藏紅花素I的分離制備及抗氧化與穩(wěn)定性研究

陳哲，趙慶生，秦雯，趙兵，葛思琪，趙強(qiáng)，查圣華

（1.北京城市學(xué)院，北京100094；2.中國(guó)科學(xué)院過程工程研究所，生化工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100190；3.南陽泰瑞生物科技股份有限公司，河南南陽473412）

藏紅花素（crocin），又稱為西紅花苷、西紅花素，是 以藏紅花素I（crocin I）為主的一類水溶性類胡蘿卜素，是中藥材西紅花中的一類主要藥用成分[1-2]，也是藥典中西紅花的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)[3]，有著廣泛而良好的藥理作用。近年來國(guó)內(nèi)外對(duì)其藥理作用均有著深入廣泛地研究，尤其是在抗癌[4-7]、抗氧化[8-11]、抗心血管疾病[12-14]等領(lǐng)域。此外，藏紅花素I在抗炎、利肝、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等方面均有良好的藥理作用[15-19]，且其毒性較小，一般治療劑量在臨床和試驗(yàn)研究中都沒有明顯毒性[20-21]，安全性良好，可以作為一種潛力巨大的新興藥物成分進(jìn)行廣泛地開發(fā)與應(yīng)用。

但由于西紅花是一味產(chǎn)量稀少、價(jià)格昂貴的名貴中藥材，從西紅花中提取藏紅花素I在實(shí)際的生產(chǎn)中面臨著提取成本過于高昂的問題。而梔子黃色素（gardenia yellow pigment）是一種提取自中藥材梔子（Fructus Gardeniae）的天然黃色素，是梔子的主要開發(fā)產(chǎn)品之一，廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、保健品等領(lǐng)域，其主要成分是藏紅花素I、還有少量的梔子苷、綠原酸及黃酮等[22-25]。作為一種同樣富含藏紅花素I且其成本相對(duì)低廉的替代提取物，梔子黃色素則成為了獲取藏紅花素I的重要資源，值得對(duì)其進(jìn)行廣泛地研究與開發(fā)。

本研究建立了一個(gè)從梔子黃色素中分離制備高純度藏紅花素I的工藝方法，進(jìn)而對(duì)所得產(chǎn)物進(jìn)行了初步的抗氧化性研究，并針對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，為后續(xù)藏紅花素I的研究開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

1 主要儀器與材料

UNICO 2802型紫外-可見分光光度計(jì)：尤尼柯（上海）儀器有限公司；Agilent 1260型高效液相色譜儀：安捷倫科技（中國(guó)）有限公司；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；SHZ-III型循環(huán)水式多用真空泵；上海知信實(shí)驗(yàn)儀器技術(shù)有限公司；CP214型電子天平：奧豪斯儀器（上海）有限公司；CHYSQ-II型超聲波清洗器：誠(chéng)洋生物科技（北京）有限公司；GG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；LGJ-10E型冷凍干燥機(jī)：北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司；DK-98-II A型電熱恒溫水浴鍋：天津市泰斯特儀器有限公司。

梔子黃色素（540色價(jià)）：南陽泰瑞生物科技股份有限公司提供，規(guī)格E540；藏紅花素I標(biāo)準(zhǔn)品（生產(chǎn)批號(hào)H2490050）：北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院；柱層析硅膠（60目～100目，200目～300目）、薄層層析硅膠板（GF254）：青島海洋化工廠分廠；色譜乙腈：賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-dipheny1-2-picryl-hydrazyl，DPPH）、2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）[2，2`-azinobis-（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid，ABTS]：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；抗壞血酸為分析純：西隴化工股份有限公司；乙酸乙酯、甲醇、乙酸等均為分析純：北京化工廠。

2 方法

2.1 洗脫劑因素考察

2.1.1 洗脫劑體系的篩選

綜合查閱《中國(guó)藥典》（2015版）中對(duì)于西紅花中藏紅花素I的薄層檢測(cè)方法以及相關(guān)文獻(xiàn)資料等[3，26-28]，發(fā)現(xiàn)在梔子黃色素相關(guān)試驗(yàn)中所使用的洗脫劑體系主要有氯仿-甲醇、乙酸乙酯-甲醇-水等，因而選取此兩種體系進(jìn)行薄層層析法的篩選考察。

