27%氧氟·二氯吡懸浮劑高效液相色譜分析方法

李 婷，唐麗霖，高婷婷，許艷秋，高立明，吳春先

（四川省農(nóng)藥檢定所，成都 610041）

二氯吡啶酸（clopyralid）化學(xué)名稱為3,6-二氯吡啶-2-羧酸，它是美國(guó)陶氏益農(nóng)公司開發(fā)的一種具有吡啶羧酸結(jié)構(gòu)的合成激素類除草劑，經(jīng)由植物的根和葉吸收，并在植物體內(nèi)傳導(dǎo)。二氯吡啶酸常用于油菜、玉米、草坪等防除一年生闊葉雜草和多年生闊葉雜草（菊科和豆科雜草）[1]。乙氧氟草醚（oxyfluorfen）化學(xué)名稱2-氯-α,α,α-三氟對(duì)甲苯基-(3-乙氧基-4-硝基苯基)醚，它為觸殺型除草劑，在有光的情況下發(fā)揮除草作用。其主要經(jīng)由胚芽鞘、中胚軸進(jìn)入植物體，少量經(jīng)根部吸收。乙氧氟草醚適合在苗前和苗后早期施用，防除闊葉雜草、莎草及稗草，對(duì)多種以種子繁殖的雜草有良好的防除效果，且對(duì)多年生雜草有一定的抑制作用[2]。目前國(guó)內(nèi)報(bào)道的二氯吡啶酸分析方法多采用高效液相色譜，乙氧氟草醚的分析方法有氣相色譜內(nèi)標(biāo)法、高效液相色譜外標(biāo)法[3-5]。采用高效液相色譜同時(shí)對(duì)復(fù)配制劑中二氯吡啶酸和乙氧氟草醚進(jìn)行定性、定量分析的方法尚未見(jiàn)報(bào)道。本文建立了高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法對(duì)二氯吡啶酸與乙氧氟草醚復(fù)配懸浮劑進(jìn)行分析，為其質(zhì)量控制提供了簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、有效的分析方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

Waters 2695高效液相色譜儀，帶2996二極管陣列檢測(cè)器和Empower工作站；色譜柱：ODS C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm）。

乙腈（HPLC級(jí)）、磷酸（分析純）、聯(lián)苯（分析純）；二氯吡啶酸標(biāo)樣（98%）、乙氧氟草醚標(biāo)樣（99%）、27%氧氟·二氯吡懸浮劑（18%乙氧氟草醚＋9%二氯吡啶酸），四川利爾作物科學(xué)有限公司。

1.2 色譜操作條件

流動(dòng)相：乙腈＋0.1%磷酸水溶液，采用梯度洗脫，條件見(jiàn)表1。流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm；進(jìn)樣體積：3 μL。保留時(shí)間：二氯吡啶酸約為5.4 min，內(nèi)標(biāo)物聯(lián)苯約為14.2 min，乙氧氟草醚約為16.3 min。

表1 梯度洗脫條件

上述液相色譜操作條件系典型操作參數(shù)，實(shí)際操作中可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)，對(duì)給定的操作參數(shù)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。典型的標(biāo)樣及27%氧氟·二氯吡懸浮劑樣品高效液相色譜圖見(jiàn)圖1和圖2。

圖1 標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 27%氧氟·二氯吡懸浮劑液相色譜圖

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制

稱取約2 g（準(zhǔn)確至0.000 2 g）聯(lián)苯于500 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，搖勻作為內(nèi)標(biāo)溶液備用。

1.3.2 標(biāo)樣溶液的配制

稱取二氯吡啶酸標(biāo)樣約0.04 g（準(zhǔn)確至0.000 2 g）、乙氧氟草醚標(biāo)樣0.08 g（準(zhǔn)確至0.000 2 g）于50

式中：A1為標(biāo)樣溶液中二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的平均值；A2為試樣溶液中二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的平均值；m1為二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中，二氯吡啶酸（乙氧氟草醚）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入5.0 mL內(nèi)標(biāo)溶液，再用乙腈溶解并定容，搖勻，超聲波溶解5 min，靜置，備用。

1.3.3 試樣溶液的配制

稱取27%氧氟·二氯吡懸浮劑樣品約0.45 g（準(zhǔn)確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，加入少量水溶解樣品，準(zhǔn)確加入5.0 mL內(nèi)標(biāo)溶液，用乙腈溶解并定容，搖勻，超聲波溶解5 min，靜置，備用。

