洲2022精品成人| 午夜福利免费观看在线| 久久中文字幕人妻熟女| 成在线人永久免费视频| 波多野结衣高清作品| 亚洲激情在线av| 国产三级在线视频| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲一区二区三区色噜噜| 午夜精品一区二区三区免费看| 一本精品99久久精品77| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲第一电影网av| xxx96com| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久久久久久久免费视频了| 看免费av毛片| 精品久久久久久成人av| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲在线自拍视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 在线观看日韩欧美| 三级毛片av免费| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 国产1区2区3区精品| 免费在线观看成人毛片| 国产成人aa在线观看| 久99久视频精品免费| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美三级亚洲精品| 日韩欧美在线乱码| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久热在线av| 在线国产一区二区在线| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产精品99久久久久久久久| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国内精品一区二区在线观看| 日日夜夜操网爽| 人人妻人人看人人澡| 1024手机看黄色片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 久久久国产欧美日韩av| 我的老师免费观看完整版| 免费看a级黄色片| 成人三级黄色视频| 日本 av在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 麻豆成人av在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 午夜成年电影在线免费观看| 九色国产91popny在线| 久久人妻av系列| 搞女人的毛片| 伦理电影免费视频| 午夜精品在线福利| 久久久久国内视频| www.www免费av| 又大又爽又粗| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 深夜精品福利| 天堂√8在线中文| 我要搜黄色片| 美女午夜性视频免费| 99在线人妻在线中文字幕| 国产黄a三级三级三级人| 视频区欧美日本亚洲| 极品教师在线免费播放| 国产精品av视频在线免费观看| www.自偷自拍.com| 我的老师免费观看完整版| 色在线成人网| 老汉色av国产亚洲站长工具| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲精品粉嫩美女一区| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久久国产成人免费| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日本a在线网址| 51午夜福利影视在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 一级作爱视频免费观看| 成人鲁丝片一二三区免费| www国产在线视频色| 免费在线观看成人毛片| 成人18禁在线播放| 色综合婷婷激情| 99久久99久久久精品蜜桃| 熟女电影av网| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久亚洲精品不卡| 久久久久久大精品| 欧美成人性av电影在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 午夜福利免费观看在线| 18禁观看日本| 老汉色∧v一级毛片| 曰老女人黄片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美zozozo另类| av视频在线观看入口| 色综合亚洲欧美另类图片| avwww免费| 国产精品综合久久久久久久免费| 曰老女人黄片| 久久热在线av| 日本黄色片子视频| 久久性视频一级片| 18禁美女被吸乳视频| 十八禁网站免费在线| 午夜免费成人在线视频| 好男人电影高清在线观看| av国产免费在线观看| 精品国产亚洲在线| 麻豆成人av在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲av五月六月丁香网| 日韩精品青青久久久久久| 日韩欧美 国产精品| 久久国产乱子伦精品免费另类| 搡老岳熟女国产| 在线观看一区二区三区| 久久精品人妻少妇| 国产三级在线视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产99白浆流出| 男人舔奶头视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 男女之事视频高清在线观看| 欧美激情在线99| 男女视频在线观看网站免费| 无人区码免费观看不卡| 国产人伦9x9x在线观看| 中文字幕高清在线视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 午夜福利高清视频| ponron亚洲| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 亚洲最大成人中文| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产成人福利小说| 久久精品91无色码中文字幕| 又大又爽又粗| 很黄的视频免费| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲成人久久性| 亚洲美女视频黄频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 免费高清视频大片| 国产精品久久视频播放| 国产亚洲av嫩草精品影院| 老司机午夜福利在线观看视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日韩免费av在线播放| 亚洲精品在线观看二区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产精品女同一区二区软件 | 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品精品国产色婷婷| 听说在线观看完整版免费高清| 日韩成人在线观看一区二区三区| 男人舔奶头视频| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲熟女毛片儿| 免费看a级黄色片| 少妇丰满av| 88av欧美| 一个人看视频在线观看www免费 | 国产黄色小视频在线观看| av国产免费在线观看| 久久精品91蜜桃| 999久久久国产精品视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美激情在线99| 亚洲av成人精品一区久久| 成人特级黄色片久久久久久久| 极品教师在线免费播放| 国产亚洲欧美98| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 深夜精品福利| 欧美色视频一区免费| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 99国产极品粉嫩在线观看| 黄频高清免费视频| 亚洲在线自拍视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲九九香蕉| 日本三级黄在线观看| 中文资源天堂在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 一本久久中文字幕| 男女那种视频在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲乱码一区二区免费版| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产激情久久老熟女| 一区二区三区高清视频在线| 长腿黑丝高跟| 午夜福利成人在线免费观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| www.999成人在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 欧美日韩国产亚洲二区| 日韩精品青青久久久久久| 国模一区二区三区四区视频 | 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产乱人视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 夜夜爽天天搞| 久久国产精品人妻蜜桃| 一进一出抽搐gif免费好疼| 偷拍熟女少妇极品色| 99久国产av精品| 成年女人看的毛片在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 色精品久久人妻99蜜桃| 麻豆一二三区av精品| 亚洲真实伦在线观看| 十八禁人妻一区二区| 国产综合懂色| 国产视频一区二区在线看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美成人免费av一区二区三区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产精品野战在线观看| 99视频精品全部免费 在线 | 岛国视频午夜一区免费看| 午夜福利视频1000在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 国产精品久久久久久久电影 | 国产高清激情床上av| 午夜福利在线观看吧| 91麻豆av在线| 999精品在线视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 热99re8久久精品国产| 一级毛片女人18水好多| 黄色 视频免费看| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲人成电影免费在线| 免费一级毛片在线播放高清视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 美女扒开内裤让男人捅视频| www日本在线高清视频| 18禁观看日本| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美一级毛片孕妇| 日韩中文字幕欧美一区二区| 天天添夜夜摸| 日韩欧美在线二视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 岛国视频午夜一区免费看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 动漫黄色视频在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| www.熟女人妻精品国产| 999久久久国产精品视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 一本综合久久免费| 99国产综合亚洲精品| 成人精品一区二区免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 最近在线观看免费完整版| 老司机深夜福利视频在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 国产单亲对白刺激| 国产野战对白在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 成人国产综合亚洲| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日韩欧美国产在线观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 色综合站精品国产| 色尼玛亚洲综合影院| av中文乱码字幕在线| 十八禁人妻一区二区| 成人永久免费在线观看视频| 免费av毛片视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产一级毛片七仙女欲春2| 两个人视频免费观看高清| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 看免费av毛片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 欧美一区二区国产精品久久精品| xxxwww97欧美| 动漫黄色视频在线观看| 国模一区二区三区四区视频 | 91av网一区二区| 一级作爱视频免费观看| 不卡一级毛片| 母亲3免费完整高清在线观看| 香蕉久久夜色| 97超视频在线观看视频| 国产精品 欧美亚洲| 久久欧美精品欧美久久欧美| 毛片女人毛片| 亚洲色图av天堂| 69av精品久久久久久| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲精品在线美女| 久久午夜亚洲精品久久| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产精品av久久久久免费| 国产亚洲精品av在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 麻豆成人午夜福利视频| 久久精品91蜜桃| 91在线精品国自产拍蜜月 | 欧美国产日韩亚洲一区| 久久人人精品亚洲av| 两人在一起打扑克的视频| 美女大奶头视频|