染色體畸變檢測在自然流產絨毛組織染色體核型分析中的應用

嚴兆華 范可心 陳惠娟

多種因素會導致妊娠期產婦出現(xiàn)自然流產的情況, 大多數(shù)學者認為胚胎染色體異常是導致產婦早期自然流產的主要原因［1,2］。但常規(guī)性的細胞遺傳學檢測方式對其染色體異常檢出率比較低, 所以臨床需要探索一個檢出率更高的用于自流流產病因學分析的染色體檢測方式［3］。因此, 本文主要探討染色體畸變檢測在自然流產絨毛組織染色體型分析中的具體應用價值, 為提升自然流產絨毛組織染色體型分析正確率提供合理的參考檢測方式?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年1月~2018年1月于本院治療的妊娠后自然流產患者300例作為研究對象, 在產婦流產前對其進行B超檢查均提示胚胎停止發(fā)育, 同時將孕期感染患者排除在此次研究之外。本次研究均得到患者的知情同意并簽訂知情同意書。按照隨機數(shù)字表法分為對照組與觀察組,每組150例。對照組年齡21~35歲, 平均年齡(25.35±5.20)歲；孕次1~3次；平均孕次(2.01±1.02)次；產次1~3次, 平均產次(2.51±0.40)次；孕齡9.1~14.6周, 平均孕齡(11.02±2.01)周。觀察組年齡22~37歲, 平均年齡(28.41±4.17)歲；孕次1~4次, 平均孕次(3.22±1.75)次；產次0~4次, 平均產次(2.75±0.38)次；孕齡9.7~14.5周, 平均孕齡(11.18±2.23)周。兩組產婦年齡、孕次、產次以及孕齡等一般資料比較, 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 對照組采用細胞培養(yǎng)染色體核型檢測, 觀察組采用染色體畸變檢測。

1.2.1 留取組織標本 對所有患者進行外陰、陰道以及宮頸消毒后行清宮術, 用鑷子將絨毛樣組織夾出, 反復用生理鹽水清洗, 去除母體血液后裝入無菌標本瓶。其中肉眼新鮮絨毛標本130份, 稽留流產陳舊標本170份, 將其連同母親外周血液一同送至某檢驗科檢查。

1.2.2 絨毛細胞培養(yǎng)以及染色體核型分析 在操作過程中要嚴格地遵守無菌操作, 培養(yǎng)絨毛細胞, 培養(yǎng)時間約為5~10 d。借助常規(guī)方式對患者的細胞進行處理, 同時進行染色體制備。在顯微鏡下計算至少25個分裂相, 對6個核型進行分析。

1.2.3 高通量測序檢測方式 從絨毛組織中將微量基因組脫氧核糖核酸(DNA)提取出來, 并通過超聲法將大片段的DNA打斷成比較小片段的核酸, 借助專業(yè)儀器將打斷成片段的DNA粘性末端修復成平末端, 通過3端加堿基“A”, 促使DNA片段和3端帶有“T”堿基的特殊接頭進行連接。在連接完成以后將需要回收的片段產物選擇好, 并構建DNA文庫。使用美國公司的測序儀器平臺, 借助生物信息分析的方式進行測序結果分析。同時將人類參考基因組作為對比項,比較并分析可能出現(xiàn)的染色體異?，F(xiàn)象。

1.2.4 外周血DNA檢測 將孕婦外周血DNA提取出來后,對其進行短串聯(lián)重復序列檢測。

1.3 觀察指標 比較兩組患者檢測成功與陽性情況。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

觀察組檢測成功率與檢測陽性率分別為92.00%(138/150)、94.93%(131/138), 高于對照組的82.67%(124/150)、79.03%(98/124)。差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組患者檢測成功與陽性情況比較［n(%)］

3 討論

近年來, 隨著醫(yī)學技術不斷提升, 分子生物信息技術水平也明顯提升［4］。分子生物信息技術加大了對自然流產遺傳學病因的研究, 其檢測技術水平迅速提升。用于染色體異常檢測的技術方式包括熒光原位雜交技術、基因芯片法技術、多重探針擴增技術等, 但因為技術水平以及成本的約束性條件, 其應用的范圍并不廣泛。染色體異常的診斷金標準為傳統(tǒng)細胞培養(yǎng)染色體核型分析, 其分析成功率比較高［5-7］。但是這種方式具有對標本要求較高, 操作過程相對復雜, 檢驗周期也較長等缺陷。雖然其檢測成功率高, 但仍會存在著誤差性, 其檢測中出現(xiàn)失敗的原因可能集中于細菌污染標本、培養(yǎng)工作失敗、核型差等。另外, 還有學者認為絨毛染色體的形態(tài)、新鮮程度以及妊娠終止時間均會影響絨毛染色體檢測的成功率［8］。絨毛組織培養(yǎng)型分析技術要求標本質量足夠高, 且實驗過程比較復雜, 實驗中又存在著不可控因素, 導致該種檢測方式的成功率低［9］。而研究發(fā)現(xiàn), 染色體畸變檢測技術應用于染色體檢查時, 其對組織標本的要求比較低,其通量和準確度均處于較高水平［10］。這種方式能有效對傳統(tǒng)核型分析缺陷進行彌補, 在染色體異常檢測中逐漸推行。染色體畸變檢測是一種不需要進行細胞培養(yǎng)的檢測方式, 其直接將患者DNA提取出來就可以進行相應的檢測, 這種方式優(yōu)于細胞培養(yǎng)染色體核型分析方式, 有助于提升其檢測的成功率。同時, 由于染色體畸變檢測精準性高, 其能有效提升檢測的陽性率, 降低檢測的假陽性率［6］。染色體畸變檢測技術的異常檢出率高, 但是仍然不能回答染色體結構異常是否會導致患者出現(xiàn)自然流產。

本次研究結果顯示：觀察組檢測成功率與檢測陽性率分別為92.00%、94.93%, 高于對照組的82.67%、79.03%。差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。這說明在自然流產絨毛組織染色體核型分析中應用染色體畸變檢測方式, 其有助于提升患者檢測的成功率與陽性率, 值得臨床借鑒與推廣。