2.1.2 薄層層析法考察洗脫劑體系

取硅膠薄層板于105℃的烘箱中活化30 min，取出冷卻干燥，在距薄層板一端1 cm處用鉛筆輕畫一條水平線，備用。按比例配制展開劑，并向其中按每10 mL加入40 μL的比例加入乙酸以削弱其拖尾的程度。稱取0.1 g梔子黃色素樣品加入100 mL水，超聲溶解，得到濃度為1 mg/mL的梔子黃色素樣品溶液。稱取5 mg藏紅花素I標(biāo)準(zhǔn)品加入10 mL水，超聲溶解，得到濃度為0.5 mg/mL的藏紅花素I標(biāo)準(zhǔn)品溶液。取0.3 mm內(nèi)徑的毛細(xì)管分別點(diǎn)樣，待樣品點(diǎn)溶劑完全揮干后重復(fù)點(diǎn)樣至2個(gè)毛細(xì)管體積，干燥后放入展開槽中進(jìn)行預(yù)飽和，30分鐘后進(jìn)行展開。待展開劑前沿升至距薄層板頂端約1 cm處取出揮干展開劑，于紫外燈下觀察或噴灑20%的硫酸乙醇溶液后觀察現(xiàn)象。

2.2 上樣量因素考察

2.2.1 硅膠柱層析法分離藏紅花素I

稱取柱層析硅膠（200目～300目）放置于105℃的烘箱中活化30 min，取出冷卻干燥，與洗脫劑混合攪拌至均勻無氣泡，快速勻速倒入層析柱中進(jìn)行濕法裝柱，靜置沉降，備用。稱取適量梔子黃色素樣品用甲醇溶解，與等質(zhì)量的柱層析硅膠（60目～100目）混勻、于40℃低溫?fù)]干溶劑后進(jìn)行干法上樣，洗脫，根據(jù)其色帶收集各流分。將收集好的各流分于40℃旋蒸迅速揮干有機(jī)溶劑，加適量純水稀釋后，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，用高效液相色譜進(jìn)行含量測(cè)定。將測(cè)定出含有高純度藏紅花素I的水溶液放入冰箱中冷凍后，放入凍干機(jī)中除去溶劑，得到深紅色的粉末即為藏紅花素I單體。

2.2.2 上樣量比例考察范圍的篩選

首先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，選取柱層析硅膠∶梔子黃色素（質(zhì)量比）為150∶1的比例進(jìn)行上樣洗脫，發(fā)現(xiàn)色帶不清晰且洗脫效果較差；其次選用柱層析硅膠∶梔子黃色素（質(zhì)量比）為300∶1的比例進(jìn)行上樣洗脫，發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)了多個(gè)層次分明的清晰色帶且洗脫效果良好。最終決定選取柱層析硅膠∶梔子黃色素（質(zhì)量比）為150∶1、200∶1、250∶1、300∶1、350∶1、400∶1這 6種比例進(jìn)行上樣量因素的考察。

對(duì)6組不同吸附劑與上樣量比值的層析柱進(jìn)行洗脫，收集各流分。將收集好的各流分于40℃旋蒸迅速揮干有機(jī)溶劑，加適量純水稀釋后，采用HPLC法檢測(cè)其中藏紅花素I的純度，并計(jì)算藏紅花素I的得率和回收率。

藏紅花素I得率R得的計(jì)算公式為：

藏紅花素I回收率R收的計(jì)算公式為：

式中：m0為凍干后所得藏紅花素I粉末的質(zhì)量，mg；m1為上樣時(shí)所用的梔子黃色素樣品的質(zhì)量，mg；m2為上樣時(shí)所用的梔子黃色素樣品中所含藏紅花素I的質(zhì)量，mg。

2.3 HPLC檢測(cè)鑒定

2.3.1 色譜條件

高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）條件參考 GB5009.149-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中梔子黃的測(cè)定》中的標(biāo)準(zhǔn)。