1.3.4 測(cè)定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針中二氯吡啶酸（乙氧氟草醚）的響應(yīng)值相對(duì)變化＜1.5%，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.3.5 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值分別進(jìn)行平均，試樣中二氯吡啶酸（乙氧氟草醚）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

分別以不同比例的甲醇＋水、乙腈＋水、甲醇＋0.1%磷酸水溶液、乙腈＋0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，對(duì)試樣進(jìn)行分離檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)以乙腈＋0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相時(shí)，二氯吡啶酸、乙氧氟草醚和聯(lián)苯能得到有效分離。因二氯吡啶酸極性強(qiáng)，保留時(shí)間較短，而乙氧氟草醚極性較弱，保留時(shí)間較長(zhǎng)，采用等度洗脫難以有效分離，故選擇梯度洗脫進(jìn)行樣品分離。在選定的洗脫條件下，三者的分離效果較好，峰形對(duì)稱，且保留時(shí)間適中。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的選擇

以聯(lián)苯、對(duì)氯苯酚、癸二酸二丁酯等為內(nèi)標(biāo)物，在相同色譜條件下對(duì)二氯吡啶酸及乙氧氟草醚的出峰情況以及吸收波長(zhǎng)進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，以聯(lián)苯為內(nèi)標(biāo)物最為合適。

2.3 吸收波長(zhǎng)的選擇

通過(guò)Waters 2996二極管陣列檢測(cè)器的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得二氯吡啶酸、乙氧氟草醚和內(nèi)標(biāo)物聯(lián)苯200～400 nm的吸收波長(zhǎng)掃描圖（圖3）。二氯吡啶酸在194、224、281 nm有較好的吸收；乙氧氟草醚在194～240 nm有較好的吸收；聯(lián)苯在200、248 nm有較好的吸收。三者在195 nm處均有最大吸收波長(zhǎng)，但受雜質(zhì)影響較大。二氯吡啶酸和乙氧氟草醚在225～240 nm均有較好吸收，且聯(lián)苯在235 nm也有較大吸收。在235 nm波長(zhǎng)下，基線平穩(wěn)，雜質(zhì)吸收較小，主峰和雜質(zhì)峰分離效果較好。故確定235 nm為本分析方法的檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖3 二氯吡啶酸、乙氧氟草醚與聯(lián)苯紫外吸收譜圖

2.4 分析方法的線性相關(guān)性

分別稱取二氯吡啶酸和乙氧氟草醚標(biāo)樣于50 mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入聯(lián)苯內(nèi)標(biāo)溶液5.0 mL，用乙腈定容。分別配制5個(gè)不同質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析。以標(biāo)樣溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，二氯吡啶酸（或乙氧氟草醚）與內(nèi)標(biāo)物聯(lián)苯的峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。二氯吡啶酸的線性方程為y=0.358 4 x-0.001 0，R2為1.000 0；乙氧氟草醚的線性方程為y=0.385 0 x-0.027 1，R2為0.999 3。

2.5 分析方法的精密度

從同一個(gè)27%氧氟·二氯吡懸浮劑中準(zhǔn)確稱取5個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 分析方法的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

樣品中二氯吡啶酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.10%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.017 8，變異系數(shù)為0.19%；乙氧氟草醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18.31%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.101 8，變異系數(shù)為0.55%。

2.6 分析方法的準(zhǔn)確度

以已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的27%氧氟·二氯吡懸浮劑樣品為本底，分別加入一定量的二氯吡啶酸和乙氧氟草醚標(biāo)樣于50 mL的容量瓶中，準(zhǔn)確加入5.0 mL內(nèi)標(biāo)溶液，用乙腈定容。按上述色譜操作條件測(cè)定二氯吡啶酸和乙氧氟草醚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。二氯吡啶酸的回收率為99.11%～101.75%，平均回收率為100.75%；乙氧氟草醚的回收率為100.30%～101.63%，平均回收率為101.03%，數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本文通過(guò)對(duì)高效液相色譜分析條件的選擇與優(yōu)化，建立了27%氧氟·二氯吡懸浮劑的高效液相色譜內(nèi)標(biāo)分析方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法準(zhǔn)確度和精密度高，線性關(guān)系良好，具有簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，是27%氧氟·二氯吡懸浮劑質(zhì)量檢測(cè)和監(jiān)測(cè)可行的分析方法。