色譜柱為Waters XTerra MS C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙酸-乙酸銨緩沖溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～8 min，80%A ～40%A；8 min ～8.1 min，40%A～30%A；8.1 min～13 min，30%A～2%A；13 min～20 min，2%A～80%A），柱溫為 30℃，進(jìn)樣量為10 μL，流速為 1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 440 nm。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將藏紅花素I系列標(biāo)準(zhǔn)工作液注入高效液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程：y=83.79x+62.781，R2=0.999 6（y 為色譜峰面積，x為藏紅花素I標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度）。

2.4 藏紅花素I體外抗氧化研究

2.4.1 相關(guān)工作液的配制

精確稱量10 mg制得的藏紅花素I粉末（梔子黃色素、抗壞血酸）至10 mL容量瓶中，加純水定容，得到濃度為1 mg/mL的藏紅花素I儲(chǔ)備液。臨用前將儲(chǔ)備液加純水稀釋，得到不同濃度的藏紅花素I工作液。

2.4.2 清除DPPH自由基試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[29-32]的試驗(yàn)方法并結(jié)合實(shí)際進(jìn)行調(diào)整設(shè)計(jì)。精確稱取2mg DPPH試劑粉末至50 mL容量瓶中，用無水乙醇超聲溶解、定容，得到濃度為0.1mmol/L的DPPH乙醇溶液，轉(zhuǎn)移至100 mL三角瓶中。每組取1 mL DPPH乙醇溶液與等體積的不同濃度的樣品工作液（藏紅花素I、梔子黃色素）混勻，在室溫下于暗處放置30 min。在波長(zhǎng)為517 nm處測(cè)定其吸光度，每組平行測(cè)定3次，取平均值。選用抗壞血酸工作液作為陽性對(duì)照。觀察記錄結(jié)果，計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。

DPPH自由基清除率RDPPH用如下公式計(jì)算：

式中：Ai為DPPH乙醇溶液與樣品工作液反應(yīng)后測(cè)得的吸光度；Aj為以水代替DPPH乙醇溶液時(shí)測(cè)得的吸光度；A0為以水代替樣品工作液作為空白對(duì)照時(shí)測(cè)得的吸光度。

2.4.3 清除ABTS自由基試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[33-35]的試驗(yàn)方法并結(jié)合實(shí)際來調(diào)整試驗(yàn)設(shè)計(jì)。精確稱取0.192g ABTS試劑粉末至50 mL容量瓶中，用純水超聲溶解、定容，得到濃度為7 mmol/L的ABTS溶液，轉(zhuǎn)移至100 mL三角瓶中。精確稱取0.378 g過硫酸鉀粉末加入至10 mL容量瓶中，用純水定容，于40℃水浴超聲溶解，得到濃度為140 mmol/L的過硫酸鉀溶液。準(zhǔn)確量取0.88 mL過硫酸鉀溶液與50 mL ABTS溶液混合，于室溫下在暗處反應(yīng)24 h形成ABTS自由基儲(chǔ)備液。使用前用純水稀釋80倍（至測(cè)樣時(shí)的空白對(duì)照在波長(zhǎng)為734 nm處的吸光度為0.7±0.02），得到ABTS工作液。每組取1 mL不同濃度的樣品工作液（藏紅花素I、梔子黃色素）與4 mL ABTS工作液混合，振蕩30 s，于室溫下在暗處反應(yīng)6 min。在波長(zhǎng)為734 nm處測(cè)定其吸光度，每組平行測(cè)定3次，取平均值。選用抗壞血酸工作液作為陽性對(duì)照。觀察記錄結(jié)果，計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。

ABTS自由基清除率RABTS用如下公式計(jì)算：

式中：Ai為ABTS工作液與樣品工作液反應(yīng)后測(cè)得的吸光度；Aj為以水代替ABTS工作液時(shí)測(cè)得的吸光度；A0為以水代替樣品工作液作為空白對(duì)照時(shí)測(cè)得的吸光度。

2.5 藏紅花素I穩(wěn)定性研究

2.5.1 藏紅花素I工作液的配制

精確稱量5 mg制得的藏紅花素I粉末，于50 mL容量瓶中，加純水定容，得到濃度為0.1 mg/mL的藏紅花素I儲(chǔ)備液。臨用前將儲(chǔ)備液加純水稀釋10倍（至溶液在440 nm處的吸光度為0.8±0.2）得到藏紅花素I工作液。

2.5.2 溫度對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響

量取一定量的藏紅花素I工作液于試管中，密封，分別避光放置于6種不同的溫度條件下（4℃冰箱、室溫25℃、40℃水浴、60℃水浴、80℃水浴、100℃水浴）。每2小時(shí)測(cè)定一次吸光度（測(cè)量前將待測(cè)溶液恢復(fù)至室溫），每組平行測(cè)量3次，取平均值。觀察記錄變化。

藏紅花素I損失率R損用如下公式計(jì)算：

式中：A0為樣品溶液放置前測(cè)得的吸光度；Ai為樣品溶液放置后測(cè)得的吸光度。

2.5.3 光照對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響

量取一定量的藏紅花素I工作液于試管中，密封，在室溫下分別放置于3種不同的光照條件下（黑暗避光處、室內(nèi)日光燈下、陽光直射下）。每2小時(shí)測(cè)定一次吸光度，每組平行測(cè)量3次，取平均值。觀察記錄變化。藏紅花素I損失率R損的計(jì)算公式同2.5.2。

2.5.4 pH值對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響

量取一定量的藏紅花素I工作液于試管中，用稀HCl和稀NaOH溶液調(diào)配出7種不同pH值梯度（2、4、6、7、8、10、12）的樣品溶液，密封，在室溫下放置于黑暗避光處。每2小時(shí)測(cè)定一次吸光度，每組平行測(cè)量3次，取平均值。藏紅花素I損失率R損的計(jì)算公式同2.5.2。

2.5.5 常用食品添加劑對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響

參考GB 2760-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》及相關(guān)文獻(xiàn)[36-38]，選取試驗(yàn)所用的食品添加劑種類及濃度。量取一定量的藏紅花素I工作液于試管中，分別加入1%、5%蔗糖，0.05%、0.1%山梨酸鉀，0.1%、0.5%抗壞血酸，超聲溶解，密封，在室溫下放置于黑暗避光處。每2小時(shí)測(cè)定一次吸光度。每組平行測(cè)量3次，取平均值，觀察記錄變化。藏紅花素I損失率R損的計(jì)算公式同2.5.2。

3 結(jié)果

3.1 洗脫劑因素考察

洗脫劑體系的考察結(jié)果如表1所示。

表1 不同的展開劑體系的薄層層析（thin layer chromatography，TLC）結(jié)果Table 1 TLC results of different expansion agent systems

其中部分薄層結(jié)果如圖1所示。

圖1 TLC結(jié)果Fig.1 TLC results

觀察結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，氯仿-甲醇的展開劑體系分離效果很差，而乙酸乙酯-甲醇-水的體系中部分配比的分離效果較好。乙酸乙酯∶甲醇∶水=100∶16.5∶13.5（體積比）的體系是《藥典》中對(duì)于西紅花中藏紅花素I的TLC檢測(cè)體系，但試驗(yàn)證明其可能不適用于分離梔子黃色素中的藏紅花素I成分。之后繼續(xù)嘗試加大展開劑的極性以增強(qiáng)分離效果，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯∶甲醇∶水=100∶20∶15（體積比）的比例對(duì)各組分的分離效果較好，但藏紅花素I樣品點(diǎn)的Rf值較低。而乙酸乙酯∶甲醇∶水=100∶25∶15（體積比）的比例中藏紅花素I的Rf值較適宜，但其上端樣品的Rf值較高。所以計(jì)劃首先選擇乙酸乙酯∶甲醇∶水=100∶20∶15（體積比）的比例洗脫掉前段其他組分后（洗脫劑用量達(dá)到1 400 mL左右時(shí)），加大其中甲醇的比例至乙酸乙酯∶甲醇∶水=100∶25∶15（體積比）來增強(qiáng)對(duì)藏紅花素I組分的洗脫效果。

3.2 上樣量因素考察

上樣量因素的考察結(jié)果如表2所示。

表2 吸附劑與上樣量之比與藏紅花素I純度關(guān)系Table 2 The relationship between the ratio of adsorbent and sample loading and the purity of crocin I

分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，可以確定本方法中最佳的吸附劑與上樣量之比為350∶1，在此比例下可得到藏紅花素I的純度經(jīng)HPLC檢測(cè)最高為98.39%，其得率為15.58%，回收率為50.42%。

梔子黃色素原樣品的HPLC圖譜如圖2所示。分離制備所得產(chǎn)品的HPLC圖譜如圖3所示。

圖2 梔子黃色素原樣品HPLC圖譜Fig.2 HPLC chromatogram of gardenia yellow pigment

圖3 分離制備所得產(chǎn)品HPLC圖譜Fig.3 HPLC chromatogram of the isolated product

3.3 藏紅花素I體外抗氧化研究

3.3.1 清除DPPH自由基試驗(yàn)

產(chǎn)品對(duì)DPPH自由基的清除能力如表3及圖4所示。

表3 產(chǎn)品對(duì)DPPH自由基清除能力（IC50）Table 3 DPPH free radical scavenging ability of product（IC50）

圖4 產(chǎn)品對(duì)DPPH自由基清除能力Fig.4 DPPH free radical scavenging ability of product

由表3與圖4可知，在藏紅花素I和梔子黃色素工作液的濃度分別達(dá)到39.62 μg/mL與54.35 μg/mL時(shí)，可以半數(shù)清除濃度為0.1 mmol/L的DPPH自由基；在0～200 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，各樣品工作液清除DPPH自由基的效果隨著樣品濃度的上升而增強(qiáng)；而在濃度相同的情況下，藏紅花素I清除DPPH自由基的效果較其分離純化前的原料產(chǎn)品梔子黃色素略有上升。試驗(yàn)結(jié)果表明，藏紅花素I和梔子黃色素均有一定的抗氧化活性，且經(jīng)梔子黃色素分離純化后所得到的藏紅花素I的抗氧化能力略有所加強(qiáng)。

3.3.2 清除ABTS自由基試驗(yàn)

產(chǎn)品對(duì)ABTS自由基的清除能力如表4及圖5所示。

表4 產(chǎn)品對(duì)ABTS自由基的半數(shù)清除濃度IC50Table 4 ABTS free radical scavenging ability of product（IC50）

圖5 產(chǎn)品對(duì)ABTS自由基的清除效果Fig.5 ABTS free radical scavenging ability of product

由表4與圖5可知，在藏紅花素I和梔子黃色素工作液的濃度分別達(dá)到40.97 μg/mL與60.17 μg/mL時(shí)，可以半數(shù)清除濃度為0.1 mmol/L的ABTS自由基；在0～200 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，各樣品工作液清除ABTS自由基的效果隨著樣品濃度的上升而增強(qiáng)；而在濃度相同的情況下，藏紅花素I清除ABTS自由基的效果較其分離純化前的原料產(chǎn)品梔子黃色素略有上升。試驗(yàn)結(jié)果表明，藏紅花素I和梔子黃色素均有一定的抗氧化活性，且經(jīng)梔子黃色素分離純化后所得到的藏紅花素I的抗氧化能力略有所加強(qiáng)。

3.4 藏紅花素I穩(wěn)定性研究

3.4.1 溫度對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響

溫度對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響如圖6所示。

圖6 溫度對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響Fig.6 Effects of temperature on stability of crocin I

由圖6可以發(fā)現(xiàn)，藏紅花素I在4℃和25℃的環(huán)境下整體損失率較低，并且趨勢(shì)較穩(wěn)定，在放置12小時(shí)之后損失率只有2.59%和5.23%；在40℃和60℃的環(huán)境下?lián)p失率略有上升，放置12小時(shí)后分別達(dá)到了12.13%和19.26%；在80℃和100℃的環(huán)境下藏紅花素I的整體損失率大幅上升，并且其損失速率也大幅升高，在放置12小時(shí)后達(dá)到了44.29%和72.98%。由此可見，溫度因素對(duì)藏紅花素I的穩(wěn)定性影響較大，高溫環(huán)境對(duì)其的破壞性較高。說明含有藏紅花素I成分的產(chǎn)品在儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)保持在40℃以下，并且應(yīng)避免接觸60℃以上的環(huán)境。

3.4.2 光照對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響

光照對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響如圖7所示。

圖7 光照對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響Fig.7 Effects of light on stability of crocin I

由圖7觀察試驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，藏紅花素I在黑暗避光處較為穩(wěn)定，放置12小時(shí)后其損失率只有4.88%；在室內(nèi)日光燈下的損失率略有上升，放置12小時(shí)后達(dá)到了18.84%；在陽光直射下的損失率大幅上升，放置12小時(shí)后達(dá)到了73.84%。由此可見光照因素對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響較大，強(qiáng)光對(duì)其的破壞性較高。說明含有藏紅花素I成分的產(chǎn)品在儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)避光保存，并且避免強(qiáng)光直射。

3.4.3 pH值對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響

pH值對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響如圖8所示。

圖8 pH值對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響Fig.8 Effects of pH on stability of crocin I

由圖8可以發(fā)現(xiàn)，藏紅花素I在pH值為6的環(huán)境下較為穩(wěn)定，放置12小時(shí)后損失率只達(dá)到了5.59%；在pH值=7、8的環(huán)境下的損失率略有上升，放置12小時(shí)后損失率分別達(dá)到了14.13%和23.35%；在pH值=2、4的強(qiáng)酸環(huán)境和10、12的強(qiáng)堿環(huán)境下?lián)p失率都大幅上升，放置12小時(shí)后分別達(dá)到了59.97%、55.27%和57.32%、66.17%。由此可見，pH值因素對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響較大，強(qiáng)酸和強(qiáng)堿環(huán)境對(duì)其破壞性均較高，而藏紅花素I工作液的初始pH值為6.2左右，其在pH值為6的環(huán)境下較為穩(wěn)定。說明含有藏紅花素I成分的產(chǎn)品應(yīng)儲(chǔ)存在pH值為6左右的環(huán)境中，并且避免接觸強(qiáng)酸性和強(qiáng)堿性的環(huán)境。

3.4.4 常用添加劑對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響

常用添加劑對(duì)對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響如圖9所示。

圖9 常用食品添加劑對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響Fig.9 Effects of some common food additives on stability of crocin I

由圖9可以發(fā)現(xiàn)，藏紅花素I在0.05%山梨酸鉀的環(huán)境中較為穩(wěn)定，而在0.1%山梨酸鉀的環(huán)境中損失率略有上升，放置12小時(shí)后其損失率分別為4.99%和7.37%；在1%和5%蔗糖的環(huán)境中損失率有一定的上升，放置12小時(shí)后分別達(dá)到了12.49%和13.63%；在0.1%和0.5%抗壞血酸的環(huán)境中的損失率較一般略有下降，放置12小時(shí)后其損失率只有4.04%和3.92%。由此可見，山梨酸鉀對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性的影響不大；蔗糖對(duì)藏紅花素I穩(wěn)定性略有影響，并且在1%和5%蔗糖的濃度梯度下差異不大；而抗壞血酸則對(duì)藏紅花素I有一定的保護(hù)作用，并且在0.1%和0.5%抗壞血酸的濃度梯度下差異不大。試驗(yàn)結(jié)果表明，藏紅花素I可以與1%、5%蔗糖和0.05%、0.1%山梨酸鉀和0.1%、0.5%抗壞血酸進(jìn)行聯(lián)用，并且其與0.1%、0.5%抗壞血酸聯(lián)用還可提高其穩(wěn)定性。

4 總結(jié)與討論

本研究采用硅膠柱層析法從梔子黃色素中分離制備出了高純度的藏紅花素I產(chǎn)品，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度達(dá)98.39%，得率為15.58%，回收率為50.42%。體外抗氧化試驗(yàn)結(jié)果表明，藏紅花素I具有較強(qiáng)的抗氧化活性，并且可以推測(cè)出藏紅花素I為梔子黃色素中主要的抗氧化活性成分之一。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，藏紅花素I受高溫、強(qiáng)光照射、強(qiáng)酸強(qiáng)堿環(huán)境影響均會(huì)產(chǎn)生一定量的損失。含有藏紅花素I成分的產(chǎn)品應(yīng)貯存于低溫、避光、pH值為6的環(huán)境中，并且可以與適量的抗壞血酸聯(lián)用以提高其穩(wěn)定性。